Вакцинний штам vnb-1 clostridium novyi (тип в) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксид-алюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного на

Реферат: Вакцинний штам VNb-1 Clostridium novyi (тип В) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксид-алюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят, що депонований і зберігається у Депозитарії мікроорганізмів науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 536. UA 82907 U (12) UA 82907 U UA 82907 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної мікробіології, зокрема до біотехнології нового вітчизняного вакцинного штаму VNb-1 Clostridium novyi (тип В), який використовується у виробництві полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. В основу корисної моделі поставлено задачу отримати штам для вітчизняної полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят на основі використання вітчизняних високоімуногенних штамів. Використання даного штаму у складі вакцини дозволяє отримати високоефективний біологічний препарат. Даний штам був виділений від трупа вівці, яка хворіла на некротичний гепатит в лабораторії відділення крайової епізоотології Інституту сільського господарства Західного Полісся НААНУ і депонований та зберігається у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів, м. Київ, вулиця Донецька, 30, Україна; зареєстрований за номером 536; клас Schizomycetes, родина ВасiIIасеае, рід Clostridium, вид Clostridium novyi (тип В). Вакцинний штам VNb-1 Clostridium novyi (тип В) характеризується наступними ознаками та властивостями. Культурально-морфологічні особливості. Строгий анаероб. Це великі (довжина 5-20 і ширина 1-2 мкм), грамлабільні (молоді культури грампозитивні, старі грамнегативні) рухливі палички, які утворюють спори; спори розташовуються в центрі палички або підкінцево. Газоутворення на рідких живильних середовищах незначне. На кров'яному глюкозному м'ясопептонному агарі утворює сірі плоскі шерехуваті колонії з нерівними порізаними краями у вигляді виростів та паралельних завитків із вираженою зоною прозорого гемолізу. Біохімічні властивості. Ферментує глюкозу і мальтозу, не розщеплює лактозу і сахарозу, гліцерин, манніт і дульцит, повільно розріджує желатину, не викликає почорніння мозкового середовища. Патогенні властивості. Сприйнятливі кролі, морські свинки і білі миші; морські свинки, 3 заражені підшкірно в ділянці паху 24-годинною культурою в дозі 1 см , гинуть впродовж 19-20 год. із характерними патологоанатомічними змінами - драглистий солом'яно-жовтого кольору набряк підшкірної клітковини, який простягається від місця уведення культури аж до підгрудка включно; в мазках-відбитках паренхіматозних органів - грампозитивні великі із заокругленими або обрубаними кінцями палички. Імуногенні властивості. Забезпечує захист щеплених лабораторних тварин проти зараження летальними дозами контрольного штаму. Антигені властивості. Штам має високу антигенність. Так, триразове внутрішньо-м'язове введення антигену (формалінізовані вегетативні клітини) у зростаючих дозах кроликам викликало в них утворення аглютинінів до гомологічного антигену в титрі 1:746,7±142,2 і антитіл, які виявляли з допомогою РНІФ, в титрі 1:298,7±56,9, що свідчить про високу антигенність вегетативних клітин штаму. Генетичні особливості штаму. Фагів у Clostridium novyi не виявлено. Ауксотрофність не встановлена. Чутливий до тетрацикліну, пеніциліну, стрептоміцину, неоміцину, мономіцину, енрофлоксацину, байтрилу. Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Для культивування штаму використовують найчастіше середовище Кітт-Тароцці та кров'яний чи сироватковий глюкозний м'ясо-пептонний агар. Приготування середовища Кітт-Тароцці. Сиру печінку великої рогатої худоби ріжуть кусками по 250-300 г, заливають рівним за масою об'ємом водопровідної води і варять протягом 1 год. Екстракт фільтрують через ватний фільтр і змішують з м'ясо-пептонним бульйоном у співвідношенні 1:3. Суміш доводять до кипіння і додають 1,25 г натрію хлориду на 1 л бульйону. Доводять рН до 8,2, кип'ятять 15 хв., фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у 3 пробірки по 10 см або в іншу посуду і додають дрібно нарізані кусочки (1-2 г) печінки з розрахунку 10 % до об'єму бульйону у посудині. На поверхню бульйону нашаровують вазелінову олію товщиною шару до 1 см. Бульйон з кусочками печінки стерилізують при 120 °C протягом 40 хв. На середовищі Кітт-Тароцці на 10-12-ій год. інкубації за t 37 °C утворюється рівномірна каламуть, за якою з'являються ознаки легкого газоутворення, культура видає відчутний запах згірклого масла; до 20-24-ої год. бульйон просвітлюється, на дні пробірки (флакона) утворюється помітний білуватий рихлий осад. 1 UA 82907 U 3 5 10 15 Приготування кров'яного глюкозного м'ясо-пептонного агару (КГМПА). До 100 см прогрітого і повністю розплавленого 3 %-ого м'ясо-пептонного агару з рН 7,4-7,6 додають 2 % глюкози, охолоджують до 45 °C і додають (обережно, щоб не утворилися бульбашки повітря) 15-20 % баранячої чи бичачої дефібринованої крові і розливають у стерильні бактеріологічні чашки. Приготування сироваткового глюкозного м'ясо-пептонного агару (СГМПА). Вся процедура проводиться подібним чином як і при приготуванні КГМПА з тією лише відмінністю, що замість крові використовують стерильну сироватку великої рогатої худоби чи овець. Штам зберігають: а) в ліофілізованому вигляді при температурі від 2 °C до 6 °C протягом 5 років. Як захисне середовище при ліофілізації використовують суміш із 1 частини культури штаму на середовища Кітт-Тароцці і 1 частини середовища Файбича (10 % глюкози, 1 % желатину); б) на середовищі Кітт-Тароцці в холодильнику за t 2-4 °C; пересівають 1 раз на 3 місяці; для більш повного спороутворення культуру штаму інкубують за t 37 °C впродовж 1-2 тижнів, а тоді ставлять в холодильник на зберігання до наступного пересіву. Стабільність імуногенних та антигенних властивостей штаму і типових для Clostridium novyi (тип В) морфологічних ознак і тинкторіальних, культуральних, біохімічних та антигенних властивостей дозволяє використовувати його для виробництва полівалентної концентрованої гідроксид-алюмінієвої формолвакцини проти брадзоту овець, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Вакцинний штам VNb-1 Clostridium novyi (тип В) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксид-алюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят, що депонований і зберігається у Депозитарії мікроорганізмів науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 536. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2