Вакцинний штам vpd-9 clostridium perfringens (тип d) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту овець, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, зло

Реферат: Вакцинний штам VPd-9 Clostridium perfringens (тип D) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої вакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят депонований та зберігається у Депозитарії мікроорганізмів науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 539. UA 82500 U (12) UA 82500 U UA 82500 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до ветеринарної мікробіології, зокрема до біотехнології нового вітчизняного вакцинного штаму VPd-9 Clostridium perfringens (тип D), який використовується у виробництві полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. Основна задача корисної моделі - це отримання штаму для вітчизняної полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят, на основі використання вітчизняних високоімуногенних штамів. Використання даного штаму у складі вакцини дозволяє отримати високоефективний біологічний препарат. Даний штам був виділений від трупа вівці, яка хворіла на інфекційну ентеротоксемію, в лабораторії відділення крайової епізоотології Інституту сільського господарства Західного Полісся НААНУ і депонований та зберігається у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів, м. Київ, вулиця Донецька, 30, Україна; зареєстрований за номером 539; клас Schizomycetes, родина ВасіІІасеае, рід Clostridium, вид Clostridium perfringens (тип D). Вакцинний штам VPd-9 Clostridium perfringens (тип D) характеризується наступними ознаками та властивостями. Культурально-морфологічні особливості. Строгий анаероб. Це товсті із заокруглено обрубленими кінцями, довжиною 4-8 і шириною 1-1,5 мкм, нерухомі, грамлабільні (молоді культури грампозитивні, старі грамнегативні) палички, які утворюють спори, які розташовуються в центрі палички або підкінцево. Газоутворення на рідких живильних середовищах бурхливе. На кров'яному глюкозному м'ясопептонному агарі утворює випуклі з рівними краями і гладкою поверхнею (S-форма) або шорсткі із нерівними краями (R-форма) колонії, які оточені зоною непрозорого гемолізу. Біохімічні властивості. Ферментує з утворенням кислоти та газу глюкозу, мальтозу, лактозу і сахарозу, не розщеплює гліцерин, маніт, дульцит, саліцин; швидко звертає молоко з утворенням казеїнового згустку, не викликає почорніння мозкового середовища, повільно розріджує желатину, не розріджує звернуту сироватку. Патогенні властивості. Сприйнятливі кролі, морські свинки і білі миші; морські свинки, 3 заражені підшкірно в ділянці паху 24-годинною культурою в дозі 1 см , гинуть протягом 17-18 год. із характерними патологоанатомічними змінами - в ділянці паху і живота розлитий набряк підшкірної клітковини; набрякова рідина червонуватого кольору із пухирцями газу; м'язи геморагічно інфільтровані; кишечник сильно здутий. Імуногенні властивості. Забезпечує захист щеплених лабораторних тварин проти зараження летальними дозами контрольного штаму. Антигені властивості. Штам має високу антигенність. Так, триразове внутрішньом'язове введення антигену (формалінізовані вегетативні клітини) у зростаючих дозах кроликам викликало в них утворення аглютинінів до гомологічного антигену в титрі 1:853,3±177,8 і антитіл, які виявляли з допомогою РНІФ, в титрі 1:682,7±128,0, що свідчить про високу антигенність вегетативних клітин штаму. Генетичні особливості штаму. Фагів у Clostridium perfringens не виявлено. Ауксотрофність не встановлена. Чутливий до стрептоміцину, пеніциліну, неоміцину, мономіцину, енрофлоксацину, байтрилу. Спосіб, умови та склад середовища для культивування штаму. Для культивування штаму використовують найчастіше середовище Кітт-Тароцці та кров'яний чи сироватковий глюкозний м'ясопептонний агар. Приготування середовища Кітт-Тароцці. Сиру печінку великої рогатої худоби ріжуть кусками по 250-300 г, заливають рівним за масою об'ємом водопровідної води і варять протягом 1 год. Екстракт фільтрують через ватний фільтр і змішують з м'ясопептонним бульйоном у співвідношенні 1:3. Суміш доводять до кипіння і додають 1,25 г натрію хлориду на 1 л бульйону. Доводять рН до 8,2, кип'ятять 15 хв., фільтрують через ватно-марлевий фільтр, розливають у 3 пробірки по 10 см або в іншу посуду і додають дрібно нарізані кусочки (1-2 г) печінки з розрахунку 10 % до об'єму бульйону у посудині. На поверхню бульйону нашаровують вазелінову олію товщиною шару до 1 см. Бульйон з кусочками печінки стерилізують при 120 °C протягом 40 хв. Ріст на середовищі Кітт-Тароцці проявляється вже на 4-6-ій годині інкубації і характеризується значною каламуттю і бурхливим газоутворенням, утворенням значного осадку із наступним просвітлінням бульйону, яке наступає на 36-48-ій годині. 1 UA 82500 U 3 5 10 15 Приготування кров'яного глюкозного м'ясопептонного агару (КГМПА). До 100 см прогрітого і повністю розплавленого 3 %-ого м'ясопептонного агару з рН 7,4-7,6 додають 2 % глюкози, охолоджують до 45 °C і додають (обережно, щоб не утворилися бульбашки повітря) 15-20 % баранячої чи бичачої дефібринованої крові і розливають у стерильні бактеріологічні чашки. Приготування сироваткового глюкозного м'ясопептонного агару (СГМПА). Вся процедура проводиться подібним чином як і при приготуванні КГМПА з тією лише відмінністю, що замість крові використовують стерильну сироватку великої рогатої худоби чи овець. Штам зберігають: а) в ліофілізованому вигляді при температурі від 2 °C до 6 °C протягом 5 років. Як захисне середовище при ліофілізації використовують суміш із 1 частини культури штаму на середовища Кітт-Тароцці і 1 частини середовища Файбича (10 % глюкози, 1 % желатину); б) на середовищі Кітт-Тароцці в холодильнику за t 2-4 °C; пересівають 1 раз на 3 місяці; для більш повного спороутворення культуру штаму інкубують за t 37 °C протягом 1-2 тижнів, а тоді ставлять в холодильник на зберігання до наступного пересіву. Стабільність імуногенних та антигенних властивостей штаму і типових для Clostridium perfringens (тип D) морфологічних ознак і тинкторіальних, культуральних, біохімічних та антигенних властивостей дозволяє використовувати його для виробництва полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої формолвакцини проти брадзоту овець, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят. 20 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 Вакцинний штам VPd-9 Clostridium perfringens (тип D) для виготовлення полівалентної концентрованої гідроксидалюмінієвої вакцини проти брадзоту, інфекційної ентеротоксемії, некротичного гепатиту, злоякісного набряку овець і дизентерії ягнят, що депонований та зберігається у Депозитарії мікроорганізмів науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів та має реєстраційний номер 539. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2