Спосіб визначення ступеня кумуляції чужорідних хімічних сполук в організмі

Спосіб визначення ступеня кумуляції чужорідних хімічних сполук в організмі, який включає введення експериментальним тваринам дози 1/5 ДГІ50, годівлю, утримання тварин, забір крові для дослідження, одержання посиленої біохемілюмінесценції шляхом використання 0,5 мл сироватки крові +1,5 мл фізіологічного розчину + 50 мкл люмінолу + 50 мкл 0,5 % розчину Н2О2, реєстрацію на хемілюмінометрі хемілюмінограм сироватки крові, вимір інтенсивності світіння через визначені про міжки часу і порівняння її значень зі значеннями інтенсивностей контрольної групи тварин, який відрізняється тим, що вимірюють залежність від часу інтенсивності посиленої Н2Огбіохемілюмінесценції сироватки крові тварин, в організм яких введено ксенобіотик, по експериментальних даних будують динамічну криву, по якій визначають наступні параметри: часові інтервали фаз швидкого наростання (tm) і швидкого спаду (tc) інтенсивності світіння, час фази повільного зниження інтенсивності біохемілюмінесценції (t K ), час досягнення інтенсивностей контрольних значень (tK), за цими параметрами визначають ступінь кумуляції ксенобіотиків: якщо tK > 8 діб - надзвичайний ступінь кумуляції, якщо 6,5 діб < tK < 8 діб сильний ступінь кумуляції, 5 діб < tK < 6,5 діб - середній ступінь кумуляції, tK 8 діб - надзвичайний ступінь кумуляції, якщо 6,5 діб < tK < 8 діб сильний ступінь кумуляції, 5 діб < tK 8 діб - надзвичайний ступінь кумуляції; якщо 6,5 діб < tK - 8 діб - сильний ступінь кумуляції; якщо 5 діб < tK - 6,5 діб -середній ступінь кумуляції; tK - 5 діб - слабкий ступінь кумуляції. Спосіб ілюструє наступний приклад: Приклад: Розглянемо параметри динамічних кривих БХЛ сироватки крові білих щурів, затравлених чотирма ксенобіотиками різного ступеня кумуляції: 12-краун-4, неонол АФ 9-12, метилцеллозольв (МЦ) і простий поліефір Л-402. Для експерименту були обрані речовини з заздалегідь відомим ступенем кумуляції: 12-краун-4 надзвичайний ступінь кумуляції; неонол АФ 9-12 високий ступінь кумуляції; метилцеллозольв (МЦ) середній ступінь кумуляції; поліефір Л-402-2-100 малокумулятивна речовина. Як матеріал дослідження використовували сироватку крові білих щурів популяції Вістар масою тіла 0,18-0,21 кг (Ni = 100), що затравлювались вище приведеними ксенобіотиками. Контрольна група складалася з N 2 = 100 щурів. Тваринам одноразово перорально за допомогою металевого зонда вводили ксенобіотики в дозах 1/5 і 1/10 ДЛ50. Для 12-краун-4, неонола АФ9-12, МЦ і Л-402 доза ДЛбо складала відповідно 1,17; 3,40; 1,50; 43,40 г/кг. Годівля, утримання лабораторних тварин здійснювались відповідно до прийнятих в експериментальній практиці методик. Хемілюмінограми сироватки крові реєстрували на хемілюмінометрі ХЛМ1Ц-01. Для одержання посиленої БХЛ використовували 0,5мл сироватки крові + 1,5мл фізіологічного розчину + 50мкл люмінола + 50мкл 0,5 % розчину Н2О2. На І етапі дослідження реєстрували динаміку інтенсивності світіння сироватки крові через визначені для кожного з ксенобіотиків проміжки часу протягом середньоефективного часу загибелі тварин (ЕТ5о) при різних дозах впливу. Затим фіксували хемілюмінограми щодня (ранком) протягом часу досягнення інтенсивності світіння контрольних значень. Отримані дані порівнювали з інтенсивностями світіння сироватки в контрольній групі тварин. Рівні інтенсивностей БХЛ сироватки крові тварин у залежності від часу спостереження при впливі чотирьох ксенобіотиків у різних дозах представлені в табл. 1. Із таблиці видно, що показники динаміки інтенсивності світіння сироватки крові