Протипухлинні комбінації, які містять антитіла, що специфічно розпізнають cd38, і цитарабін

Реферат: Винахід стосується протипухлинної фармацевтичної комбінації, що містить антитіло, яке специфічно розпізнає CD38, і цитарабін. UA 104160 C2 (12) UA 104160 C2 UA 104160 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Даний винахід належить до комбінацій моноклональних антитіл, спрямованих проти CD38, і цитарабіну, що мають терапевтичну ефективність при лікуванні новоутворень. CD38 являє собою трансмембранний глікопротеїн II типу масою 45 кДа з довгим C-кінцевим позаклітинним доменом і коротким N-кінцевим цитоплазматичним доменом. Білок CD38 являє + собою біфункціональний ектофермент, що може каталізувати перетворення NAD у циклічну АДФ-рибозу (цАДФР), а також гідролізувати цАДФР в АДФ-рибозу. CD38 піддається підвищувальній регуляції і втягнений у багато які гемопоетичні злоякісні пухлини. Моноклональні антитіла 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39, які специфічно розпізнають CD38, описані в заявці PCT WO2008/047242. Вказані антитіла проти CD38 здатні + убивати CD38 клітини за допомогою трьох різних цитотоксичних механізмів: індукції апоптозу, антитілозалежної клітиноопосередкованої цитотоксичності (АЗКЦ) і комплементзалежної + цитотоксичності (КЗЦ). Крім того, ці антитіла здатні безпосередньо індукувати апоптоз CD38 клітин, навіть за відсутності клітин строми або цитокінів стромального походження. Цитарабін являє собою антиметаболічний засіб, який використовується у хіміотерапії. Зберігається потреба в новому й ефективному лікарському засобах для лікування злоякісних пухлин. У рамках даного винаходу виявлено, що ефективність гуманізованих антитіл проти CD38 можна значно удосконалити, коли їх вводять у поєднанні щонайменше з однією речовиною, яка має терапевтичну ефективність при лікуванні злоякісних пухлин і має механізм, ідентичний одному з гуманізованих антитіл проти CD38 або відмінний від нього, і який обмежений в даному винаході цитарабіном. Термін «антитіло» використовують у даному документі в найширшому змісті, і конкретно він охоплює моноклональні антитіла (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла) будь-якого ізотипу, такого як IgG, IgM, IgA, IgD і IgE, поліклональні антитіла, поліспецифічні антитіла, химерні антитіла і фрагменти антитіл. Типове IgG антитіло складається з двох ідентичних важких ланцюгів і двох ідентичних легких ланцюгів, які з'єднані дисульфідними зв'язками. Кожен важкий і легкий ланцюг містить константну область і варіабельну область. Кожна варіабельна область містить три сегменти, які називають «областями, які визначають комплементарність» («CDR») або «гіперваріабельними областями», що головним чином відповідають за зв'язування з епітопом антигену. Їх звичайно позначають як CDR1, CDR2 і CDR3 і послідовно нумерують з N-кінця. Більш консервативні ділянки варіабельних областей за межами CDR називають «каркасними областями». Як застосовують у даному документі, «VH» або «VH» належить до варіабельної області важкого ланцюга імуноглобуліну антитіла, включаючи важкий ланцюг фрагмента Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' або F(ab')2. Посилання на «VL» або «VL» належить до варіабельної області легкого ланцюга імуноглобуліну антитіла, включаючи легкий ланцюг фрагмента Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab' або F(ab')2. Антитіло 38SB13 містить щонайменше один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 50, і щонайменше один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 38, вказаний важкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 1, 2 і 3, а вказаний легкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 4, 5 і 6. Антитіло 38SB18 містить щонайменше один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 52, і щонайменше один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 40, вказаний важкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 7, 8 і 9, а вказаний легкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 10, 11 і 12. Антитіло 38SB19 містить щонайменше один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 54, і щонайменше один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 42, вказаний важкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 13, 81 і 15, а вказаний легкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 16, 17 і 18. Антитіло 38SB30 містить щонайменше один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 56, і щонайменше один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 44, вказаний важкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 19, 20 і 21, а вказаний легкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 22, 23 і 24. 