Вакцинний авірулентний штам vc-2/аv clostridium chauvoei для виготовлення живої спорової вакцини проти емфізематозного карбункулу великої рогатої худоби і овець

Реферат: UA 82498 U UA 82498 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі ветеринарної мікробіології, зокрема до біотехнології нового вакцинного авірулентного штаму Clostridium chauvei VC-2/av, який використовується у виробництві живої спорової вакцини проти емфізематозного карбункулу. Задача корисної моделі отримати штам для вітчизняної живої спорової вакцини проти емфізематозного карбункулу великої рогатої худоби і овець. Використання даного штаму у складі вакцини дозволяє отримати високоефективний біологічний препарат. Даний штам був виділений із ґрунту пасовища для великої рогатої худоби стаціонарно неблагополучного щодо емфізематозного карбункулу пункту в лабораторії відділення крайової епізоотології Інституту сільського господарства Західного Полісся НААНУ і депонований та зберігається у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів, м. Київ, вулиця Донецька, 30, Україна, зареєстрований за номером 535; клас Schizomycetes, родина Bacillaceae, рід Clostridium, вид Clostridium chauvoei. Авірулентний штам Clostridium chauvoei VC-2/av характеризується наступними ознаками та властивостями. Культурально-морфологічні особливості. Строгий анаероб. Грамлабільна (молоді культури грампозитивні, старі грамнегативні) рухлива паличка, яка утворює спори. Спори розташовуються в центрі палички або підкінцево, що надають мікробу форми лимона, груші, точильного каменя. Газоутворення на рідких живильних середовищах незначне. На кров'яному глюкозному м'ясопептонному агарі росте у вигляді дрібних гладких колоній, що за формою нагадують перламутрові ґудзики або виноградний лист, з добре вираженою зоною прозорого гемолізу. Біохімічні властивості. Ферментує глюкозу, мальтозу, лактозу і сахарозу, не розщеплює гліцерин, маніт, дульцит і саліцин, повільно розріджує желатину, не викликає почорніння мозкового середовища. Патогенні властивості. В результаті тривалих пересівів, що здійснювалися за певною схемою впродовж декількох років, штам безповоротно втратив свої патогенні властивості для сприйнятливих тварин і є авірулентним. Імуногенні та антигенні властивості. Забезпечує захист щеплених лабораторних тварин проти зараження летальними дозами контрольного штаму. Штам має високі антигенні властивості. Так, триразове внутрішньом'язове введення антигену (формалінізовані вегетативні клітини) у зростаючих дозах кролям викликало в них утворення аглютинінів до гомологічного антигену в титрі 1:533,3±142 і антитіл, які виявляли з допомогою РНІФ, в титрі 1:213,3±56,9, що свідчить про високу антигенність вегетативних клітин штаму. Генетичні особливості штаму. Фагів у Clostridium chauvoei не виявлено. Чутливий до пеніциліну, стрептоміцину, неоміцину, мономіцину, енрофлоксацину, байтрилу. Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Для культивування штаму використовують найчастіше середовище Кітт-Тароцці та кров'яний чи сироватковий глюкозний м'ясопептонний агар. Приготування середовища Кітт-Тароцці. Сиру печінку великої рогатої худоби ріжуть кусками по 250-300 г, заливають рівним за масою об'ємом водопровідної води і варять протягом 1 год. Екстракт фільтрують через ватний фільтр і змішують з м'ясопептонним бульйоном у співвідношенні 1:3. Суміш доводять до кипіння і додають 1,25 г натрію хлориду на 1 л бульйону. Доводять рН до 8,2, кип'ятять 15 хв., фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у 3 пробірки по 10 см або в інший посуд і додають дрібно нарізані кусочки (1-2 г) печінки з розрахунку 10 % до об'єму бульйону у посудині. На поверхню бульйону нашаровують вазелінову олію товщиною шару до 1 см. Бульйон з кусочками печінки стерилізують при 120 °C протягом 40 хв. На середовищі Кітт-Тароцці на 10-12-ій год. інкубації за t 37 °C утворюється рівномірна каламуть, за якою з'являються ознаки легкого газоутворення, культура видає відчутний запах згірклого масла; до 20-24-ої год. бульйон просвітлюється, на дні пробірки (флакона) утворюється помітний білуватий пухкий осад. 3 Приготування кров'яного глюкозного м'ясопептонного агару (КГМПА). До 100 см прогрітого і повністю розплавленого 3 %-ого м'ясопептонного агару з рН 7,4-7,6 додають 2 % глюкози, охолоджують до 45 °C і додають (обережно, щоб не утворилися бульбашки повітря) 15-20 % баранячої чи бичачої дефібринованої крові і розливають у стерильні бактеріологічні чашки. Приготування сироваткового глюкозного м'ясопептонного агару (СГМПА). Вся процедура проводиться подібним чином, як і при приготуванні КГМПА з тією лише відмінністю, що замість крові використовують стерильну сироватку великої рогатої худоби чи овець. 1 UA 82498 U 5 10 Штам зберігають: а) в ліофілізованому вигляді при температурі від 2 °C до 6 °C протягом 5 років. Як захисне середовище при ліофілізації використовують суміш із 1 частини культури штаму на середовища Кітт-Тароцці і 1 частини середовища Файбича (10 % глюкози, 1 % желатину); б) на середовищі Кітт-Тароцці в холодильнику за t 2-4 °C; пересівають 1 раз на 3 місяці; для більш повного спороутворення культуру штаму інкубують за t 37 °C впродовж 1-2 тижнів, а тоді ставлять в холодильник на зберігання до наступного пересіву. Стабільність авірулентних властивостей штаму і типових для Clostridium chauvoei морфологічних ознак і тинкторіальних, культуральних, біохімічних та антигенних властивостей дозволило використовувати його для виробництва живої спорової вакцини. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Вакцинний антивірусний штам VC-2/av Clostridium chauvoei для виготовлення живої спорової вакцини проти емфізематозного карбункулу великої рогатої худоби та овець, який депонований і зберігається у Депозитарії мікроорганізмів Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 535. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2