Спосіб приготування збудників ряду mallophaga in toto

Реферат: Спосіб приготування збудників ряду Mallophaga (малофаг) in toto включає відбір виявлених у птахів малофаг, їх фіксацію в 70°-ному розчині етилового спирту в пробірках для мікропроб, проколювання на предметному склі черевця малофаг з фарбуванням барвником, промивання дистильованою водою до повного видалення барвника, просвітлення та фіксацію приготованих для дослідження малофаг покривним склом. Як барвник використовують 1%-вий спиртовий розчин діамантового зеленого з витримкою протягом 4-6 хвилин. UA 85028 U (12) UA 85028 U UA 85028 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, а саме ветеринарної паразитології і може бути використана для приготування анатомо-морфологічних препаратів Mallophag (малофаг) з метою подальшої ідентифікації видів та вивчення морфологічної будови даних ектопаразитів. Mallophaga - ряд комах, які паразитують на багатьох видах птиці та ссавців в пір'ї та волосяному покриві, а також на шкірі та в стержнях пір'їн. При масовому зараженні птиці малофаги знижують її життєздатність. В інвазованої птиці відмічається виснаження, сильний свербіж, випадіння пір'я, алопеції на шкірі, зниження приросту та яйценосності. Відомий спосіб приготування препаратів збудників ряду Mallophaga in toto для їх подальшого дослідження, який включає відбір виявлених у птиці малофаг, фіксацію їх в 70° розчині етилового спирту. Попередньо для кращого проникнення спирту черевце малофаг проколюють гострою голкою, не пошкодивши щетинок та внутрішніх органів. З метою поступового зневоднення об'єкти проводять послідовно через спирти зростаючої концентрації - 85,95 і 100° (абсолютний алкоголь). В кожному із спиртів і в суміші абсолютного алкоголю та ксилолу (1:1) їх витримують в залежності від розміру малофаг протягом години або декількох годин, після чого поміщають для просвітлення в ксилол на такий же термін. У випадку використання для просвітлення гвоздичного масла їх переносять із 95° спирту. Просвітлення проводять на предметному склі та надають об'єкту бажаного положення. Гвоздичне масло видаляють кількома краплями ксилолу з наступним нанесенням канадського бальзаму і, поправивши положення приготованого об'єкта, накладають чисте покривне скло (Див. Благовещенский Д. И. Пухоеды (Mallophaga). Ч. 1: Введение // Фауна СССР. Новая сер., № 72. Т. 1, вып. 1: Насекомые пухоеды / Зоол. ин-т АН СССР. - Л.: АН СССР, 1959. с. 163). Найбільш близьким до заявленого способу вибраний як найближчий аналог є спосіб приготування препаратів збудників ряду Mallophaga in toto, що включає відбір виявлених малофаг з подальшою їх фіксацією в 70°-вому розчині етилового спирту в пробірках для мікропроб. На предметному склі черевце малофаг проколюють гострою голкою, не зачіпаючи щетинок і внутрішніх органів. Для отримання більш виразної картини будови хітинових частин об'єкти підфарбовують спиртовим або водним кислим фуксином чи еозином, промивають дистильованою водою або в суміші гліцерину з водою (1:1). Потім просочують в суміші гліцерину з водою або в чистому гліцерині та переносять на предметне скло. Невеликий шматочок гліцерин-желатини розплавляють на покривному склі, притримуючи його високо над полум'ям спиртового пальника і не допускаючи появи в суміші бульбашок повітря. Покривне скло швидко перевертають, фіксуючи краплею суміші на об'єкт, який також злегка підігрівають на предметному склі (Див. Благовещенский Д. И. Пухоеды (Mallophaga). Ч. 1: Введение // Фауна СССР. Новая сер., № 72. Т. 1, вып. 1: Насекомые пухоеды / Зоол. ин-т АН СССР. - Л.: АН СССР, 1959. - С. 164-165). Загальним недоліком відомих способів є те, що в отриманих препаратах зафарбовуються лише хітинові частини досліджуваних малофаг, що не дозволяє досліджувати в повному обсязі їх травну, статеву та інші системи, що в свою чергу обмежує одночасну можливість ідентифікації видів. Крім того препарати, виготовлені на основі гліцерин-желатини, мають обмежений термін зберігання. В основу корисної моделі поставлено задачу підвищення якості приготування для дослідження