Спосіб культивування фібробластів шкіри щурів

Реферат: Спосіб культивування фібробластів шкіри щурів включає інкубування клітин в живильному середовищі DMEM, що містить ембріональну телячу сироватку, та додаткове введення екстракту кріоконсервованих фрагментів шкіри поросят. UA 81429 U (54) СПОСІБ КУЛЬТИВУВАННЯ ФІБРОБЛАСТІВ ШКІРИ ЩУРІВ UA 81429 U UA 81429 U 5 10 15 20 25 Корисна модель належить до галузі клітинної біології і може бути використана для вирощування фібробластів шкіри щурів для розробки нових препаратів. Відомий спосіб культивування фібробластів, в якому фібробласти культивують в живильному середовищі DMEM з додаванням 10 % ембріональної телячої сироватки (ETC) [1]. Недоліком цього способу є використання високої концентрації ETC, що робить можливим контамінацію клітин вірусами від тварин та забруднення їх високомолекулярними білками сироватки крові (ВБСК), які можуть викликати імунну відповідь при введенні в організм. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити відомий спосіб культивування фібробластів шкіри щурів таким чином, щоб він забезпечив можливість знизити вміст ETC в середовищі інкубування, і за рахунок цього зменшити ризик контамінації та забруднення клітин ВБСК. Поставлена задача вирішується тим, що в способі культивування фібробластів шкіри щурів, який передбачає інкубування клітин в середовищі DMEM, що містить ETC, згідно з корисною моделлю, в середовище додатково вводять екстракт кріоконсервованих фрагментів шкіри поросят (ЕКФШП) до кінцевої концентрації 1-1,5 мкг/мл, a ETC беруть в концентрації 2 %. Введення ЕКФШП дозволяє знизити концентрацію ETC до 2 %, що значно зменшує ризик контамінації та забруднення клітин ВБСК. Приклад здійснення способу. Екстракт одержували з кріоконсервованих фрагментів шкіри поросят шляхом їх інкубації в фізіологічному розчині протягом 60 хв. Для видалення високомолекулярних термолабільних білків екстракт прогрівали на киплячій водяній бані та фільтрували. Одержані екстракти стерилізувалися автоклавуванням [2]. Первинну культуру фібробластів шкіри новонароджених щурів отримували шляхом вільного виселення клітин з фрагментів шкіри і послідуючого пересівання фібробластів. Одержані фібробласти інкубували в живильному середовищі DMEM з додавання 10 % ETC згідно з прототипом, а в дослідні зразки додавали 2 % ETC та вносили ЕКФШП до кінцевої концентрації пептидів 0,1, 0,5, 1,0 і 1,5 мкг/мл. Метаболічну активність клітин оцінювали по відновленню нетоксичного редокс-індикатора AlamarBlue. Дані наведені в таблиці. Таблиця Метаболічна активність фібробластів в процентах від метаболічної активності при культивуванні з 10 % ETC Середовище культивування DMEM з 2 % ETC DMEM з 2 % ЕТС ЕКФШП 0,1 мкг/мл DMEM з 2 % ЕТС ЕКФШП 0,5 мкг/мл DMEM з 2 % ЕТС ЕКФШП 1 мкг/мл DMEM з 2 % ЕТС ЕКФШП 1,5 мкг/мл 2 86,5 + + + + Строк культивування, доба 4 64,1 7 51,2 104,8 84,7 79,3 89,1 82,5 80,3 98,8 97,8 95,9 99,3 101,3 94,3 30 35 40 З таблиці видно, що при зменшенні концентрації ETC в середовищі культивування до 2 % та додаванні ЕКФШП в кінцевій концентрації пептидів 1 і 1,5 мкг/мл зберігається метаболічна активність фібробластів нарівні, який спостерігається в контрольних пробах з 10 % ETC. Таким чином при додаванні ЕКФШП забезпечується можливість знизити концентрацію ETC без втрати метаболічної активності фібробластів. Джерела інформації: 1. Пат. РФ № 2382077, МПК C12N 5/071. Опубл. 20.02.2010. Способ выделения и культивирования аутологичных дермальных фибробластов для стимуляции регенеративних процессов и заместительной терапии. 2. Пат. України № 64381 А, МПК А61К 35/12. Опубл. 16.02.2004. Спосіб отримання екстрактів ксеногенних органів. 1 UA 81429 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Спосіб культивування фібробластів шкіри щурів, який включає інкубування клітин в живильному середовищі DMEM, що містить ембріональну телячу сироватку, який відрізняється тим, що в живильне середовище додатково вводять екстракт кріоконсервованих фрагментів шкіри поросят до кінцевої концентрації пептидів 1-1,5 мкг/мл, а ембріональну телячу сироватку беруть в концентрації 2 %. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2