1 UA 104160 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Антитіло 38SB31 містить щонайменше один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 58, і щонайменше один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 46, вказаний важкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 25, 26 і 27, а вказаний легкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 28, 29 і 30. Антитіло 38SB39 містить щонайменше один важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 60, і щонайменше один легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, яка складається з SEQ ID NO: 48, вказаний важкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 31, 32 і 33, а вказаний легкий ланцюг містить три послідовних CDR, що містять амінокислотні послідовності, які складаються з SEQ ID NO: 34, 35 і 36. Гібридомні клітинні лінії, які продукують антитіла миші проти CD38 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39 здані на збереження в Американську колекцію типових культур (10801 University Bid, Manassas, VA, 20110-2209, USA), 21 червня 2006 року, під номерами депозитів PTA-7667, PTA-7669, PTA-7670, PTA-7666, PTA-7668 і PTA-7671, відповідно (як описано в WO 2008/047242). Термін «гуманізоване антитіло», як застосовують у даному документі, належить до химерного антитіла, що містить мінімальну послідовність, отриману з імуноглобуліну, який не є людським. Метою гуманізації є зниження імуногенності ксеногенного антитіла, такого як мишаче антитіло, для введення людині, при цьому зберігаючи повну афінність і специфічність зв'язування антитіла з антигеном. Гуманізовані антитіла або антитіла, адаптовані для того, щоб інші ссавці не розвивали на них імунну реакцію, можна одержати, використовуючи декілька способів, таких як зміна поверхні і трансплантація CDR. Як застосовують у даному документі, у способі зміни поверхні використовують поєднання молекулярного моделювання, статистичного аналізу і мутагенезу для зміни поверхонь варіабельних областей антитіла, що не належить до CDR, щоб домогтися подібності з поверхнями відомих антитіл цільового організму-хазяїна. Спосіб трансплантації CDR включає заміну областями, які визначають комплементарність, наприклад, антитіла миші, у каркасному домені людини, наприклад, див. WO 92/22653. Гуманізовані химерні антитіла переважно мають константні області і варіабельні області, відмінні від областей, які визначають комплементарність (CDR), отримані по суті або винятково з відповідних областей антитіла людини і CDR, отримані по суті або винятково від ссавця, який відрізняється від людини. Стратегії і способи зміни поверхні антитіл, а також інші способи зниження імуногенності антитіл усередині іншого організму-хазяїна, розкриті в патенті США 5639641, який включений у даний документ у повному обсязі за допомогою посилання. Антитіла можна гуманізувати, використовуючи множину інших способів, включаючи трансплантацію CDR (EP 0239400; WO 91/09967; патенти США NO: 5530101 і 5585089), або покриття зміни поверхні (EP 0592106; EP 0519596; Padlan E. A., 1991, Molecular Immunology 28(4/5): 489-498; Studnicka G. M. et al., 1994, Protein Engineering, 7(6): 805-814; Roguska M.A. et al., 1994, PNAS, 91: 969-973), перестановку ланцюгів (патент США NO: 5565332) і ідентифікацію гнучких залишків (PCT/US2008/074381). Антитіла людини можна одержати великою кількістю відомих у даній галузі способів, включаючи способи фагового дисплея. Також див. патенти США NO: 4444887, 4716111, 5545806 і 5814318; і публікації міжнародних патентних заявок NO: WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 і WO 91/10741 (вказані матеріали включені в повному обсязі за допомогою посилання). Антитіла проти CD38 з фармацевтичної комбінації за даним винаходом являють собою + гуманізовані антитіла, які розпізнають CD38 і убивають CD38 клітини за допомогою апоптозу, АЗКЦ і КЗЦ. У