експериментальних тварин під впливом токсичних і субтоксичних доз відображають ступінь кумуляції ксенобіотиків, і, відповідно, їх токсикокінетику, токсикодинаміку і біотрансформацію в організмі. Спосіб може бути використаний в експресоцінці кумулятивних властивостей нових синтезованих хімічних речовин в умовах постановки гострого експерименту, що виключає необхідність проведення тривалого підгострого токсикологічного досліду. Виділені показники динамічних кривих БХЛ сироватки крові токсифікованих тварин дозволяють визначити ступінь кумуляції ксенобіотиків: час t m фази різкого наростання світіння до максимального значення; час t c фази швидкого спаду інтенсивності БХЛ, причому t m + t c = ЕТ50; час tK досягнення інтенсивностей до значень контрольної групи. З експериментальних даних Встановлено, що при токсифікації організму тварин ксенобіотиками, що володіють більш слабкими кумулятивними властивостями, подовжуються тимчасові інтервали фаз швидкого наростання (tm) і швидкого спаду інтенсивності (tc); скорочується час (tK*) фази повільного зниження інтенсивності БХЛ. Аналіз показників динамічних кривих БХЛ може бути використаний в експрес-оцінці кумулятивних властивостей ксенобіотиків. Таблиця 1 Динаміка БХЛ сироватки крові білих щурів при ди ксенобіотиками Час спостереження (хвилини, годинник, доба) Інтенсивність БХЛ Хвилини Години 24 4 36 12 48 60 24 3 5 48 830,7± 754,2± 12 краун- 1475,6± 1360,7± 1150,7± Ю38,2± 960,4± 820,6± 805,7± 784,5± ±45,8 ±35,4 ±42,3 ±42,6 ±37,6 ±22,5 ±16,5 ±18,9 ±18,6 4,1/5 ДЛ во, ±62,4 Речовина, доза (имп/с) Доба 6 720,5± ±3 2,4 7 700,3± ±21,4 8 684,7± ±26,3 9 665,8± ±34,5 9989 Продовження таблиці 1 Час спостереження (хвилини, годинник, доба) Інтенсивність БХЛ (имп/с) Хвилини Години Доба 36 24 3 4 12 24 48 60 48 5 6 7 1486,3± 1475,2± 1398,7± 1395,7± 1204,2± 1100,5± 890,2± 12-краун- 1495,6± 1523,7± 1580,6± 1565,3± 1502,3± ±52,5 ±40,2 ±41,6 ±39,2 ±47,6 ±60,4 ±36,3 ±26,5 ±51,6 ±20,4 4,1/10 ±27,3 ±33,8 э ечовина, доза 8 753,6± ±43,5 9 690,3± ±27,2 ДЛ.50, 680,3±27,4 Години Доба 4 1 6 9 12 1 2 3 6 3 5 7 8 АФ9-12 1480,6± 1352,3± 1256,1± 1080,8± 920,1± 870,6± 854,3± 843,4± 790,6± 760,8± 740,5± 720,4± 670,5± 43,7 ±43,5 ±50,2 ±27,8 ±32,4 ±24,5 ±54,6 ±50,2 ±22,3 ±43,6 ±38,4 ±37,5 1/5 ДЛ 5 0 ±65,4 835,4± 750,8± 655,7± 660,2± АФ9-12 1510,6± 1478,3± 1520,3± 1610,7± 1570,2± 1354,6+3±5,2 1234,2± 1105,4± 920,6± ±52,4 ±34,2 ±38,2 ±41,3 ±50,3 ±28,6 ±31,8 ±26,2 ±43,6 ±43,6 ±50,3 1/Ю ДЛ so ±45,4 контроль 680,7±24,8 Доба Години 1 2 4 7 6,0 12,0 15,0 5 6 8 3,0 9,0 3 1,5 930,5± 825,8± 805,6± 785,3± 710,4±±38,2 680,7± 660,5± 615,2± 1/5ДЛ50 1559,6± 1423,4± 352,6± 1215,2± 1032,6± 987,2+ МЦ ±36,4 ±32,4 ±26,2 ±31,3 ±26,2 ±40,4 ±36,5 ±60,7 ±45,6 ±36,9 ±27,5 ±42,8 ±41,3 690,2± 660,8± 675,4± 680,5± 1/Ю ДЛ 5 0 1605,4± 1572,6± 563,7± 1555,6± 1535,3± 1527,4± 1206,7± 903,4± 820,3± 760,5± ±42,4 ±37,6 ±33,8 ±43,4 МЦ ±38,3 ±55,2 ±22,5 ±31,8 ±27,4 ±45,8 ±50,5 ±42,6 ±60,2 ±45,4 680,4±35,6 контроль Години Доба 2 4 5 6 7 15 20 1 3 8 5 10 680,7± 650,9± 660,7± 650,3 ±40,4 642,6± 610,4± Л-402 1/5 1527,4± 1410,3± 1215,8± 1027,3± 952,5± 750,6 ±32,4 ±68,2 ±36,5 ±46,7 ±28,2 ±22,6 ±35,2 ±33,2 ±45,3 ±39,6 ±25,6 ДЛбо 1603,2± 1586,4± 1572,3± 1546,4± 1475,3± 984,7± 728,5± 660,3 680,4± 650,4 ±35,6 675,3 685,3±2±2,5 Л-402 ±60,4 ±46,7 ±24,2 ±19,4 ±50,9 ±31,8 ±33,8 ±30,6 ±27,8 1/Ю ДЛ 5 0 ±70,5 680,4±43,2 контроль контроль Комп'ютерна верстка Г. Паяльніков Підписне Тираж 26 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Глазунова, 1, м Київ - 4 2 , 01601 9 690,7± ±40,6 650,9± ±28,2 9 630,8± ±24,5 610,4± ±25,6 9 680,6± ±30,5 680,7± ±30,9