Штам enterovirus suis збудника ентеровірусного енцефаломієліту свиней (хвороба тешена) “чернігівський-1″ для виготовлення вакцини

Штам Enterovirus suis збудника енцефаломієліту свиней (хвороба Тешена), придатний для виготовлення вакцини проти ентеровірусного енцефаломієліту свиней (хвороба Тешена) за певними своїми характеристиками від "Закарпатського" Найбільш близьким аналогом штаму, що представляється, є штам "Закарпатський", який був виділений в Закарпатській області Української РСР під час епізоотії хвороби Тешена 19691972рр [Живая вакцина против болезни Тещена Ветеринарное законодательство М , 1988, том 4, стр 557-558] Він розмножується в культурах клітин свинячого походження, накопичується в титрах 107-109 ТЦЦбо/см , а також в організмі свині, викликаючи при внутрішньо мозковому зараженні поросят 2-4-місячного віку захворювання з ураженням головного та спинного мозку Штам "Закарпатський" вірусу хвороби Тешена є виробничим штамом, використовується при виготовленні "Вакцини проти ентеровірусного енцефаломієліту свиней ін активованої емульсованої за ТУ 9384-02000008064-96 та "Набору препаратів для ідентифікації вірусу хвороби Тешена реакцією нейтралізації" за ТУ 9388-022-00495549-89 Однак, проведені вірусологічні дослідження свідчать щодо імунологічної невідповідності штаму "Закарпатський" епізоотичному вірусу збудника хвороби Тешена, що циркулює в даний час на території України Це обумовило необхідність пошуку нового штаму для удосконалення протиепізоотичних засобів та методів специфічного захисту проти хвороби Тешена В основу корисної моделі, що представлена, поставлено задачу одержати новий, імунологічне домінуючий штам збудника ентеровірусного енцефаломієліту свиней, який дозволив би удосконалити специфічні засоби профілактики хвороби ео CM 0) 00 00 О) 8892 Тешена. Штам був одержаний із патматеріалу свиней, що хворіли на ентеровірусний енцефаломієліт. Штам, що був одержаний, за багатьма характеристиками не відрізняється від загальновідомих властивостей збудника хвороби Тешена, зокрема, за стійкістю в широкому діапазоні рН, резистентністю до нагрівання тощо, однак він відрізняється від відомих, зокрема від штаму "Закарпатський", своїми імунобіологічними властивостями. Так, свині, щеплені вакциною на основі штаму "Закарпатський", не були захищені від хвороби у випадку інфікування цих тварин іншим штамом збудника, зокрема штамом, що представляється штамом "Чернігівський-1". В той же час тварини, щеплені вакциною на основі штаму "Чернігівський1", були захищені від зараження штамом "Закарпатський". Титр антитіл до штаму "Закарпатський" та до штаму "Чернігівський-1", що представляється, у тварин, щеплених традиційною вакциною, складав 1:256-512 та 1:32 відповідно. Титр антитіл до штаму "Закарпатський" та до штаму "Чернігівський-1", що представляється, у тварин, щеплених вакциною, виготовленою на основі штаму "Чернігівський-1", складав 1:5121024 та 1:1024 відповідно. Крім того, було встановлено, що в багатьох областях України циркулюють штами збудника, проти яких антитіла до штаму "Закарпатський" не створюють достатнього захисту. У той же час антитіла до штаму "Чернігівський-1" повністю захищають тварину від цих штамів. Ці висновки були зроблені на основі достатньої серії дослідів. Основним способом дослідження була перехресна реакція віруснейтралізації. Сироватку для цієї реакції отримували від кроликів, гіперімунізованих штамами збудника ентеровірусного енцефаломієліту свиней. Фінальну частину досліджень здійснювали безпосередньо в господарстві, вакцинуючи свиней різними варіантами інактивованих вакцин. Потім шляхом перехресної реакції віруснейтралізації визначали рівень протективних антитіл. Спосіб вирощування штаму, що представлено, наступний. Штам одержали із патматеріалу свиней з ознаками ентеровірусного енцефаломієліту, шляхом зараження перещеплюваної культури клітин СНЕВ. Культуру клітин вирощували у вигляді моношару у скляних матрасах об'ємом 1500см . Після формування моношару, культуру клітин заражали суспензією з патматеріалу від хворих свиней, вільною від мікроорганізмів. Після прояву цитопатичної дії (ЦПД) матраси двічі заморожували та розморожували для кращого руйнування клітин. Після цього суспензію з вірусом розфасували по 1 см 3 в пеніцилінові флакони і помістили на зберігання в холодильні камери (-70°С). Характеристика віріону: безоболонковий сферичний віріон діаметром 22-23нм; ікосаедричний капсид складається з 60 структурних поліпептидних одиниць; у складі віріону є 6 поліпептидів. Стійкий до дії зовнішніх чинників та хімічних речовин. Культуральні ознаки: культивують в культурі клітин СНЕВ при "плюс" 37°С; підтримуюче середовище - ГЛА без сироватки крові; ЦПД +++ через 24год цитолітичного типу; титр - 7,25-7,75 ТЦДбосмз Штам вірусу, що представлений, патогенний для свиней, передається через предмети зовнішнього середовища, потрапляє в організм через органи травлення та дихання, зокрема через слизову оболонку шлунково-кишкового тракту і верхніх дихальних шляхів. Вірус розмножується в клітинах вказаних слизових оболонок і гематогенним та (можливо) нейрогенним шляхом проникає в центральну нервову систему, викликаючи її ураження; репродукція вірусу відбувається в цитоплазмі уражених клітин. Даний штам є імунодомінантним по відношенню до виробничого штаму "Закарпатський" (вірус індукує утворення антитіл, які забезпечують захист свиней від захворювання після зараження різними серологічними варіантами збудника ентеровірусного енцефаломієліту свиней (в тому числі і виробничим патогенним штамом "Закарпатський"). Ця особливість відрізняє його від виробничого штаму "Закарпатський", антитіла до якого не захищають тварин від захворювання після зараження штамом "Чернігівський-1"). Приклад застосування штаму. Для вивчення протективних властивостей експериментальних вакцин, отриманих на основі штаму "Чернігівський1" зформували три групи поросят. Першу групу вакцинували вакциною на основі штаму "Закарпатський" в дозі 2см 3 . Другу групу - по 1см3 вакцини на основі "Закарпатського" + 1см3 вакцини на основі "Чернігівського-1". Третю - по 1см 3 вакцини на основі "Закарпатського" + 1см3 вакцини на основі штаму "Житомирський". Через ЗО днів після щеплення відібрали кров від піддослідних тварин та дослідили рівень вірус нейтралізуючих антитіл (ВНА) у реакції нейтралізації. Результати досліджень зведені в таблицях 1-4. Таблиця 1 Рівень віруснейтралізуючих антитіл (ВНА) в сироватці крові поросят до вакцинації Рівень ВНА № породо "Закар- до "Чернігівсь- до "Житосяти патського" кого" мирського" 11 1:2 1:4 1:2 1:8 1:4 12 1:2 13 1:8 1:4 (