додатковому варіанті здійснення гуманізовані антитіла за винаходом здатні + убивати вказані CD38 клітини за допомогою апоптозу навіть за відсутності клітин строми або цитокінів стромального походження. Переважним варіантом такого гуманізованого антитіла є гуманізоване антитіло 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 або 38SB39 або його фрагмент, що зв'язує епітоп. CDR з антитіл 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39 установлювали за допомогою моделювання, а їхні молекулярні структури передбачали. Таким чином, в одному з варіантів здійснення даний винахід належить до гуманізованих антитіл або їх фрагментів, які зв'язують епітоп, що містить одну або декілька CDR, що містять амінокислотну послідовність, вибрану з групи, яка складається з SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36 і 81. У переважному варіанті здійснення передбачена гуманізована версія 38SB13, що містить щонайменше один 2 UA 104160 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де вказаний важкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 1, 2 і 3, і де вказаний легкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 4, 5 і 6. В іншому переважному варіанті здійснення передбачена гуманізована версія 38SB18, що містить щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де вказаний важкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 7, 8 і 9, і де вказаний легкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 10, 11 і 12. В іншому переважному варіанті здійснення передбачена гуманізована версія 38SB19, що містить щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де вказаний важкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 13, 81 і 15, і де вказаний легкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 16, 17 і 18. В іншому переважному варіанті здійснення передбачена гуманізована версія 38SB30, що містить щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де вказаний важкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 19, 20 і 21, і де вказаний легкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 22, 23 і 24. В іншому переважному варіанті здійснення передбачена гуманізована версія 38SB31, що містить щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де вказаний важкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 25, 26 і 27, і де вказаний легкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 28, 29 і 30. В іншому переважному варіанті здійснення передбачена гуманізована версія 38SB39, що містить щонайменше один важкий ланцюг і щонайменше один легкий ланцюг, де вказаний важкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 31, 32 і 33, і де вказаний легкий ланцюг містить три послідовні області, що визначають комплементарність, що містять амінокислотні послідовності, представлені в SEQ ID NO: 34, 35 і 36. В одному з варіантів здійснення даний винахід належить до гуманізованих антитіл або їх фрагментів, що містять VH, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи SEQ ID NO: 66 і 72. У переважному варіанті здійснення передбачене гуманізоване антитіло 38SB19, що містить VH, який містить амінокислотну послідовність, представлену в SEQ ID NO: 66. В іншому переважному варіанті здійснення передбачене гуманізоване антитіло 38SB31, що містить V H, який містить амінокислотну послідовність, представлену SEQ ID NO: 72. В іншому варіанті здійснення даний винахід належить до гуманізованих антитіл або їх фрагментів, що містять VL, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи SEQ ID NO: 62, 64, 68 і 70. У переважному варіанті здійснення передбачене гуманізоване антитіло 38SB19, що містить VL, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи SEQ ID NO: 62 і 64. В іншому переважному варіанті здійснення передбачене гуманізоване антитіло 38SB31, що містить VL, який містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи SEQ ID NO: 68 і 70. Показано, що кожна гуманізована версія антитіл 38SB13, 38SB18, 38SB19, 38SB30, 38SB31 і 38SB39 надзвичайно ефективна як засіб проти злоякісних пухлин. Їхнє одержання, фізичні властивості і корисні фармакологічні властивості описані в WO 2008/047242, що включена в даний документ як посилання в повному обсязі. Як правило, дози, використовувані для лікування людських істот, що залежать