Спосіб вилучення метформіну з тканин печінки

Реферат: Спосіб вилучення метформіну з тканин печінки включає настоювання подрібненої печінки у воді, відокремлення біологічного матеріалу проціджуванням, очищення первинного водного вилучення від біогенних домішок кристалічним амонію сульфатом та центрифугування, екстракцію метформіну сумішшю ізопентанол-бутанол (1:1) у присутності натрію хлориду при рН 13. Настоювання біологічного матеріалу проводять у воді при нейтральному значенні рН та додатково очищують центрифугат від ліпофільних співекстрактивних речовин сумішшю гексантолуен (1:1). UA 92220 U (12) UA 92220 U UA 92220 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, зокрема до судово-токсикологічних досліджень і стосується способу вилучення метформіну із тканин печінки при гострому отруєнні препаратом. Антидіабстичний засіб метформін є основою сучасної фармакотерапевтичної схеми лікування цукрового діабету 2 типу [Кондратьева Л. В. Метформин - испытание временем / Л. В. Кондратьева // Русский медицинский журнал - Эндокринология. - 2007. - Т. 15, № 27. - С. 2098.]. Проте, відомі випадки гострого отруєння даним препаратом за певних обставин [Мерзлікін С. І., Москаленко В. Ю. Інформаційний огляд щодо обґрунтування хіміко-токсикологічного дослідження на метформін // Фармакологія та лікарська токсикологія. - 2010. - № 1-2(14-15). - С. 3-10.], які потребують судово-токсикологічних досліджень з вилученням токсиканту з біологічних об'єктів, виявленням та кількісним його визначенням в одержаних екстрактах. Відомий спосіб вилучення метформіну із тканин печінки, який передбачений для використання у судово-токсикологічних дослідженнях на токсикант невстановленої будови [Москаленко В. Ю. Ізолювання метформіну з біологічних об'єктів / В. Ю. Москаленко, С. І. Мерзлікін // Український біофармацевтичний журнал. - 2013. - № б (29). - С. 70-74.]. Даний спосіб заснований на вилученні лікарських речовин підкисленою водою (кислота оксалатна, рН 2-3) з подальшим екстрагуванням токсикантів кислого та нейтрального характеру діетиловим ефіром, відокремленні органічного шару, підлужненні водного шару розчином NaOH до рН 9, екстрагуванні токсикантів основного характеру хлороформом, відокремленні органічного шару, підлужненні водного шару розчином NaOH до рН 13 та екстрагуванні метформіну сумішшю ізопентанол-бутанол (1:1) у присутності натрію хлориду. Недоліком описаного способу вилучення метформіну є багатостадійність методики, відсутність заходів очищення первинного водного вилучення від біогенних домішок та співекстрактивних ліпофільних речовин, що у цілому негативно впливає на ступінь екстракції метформіну. Задача корисної моделі полягає в розробці найбільш ефективного способу вилучення метформіну з тканин печінки з метою скорочення стадій методики, очищення первинного водного вилучення від біогенних домішок та співекстрактивних ліпофільних речовин та підвищення ступеня екстракції метформіну. Поставлена задача вирішується тим, що вилучення метформіну з тканин печінки проводять екстракцією метформіну сумішшю ізопентанол-бутанол (1:1) у присутності натрію хлориду при рН 13 після послідовного настоювання подрібненої печінки у воді, відокремлення біологічного матеріалу проціджуванням, очищення первинного водного вилучення від біогенних домішок кристалічним амонію сульфатом та центрифугуванням, згідно з корисною моделлю, біологічний матеріал настоюють у воді при нейтральному значенні рН та додатково проводять очищення центрифугату від ліпофільних співекстрактивних речовин сумішшю гексан-толуен (1:1). Перевагою заявленого способу вилучення метформіну із тканин печінки перед способомпрототипом є скорочення стадій методики; одержання первинного водного вилучення, очищеного від біогенних домішок та ліпофільних співекстрактивних речовин; підвищення ступеня екстракції метформіну з 72 % до 83 %. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: У колбу місткістю 50,0 мл вміщують 10,0 г подрібненої печінки, додають 20,0 мл води очищеної та залишають на 2 год. при періодичному перемішуванні. Водне вилучення зливають з біологічного матеріалу та операцію настоювання біологічного матеріалу повторюють ще один раз протягом 1 год. Одержані водні вилучення об'єднують, проціджують через потрійний шар марлі у центрифужний стакан, додають 5,0 г кристалічного амоній сульфату, ретельно перемішують та центрифугують (3-5 тис. об./хв.). Надосадову рідину (центрифугат) переносять у ділильну лійку, додають 20,0 мл суміші гексан-толуен (1:1) та тричі екстрагують кожного разу новими порціями даного екстрагенту. Органічний шар відділяють та у подальшому не досліджують. Водний шар підлужнюють 5 Μ розчином NaOH до рН 13, додають 5,0 мл 25 % розчину NaCl та тричі по 20,0 мл екстрагують кожного разу новими порціями суміші ізопентанол-бутанол (1:1). Одержані спиртові екстракти об'єднують, фільтрують через паперовий фільтр "синя стрічка" та натрію сульфат безводний (5,0 г на фільтрі) та упарюють до сухого залишку в потоці теплого повітря. За результатами кількісного визначення в умовах використання заявленого способу з тканин печінки ізолюється до 83 % метформіну (табл. 1). 1 UA 92220 U Таблиця 1 Результати ізолювання метформіну з тканин печінки Внесено речовини, мкг 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0 1000,0 5 Виділено речовини/метод визначення УФ-спектрофотометрія ВЕРХ Екстракційна фотометрія мкг % мкг % мкг % 815,0 81,50 775,0 77,50 853,0 85,30 830,0 83,00 859,0 85,90 836,0 83,60 846,0 84,60 863,0 86,30 820,0 82,00 857,0 85,70 886,0 88,60 776,0 77,60 772,0 77,20 810,0 81,00 861,0 86,10 Середній показник відносного стандартного відхилення кількісного визначення застосованими методами не перевищує 7,0 %, а розбіжність результатів між методами є незначною (табл. 2). Таблиця 2 Метрологічні характеристики ізолювання метформіну з тканин печінки Метод визначення Метрологічні характеристики Sx X  S X УФ824,0 33,14 0,018 41,20 11,18 спектрофотометрія ВЕРХ 838,6 45,05 0,024 56,02 14,93 Екстракційна 829,2 33,68 0,018 41,88 11,29 фотометрія Примітка: критерій Ст'юдента при Р=95 % становить t(P, v)=2,78; n=5, v-4 10 RSD, % 4,02 5,37 4,06 Таким чином, заявлений спосіб вилучення метформіну з тканин печінки є більш простим у виконанні (має меншу кількість стадій методики), забезпечує одержання первинного водного вилучення без вмісту біогенних домішок та ліпофільних співекстрактивних речовин та підвищення ступеня екстракції метформіну до 83 %. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 20 Спосіб вилучення метформіну з тканин печінки, який включає настоювання подрібненої печінки у воді, відокремлення біологічного матеріалу проціджуванням, очищення первинного водного вилучення від біогенних домішок кристалічним амонію сульфатом та центрифугування, екстракцію метформіну сумішшю ізопентанол-бутанол (1:1) у присутності натрію хлориду при рН 13, який відрізняється тим, що настоювання біологічного матеріалу проводять у воді при нейтральному значенні рН та додатково очищують центрифугат від ліпофільних співекстрактивних речовин сумішшю гексан-толуен (1:1). Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2