анатомо-морфологічних препаратів малофаг, що дозволяє більш детально дослідити їх внутрішні органи, зокрема травну, статеву та дихальну системи з одночасною можливістю ідентифікації видів малофаг. Поставлена задача вирішується в способі приготування збудників ряду Mallophaga in toto, який включає відбір виявлених у птахів малофаг, їх фіксацію в 70°-ному розчині етилового спирту в пробірках для мікропроб, проколювання на предметному склі черевця малофаг з фарбуванням барвником, промивання дистильованою водою до повного видалення барвника, просвітлення та фіксацію приготованих для дослідження малофаг покривним склом, згідно з корисною моделлю як барвник використовують 1 %-вий спиртовий розчин діамантового зеленого з витримкою протягом 4-6 хвилин. Спосіб здійснюють наступним чином. При візуальному огляді птахів на наявність збудників, зокрема, малофаг відбирають їх у пробірки для мікропроб об'ємом 1,5 мл з 70°-ним розчином етилового спирту. З пробірки їх переносять на предметне скло, де фарбують 1 %-вим спиртовим розчином діамантового зеленого та витримують в ньому 4-6 хвилин. Як показали дослідження, проведені заявником, використання даного барвника забезпечує більш повне вивчення внутрішніх органів малофаг, а саме травної, статевої та дихальної систем, а також точне визначення належності представників ряду Mallophaga до того, чи іншого виду. 1 UA 85028 U 5 10 15 Вказаний час витримки є оптимальним, оскільки забезпечує хорошу якість окраски анатомоморфологічного препарату, і як наслідок, подальше ретельне дослідження внутрішньої будови малофаг з точним встановленням належності до того, чи іншого виду. З метою кращого фарбування, черевце паразита попередньо обережно проколюють гострої голкою, намагаючись не пошкодити щетинок і внутрішніх органів. Потім видаляють залишки барвника, промиваючи його дистильованою водою і переносять для просвітлення в гвоздичне масло. Час витримки в ньому залежить від розміру об'єкта. Для зручності просвітлення проводять на предметному склі. Потім піпеткою видаляють гвоздичне масло, надають об'єкту необхідного положення, наносять кілька крапель канадського бальзаму й обережно накривають покривним склом. Під склом не повинно залишатися бульбашок повітря. Приготований препарат етикетують із зазначенням на одному кінці предметного скла назви виду, статі та віку об'єкта-господаря і зазначенням місця, часу збору та прізвище колектора, а на іншому - назви виду, фази розвитку і статі малофаг та прізвище особи, що визначає його. Ступінь забарвлення різних частин тіла малофаг 1 %-вим спиртовим розчином діамантового зеленого наведено в таблиця. Таблиця Системи паразитів ряду Mallophaga Хітиновий покрив Придатки шкіри: - волоски - щетинки - вусика Голова Груди Черевце Ноги Травна система Дихальна система Кровоносна система Екскреторна система Нервова система Статева система 20 + Ступінь зафарбування за 5-бальною шкалою 5 + + + + + + + + + + 4 4 5 5 5 5 5 5 5 5 Зафарбування Заявлюваний спосіб приготування збудників ряду Mallophaga in toto дозволяє більш детально дослідити будову не лише хітинових частин тіла малофаг, але й їх внутрішні органи, особливо травну, статеву та дихальну системи, що забезпечує в свою чергу диференціацію різних видів збудників. Спосіб не вимагає спеціальної підготовки, зручний і легкий у проведенні. Отриманий для дослідження препарат має властивість довго зберігатися. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 30 Спосіб приготування збудників ряду Mallophaga (малофаг) in toto, який включає відбір виявлених у птахів малофаг, їх фіксацію в 70°-ному розчині етилового спирту в пробірках для мікропроб, проколювання на предметному склі черевця малофаг з фарбуванням барвником, промивання дистильованою водою до повного видалення барвника, просвітлення та фіксацію приготованих для дослідження малофаг покривним склом, який відрізняється тим, що як барвник використовують 1 %-вий спиртовий розчин діамантового зеленого з витримкою протягом 4-6 хвилин. Комп’ютерна верстка І. Мироненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2