від факторів, зумовлених суб'єктами, що підлягають лікуванню, становлять від 1 до 150 мг/кг при пероральному уведенні або від 1 до 150 мг/кг при внутрішньовенному введенні. Цитозин-арабінозид або цитарабін або araC (торгова назва: Aracytin™) є антиметаболічним засобом (1β-арабінофуранозилцитозин). Цитарабін швидко перетворюється в цитозинарабінозидтрифосфосфат, який ушкоджує ДНК, коли клітинний цикл знаходиться в S фазі (синтез ДНК). Отже, більше всього ушкоджуються клітини, які швидко діляться, яким потрібно реплікувати ДНК для мітозу. Цитарабін також інгібує ферменти ДНК і РНК полімерази і нуклеотидредуктази, необхідні для синтезу ДНК. В організмі цитарабін швидко дезамінується в неактивну похідну урацилу і, отже, його часто вводять за допомогою безупинної внутрішньовенної інфузії. 3 UA 104160 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Один аспект за винаходом являє собою фармацевтичну композицію, що містить антитіло проти CD38 у поєднанні щонайменше з цитарабіном. Оскільки активність продуктів залежить від використовуваних доз, то можна використовувати більш низькі дози і підвищувати активність, при цьому знижуючи токсичні явища. Удосконалену ефективність комбінації за винаходом можна продемонструвати шляхом визначення терапевтичного синергізму. Комбінація виявляє терапевтично синергізм, якщо вона терапевтично перевершує кращий засіб, який використовується у дослідженні окремо в його максимальній переносимій дозі або в найбільш протестованій дозі, коли в даного виду тварин не досягається токсичності. Цю ефективність можна визначити кількісно, наприклад, log 10 смерті клітин, який визначають відповідно до наступної формули: log10 смерті клітин = T-C(доб)/3,32×Td, де T-C представляє затримку росту пухлини, що являє собою середній час у днях для пухлин із групи лікування (T) і пухлин з контрольної групи (C) до досягнення попередньо визначеного значення (наприклад, 1 г), а Td представляє час у днях, необхідний для подвоєння об’єму пухлини у контрольних тварин [T. H. Corbett et al., Cancer, 40: 2660-2680 (1977); F. M. Schabel et al., Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17: 3-51, New York, Academic Press Inc. (1979)]. Продукт вважають активним, якщо log10 смерті клітин вищий або дорівнює 0,7. Продукт вважають дуже активним, якщо log10 смерті клітин перевищує 2,8. Комбінація, у якій кожен компонент буде присутній у дозі, як правило, яка не перевищує його максимальну переносиму дозу, буде виявляти терапевтичний синергізм, коли log 10 смерті клітин буде перевищувати значення log10 смерті клітин кращого компонента, коли його вводять окремо і використовують у його максимальній переносимій дозі або в найбільш протестованій дозі. Ефективність дії комбінацій на солідні пухлини можна визначити експериментально в такий спосіб: на 0 добу тваринам, які беруть участь в експерименті, як правило, мишам, підшкірно трансплантують по обидва боки фрагмент пухлини масою від 30 до 60 мг. Тварин, які несуть пухлини, рандомізують, ґрунтуючись на розмірі їхніх пухлин до того, як їх піддавали різним впливам і контролям. Хіміотерапію починають, коли пухлини досягають попередньо визначеного розміру після трансплантації, у залежності від типу пухлини, а спостереження за тваринами ведуть щодня. Різні групи тварин зважують щодня в процесі лікування доти, поки не буде досягнута максимальна втрата маси і не відбудеться наступний набір повної маси. Потім групи зважують один або два рази на тиждень до закінчення дослідження. Пухлини вимірюють від 1 до 5 разів на тиждень, у залежності від часу подвоєння пухлини, доти, поки пухлина не досягне приблизно 2 г або поки тварина не вмре (якщо це відбувається перш, ніж пухлина досягне 2 г). Некропсію тварин проводять безпосередньо після умертвіння або смерті. Протипухлинну активність визначають відповідно до різних зареєстрованих параметрів. Результати, отримані при використанні комбінацій hu38SB19 і цитарабіну, які використані у їхніх оптимальних дозах, позначені далі в даному документі як приклади. Отже, даний винахід також належить до фармацевтичних композицій, які містять комбінації за винаходом. Компоненти, з яких складається комбінація, можна вводити одночасно, напіводночасно, окремо або розділити проміжком часу для того, щоб досягти максимальної ефективності