Вакцинний штам vpb-7 clostridium perfringens (тип в) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту овець, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, зло

Реферат: Вірулентний штам VPb-7 Clostridium perfringens (тип В) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. Штам депонований і зберігається у Депозитарії мікроорганізмів науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 538. UA 82499 U (12) UA 82499 U UA 82499 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної мікробіології, зокрема до біотехнології нового вітчизняного вакцинного штаму VPb-7 Clostridium perfringens (тип В), який використовується у виробництві полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. Задача корисної моделі - це отримання штаму для вітчизняної полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят на основі використання вітчизняних високоімуногенних штамів. Таким чином, використання даного штаму у складі вакцини дозволяє отримати високоефективний біологічний препарат. Даний штам був виділений від трупа ягняти, яке хворіло на анаеробну дизентерію, в лабораторії відділення крайової епізоотології Інституту сільського господарства Західного Полісся НААНУ і депонований та зберігається у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів, м. Київ, вулиця Донецька, 30, Україна; зареєстрований за номером 538; клас Schizomycetes, родина Васіllасеае, рід Clostridium, вид Clostridium perfringens (тип В). Новий вітчизняний вакцинний штам VPb-7 Clostridium perfringens (тип В) характеризується наступними ознаками та властивостями. Культурально-морфологічні особливості. Строгий анаероб. Це короткі товсті (довжина 4-8 і ширина 1-1,5 мкм) із заокруглено обрубленими кінцями, грамлабільні (молоді культури грампозитивні, старі грамнегативні) нерухомі палички, які утворюють спори; спори розташовуються в центрі палички або підкінцево. Газоутворення на рідких живильних середовищах інтенсивне. На кров'яному глюкозному м'ясопептонному агарі утворює випуклі з рівними краями і гладкою поверхнею (S-форма) або шорсткі із нерівними краями (R-форма) колонії, які оточені зоною непрозорого гемолізу. Біохімічні властивості. Ферментує із утворенням кислоти і газу глюкозу, мальтозу, сахарозу і лактозу, не розщеплювали гліцерин, маніт, дульцит і саліцин; швидко "згортає" молоко з утворенням казеїнового згустку, не викликає почорніння мозкового середовища, повільно розріджує желатину, не розріджує звернуту сироватку. Патогенні властивості. Сприйнятливі кролі, морські свинки і білі миші; морські свинки, 3 заражені підшкірно в ділянці паху 24-годинною культурою дозою 1 см , гинуть впродовж 17-18 год. із характерними патологоанатомічними змінами - шкіра на місці ін'єкції легко відділяється від м'язів; набряк та інфільтрат поширюються на вся підшкірну клітковину живота та грудної стінки; кишечник сильно здутий. Імуногенні властивості. Забезпечує захист щеплених лабораторних тварин проти зараження летальними дозами контрольного штаму. Антигені властивості. Штам володіє високою антигенністю. Трьохразове внутрішньо-м'язове введення антигену (формалінізовані вегетативні клітини) у зростаючих дозах кроликам викликало в них утворення аглютинінів до гомологічного антигену в титрі 1:853,3±248,9 і антитіл, які виявляли з допомогою РНІФ, в титрі 1:426,7±99,6, що свідчить про високу антигенність вегетативних клітин штаму. Генетичні особливості штаму. Фагів у Clostridium perfringens не виявлено. Ауксотрофність не встановлена. Чутливий до гентаміцину, стрептоміцину, неоміцину, мономіцину, пеніциліну, енрофлоксацину, байтрилу. Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Для культивування штаму використовують найчастіше середовище Кітт-Тароцці та кров'яний чи сироватковий глюкозний м'ясопептонний агар. Приготування середовища Кітт-Тароцці. Сиру печінку великої рогатої худоби ріжуть кусками по 250-300 г, заливають рівним за масою об'ємом водопровідної води і варять протягом 1 год. Екстракт фільтрують через ватний фільтр і змішують з м'ясопептонним бульйоном у співвідношенні 1:3. Суміш доводять до кипіння і додають 1,25 г натрію хлориду на 1 л бульйону. Доводять рН до 8,2, кип'ятять 15 хв., фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у 3 пробірки по 10 см або в іншу посуду і додають дрібно нарізані кусочки (1-2 г) печінки з розрахунку 10 % до об'єму бульйону у посудині. На поверхню бульйону нашаровують вазелінову олію товщиною шару до 1 см. Бульйон з кусочками печінки стерилізують при 120 °C протягом 40 хв. На середовищі Кітт-Тароцці на 10-12-ій год. інкубації за t 37 °C утворюється легка каламуть, згодом помірне газоутворення із наступним просвітлінням бульйону, яке наступає на 18-24-ій год., на дні пробірки (флакона) утворюється помітний білуватий рихлий осад. 1 UA 82499 U 3 5 10 15 Приготування кров'яного глюкозного м'ясопептонного агару (КГМПА). До 100 см прогрітого і повністю розплавленого 3 %-ого м'ясопептонного агару з рН 7,4-7,6 додають 2 % глюкози, охолоджують до 45 °C і додають (обережно, щоб не утворилися бульбашки повітря) 15-20 % баранячої чи бичачої дефібринованої крові і розливають у стерильні бактеріологічні чашки. Приготування сироваткового глюкозного м'ясопептонного агару (СГМПА). Вся процедура проводиться подібним чином як і при приготуванні КГМПА з тією лише відмінністю, що замість крові використовують стерильну сироватку великої рогатої худоби чи овець. Штам зберігають: а) в ліофілізованому вигляді при температурі від 2 °C до°C протягом 5 років. Як захисне середовище при ліофілізації використовують суміш із 1 частини культури штаму на середовища Кітт-Тароцці і 1 частини середовища Файбича (10 % глюкози, 1 % желатину); б) на середовищі Кітт-Тароцці в холодильнику за t 2-4 °C; пересівають 1 раз на 3 місяці; для більш повного спороутворення культуру штаму інкубують за t 37 °C впродовж 1-2 тижнів, а тоді ставлять в холодильник на зберігання до наступного пересіву. Стабільність імуногенних та антигенних властивостей штаму і типових для Clostridium perfringens морфологічних ознак і тинкторіальних, культуральних, біохімічних та антигенних властивостей дозволяє використовувати його для виробництва полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту овець, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Вірулентний штам VPb-7 Clostridium perfringens (тип В) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят, що депонований і зберігається у Депозитарії мікроорганізмів науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 538. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2