Спосіб депонування miscanthus giganteus у культурі in vitro

Реферат: UA 78946 U UA 78946 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, зокрема для збереження і депонування цінних селекційних матеріалів. Важливим є не тільки створення вихідного матеріалу за допомогою біотехнологічних методів, а і їх збереження протягом тривалого часу. Депонування забезпечує за сукупності індивідуально підібраних умов для кожної культури таких, як освітлення, температурний режим, стан рослини, живильне середовище з додаванням різних мінеральних та гормональних компонентів довготривале та економічно доцільне збереження. Відомим і найбільш близьким до корисної моделі є метод збереження генетичного різноманіття повільно ростучих in vitro колекції цукрових і кормових буряків [Редько В.І., Роїк М.В., Недяк Т.М., Бех Н.С., Слуцька Н.П. Повільно ростучі in vitro колекції цукрових і кормових буряків як метод збереження їх генетичного різноманіття // Зб. Наук. праць ІЦБ. – Κ.: Аграрна наука. - 2008. - С. 231-234]. Даний метод базується на тому, що використовують культуральні рослини цукрових і кормових буряків, які депонують на живильному середовищі із збільшеною концентрацією осмотика - цукроза - 60 г/л. У середовищі проводять збіднення його за рахунок зменшення мінеральних і гормональних компонентів та використовують ¼ С200 - Температура становить 4±1 °C при інтенсивності освітлення 500 лк. Період між пересадками бруньок цукрових і кормових буряків до 6-12 місяців. Відомий і пропонований способи депонування мають спільні ознаки: використання культуральних рослин, збільшення концентрації цукрози, зменшення гормональних компонентів у живильному середовищі, використання живильного середовища, отримання життєздатних бруньок. Проте, використання ¼ С200 та зменшення мінеральних і гормональних компонентів не забезпечує у міскантусу довготривалого періоду між пересадками. Слід відмітити і про недоцільність використання нафтилоцтової кислоти (НОК) і індолілоцтової кислоти (ІОК) 0,8 мг/л. Для рослин є не достатнім освітлення 500 лк та температура культивування 4±1 °C, за таких умов відбувається різке пожовтіння та відмирання. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб депонування Miscanthus giganteus у культурі in vitro, що забезпечить можливість тривалий час не проводити пересаджування матеріалу, дозволить отримати високий рівень рентабельності при зберіганні рослин. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі збереження генетичного різноманіття повільно ростучих in vitro колекцій цукрових і кормових буряків використовують культуральні рослини цукрових і кормових буряків, які депонують на живильному середовищі із збільшеною концентрацією осмотика - сахароза - 60 г/л. Для депонування застосовують модифіковане живильне середовище за прописом Гамборга і Евелега (С 200) та беруть лише ¼ частину мінеральних і гормональних компонентів. Культивування проводять при температурі 4±1 °C при інтенсивності освітлення 500 лк. Період між пересадками бруньок цукрових і кормових буряків становить від 6 до 12 місяців. Кількість новоутворених пагонів 3-5 штук. Запропонований спосіб депонування Miscanthus giganteus у культурі in vitro включає використання культурального Miscanthus giganteus, який висаджують на живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга, яке модифіковане бензиламінопурином (БАП) - 0,4-0,6 мг/л, цукрозою - 40,0-60,0 мг/л гібереліновою кислотою 0,4-0,6 мг/л та ІОК - 0,3 мг/л. Температура культивування становить 10±2 °C, а освітлення - 3000-4000 лк. Кількість новоутворених пагонів 8 штук за термін депонування 10 місяців. Новими відмінними від існуючого прототипу ознаками є: - використання культуральних рослин Miscanthus giganteus; - депонування рослин в укоріненому стані; - використання модифікованого живильного середовища Мурасіге і Скуга з додавання БАП 0,4-0,6 мг/л, ІОК - 0,3 мг/л, цукрози - 40,0-60,0 г/л, гіберелінової кислоти - 0,4-0,6 мг/л; - використання повного набору мінеральних компонентів у живильному середовищі; - депонування рослин в укоріненому стані; - температура культивування - 10±2 °C; - освітлення - 3000-4000 лк. Відмінні від прототипу ознаки при взаємодії з відомими дозволяють отримати високий вихід стерильних та життєздатних новоутворених пагонів, здешевити та удосконалити склад живильного середовища, збільшити термін депонування до 10 місяців, отримати вищий коефіцієнт розмноження, підвищити рівень рентабельності. Ефективність нового способу депонування міскантусу у культурі in vitro вивчали на Miscanthus giganteus. 1 UA 78946 U 5 10 Згідно з отриманими результатами досліджень видно, що заміна модифікованого живильного середовища за прописом Мурасіге і Скуга забезпечує отримання 6 штук новоутворених пагонів за термін депонування 10 місяців. Доцільним є використання повного набору мінеральних компонентів у живильному середовищі та додавання БАП - 0,4-0,6 мг/л, ІОК - 0,3 мг/л, цукрози - 40,0-60,0 г/л, гіберелінової кислоти - 0,4-0,6 мг/л, що забезпечує рослини усіма необхідними компонентами. Збільшення освітлення до 3000-4000 лк та температури з 4±1 °C до 10±2 °C дозволяє отримати зелені, а не з пожовтінням, рослини. Спосіб депонування Miscanthus giganteus у культурі in vitro здійснюється таким чином: використовують Miscanthus giganteus, який висаджують на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга, у яке збільшено концентрацію додавання БАП 0,4-0,6 мг/л, ІОК 0,3 мг/л, цукрози - 40,0-60,0 г/л, гіберелінової кислоти - 0,4-0,6 мг/л. Термін депонування становить 10 місяців. Культуральні рослини в стані укорінення та при освітленні 3000-4000 лк і температурі культивування 10±2 °C дають можливість отримати 6 штук новоутворених пагонів (див. таблицю). 15 Таблиця Показники ефективності використання запропонованого способу депонування Miscanthus giganteus у культурі in vitro Показники Мінеральна основа середовища для депонування Цукроза, г/л ІОК, мг/л НОК, мг/л БАП, мг/л Гіберелінова кислота, мг/л Кількість новоутворених пагонів, шт. Довжина фотоперіоду, годин Освітлення, лк Температура культивування, °C Стан розвитку Коефіцієнт розмноження Термін депонування, місяців 20 Відомий спосіб Запропонований спосіб ¼ С200 MS 60,0 0,8 0,8 0,1 40,0-60,0 0,3 0,4-0,6 0,4-0,6 6 16 3000-4000 10±2 укорінені 6 10 3-5 16 500 4±1 не укорінені 3-5 6 Впровадження запропонованої корисної моделі сприятиме отриманню високого виходу стерильних та життєздатних новоутворених пагонів, дозволить здешевити та удосконалити склад живильного середовища, збільшити термін депонування до 10 місяців, отримати вищий коефіцієнт розмноження, підвищити рівень рентабельності. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 30 Спосіб депонування Miscanthus giganteus у культурі in vitro, що включає використання культуральних рослин, зменшення гормональних компонентів у живильному середовищі, збільшення концентрації цукрози, використання живильного середовища, отримання життєздатних бруньок, який відрізняється тим, що використовують Miscanthus giganteus, який знаходиться в укоріненому стані, пересаджують на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга з повним набором компонентів та додають гіберелінову кислоту - 0,4-0,6 мг/л, бензиламінопурин (БАП) - 0,4-0,6 мг/л, індолілоцтову кислоту (ІОК) - 0,3 мг/л, цукрозу - 40,060,0 г/л, при цьому температура культивування становить 10±2 °C, а освітлення - 3000-4000 лк. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2