комбінації; для кожного введення можна варіювати його тривалість від швидкого введення до безупинної перфузії. У результаті, для цілей даного винаходу комбінації не обмежені винятково тими, які одержують за допомогою фізичного сполучення компонентів, але також включають ті, які допускають роздільне введення, яке може бути одночасним або розділене проміжком часу. Композиції за винаходом переважно являють собою композиції, які можна вводити парентерально. Однак ці композиції можна вводити перорально, підшкірно або інтраперитонеально у випадку локалізованої регіонарної терапії. Композиції для парентерального введення як правило являють собою фармацевтично прийнятні стерильні розчини або суспензії, що необов'язково можна одержувати в міру необхідності під час використання. Для одержання неводних розчинів або суспензій можна використовувати натуральні рослинні олії, такі як маслинова олія, сезамова олія або рідкі вуглеводні або ін’єктовані складні органічні ефіри, такі як етилолеат. Стерильні водні розчини можуть складатися з розчину продукту у воді. Водні розчини підходять для внутрішньовенного введення, за умови, що відповідним чином скоректований pН і розчин є ізотонічним, наприклад, за рахунок достатньої кількості хлориду натрію або глюкози. Стерилізацію можна здійснювати шляхом нагрівання або будь-якими іншим засобами, що не роблять несприятливого впливу на 4 UA 104160 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 композицію. Також комбінації можуть приймати форму ліпосом або форму, пов'язану з носіями, такими як циклодекстрини або поліетиленгліколі. Композиції для перорального, підшкірного або інтраперитонеального введення переважно являють собою водні суспензії або розчини. У комбінаціях за винаходом, застосування компонентів яких може бути одночасним, роздільним або розділеним проміжком часу, особливо сприятливо, щоб кількість гуманізованого антитіла проти CD38 складало від 10 до 90% по масі комбінації, такий зміст можна варіювати відповідно до властивостей асоційованої речовини, шуканої ефективності і властивостей злоякісної пухлини, що підлягає лікуванню. Комбінації за винаходом особливо ефективні при лікуванні декількох типів злоякісних пухлин, включаючи (але без обмеження) наступні: карциноми й аденокарциноми, включаючи пухлини сечового міхура, молочної залози, товстої кишки, голови і шиї, простати, нирок, печінки, легких, яєчників, підшлункової залози, шлунка, шийки матки, щитовидної залози і шкіри, і включаючи плоскоклітинну карциному; гемопоетичні пухлини лімфоїдного відростка, включаючи множинну мієлому, лейкоз, гострий і хронічний лімфоцитарний (або лімфоїдний) лейкоз, гострий і хронічний лімфобластний лейкоз, B-клітинну лімфому, T-клітинну лімфому, неходжкінську лімфому (наприклад, лімфома Беркітта); гемопоетичні пухлини мієлоїдного відростка, включаючи гострі і хронічні мієлогенні (мієлоїдний або мієлоцитарний) лейкози і промієлоцитарний лейкоз; пухлини мезенхімального походження, включаючи фібросаркому, остеосаркому і рабдоміосаркому; пухлини центральної і периферичної нервової системи, включаючи астроцитому, нейробластому, гліому і шваноми; і інші пухлини, включаючи меланому, тератокарциному, пігментну ксеродерму, кератоакантому і семіному, і інші ще не встановлені злоякісні пухлини, у яких експресується CD38. В основному, їх можна використовувати для лікування лейкозу, лімфоми і злоякісних пухлин, стійких до загальновживаних засобів проти злоякісних пухлин, оскільки антитіла проти CD38 мають унікальний механізм дії. Таким чином, винахід також належить до використання вказаних вище комбінацій для виробництва лікарського засобу для лікування злоякісної пухлини. Приклад: У цьому прикладі демонстрували ефективність комбінації антитіло проти CD38/цитарабін за винаходом для інгібування росту пухлини in vivo. Як модель пухлини вибрали клітинну лінію трансплантованого T-клітинного гострого лімфобластного лейкозу людини (T-ALL), DND-41, імплантовану SCID мишам. 2+ 2+ Hu38SB19 вносили у фізіологічний розчин з фосфатним буфером, без Ca і Mg , pН 7,4. Hu38SB19 уводили внутрішньовенно на 18, 21, 24, 27 добу після імплантації пухлини. Palmo Ara-C, похідна цитарабіну, що підходить для повільно вивільнюваного введення мишам, вносили в 3% етанол, 1% полісорбат 80, 96% воду і вводили підшкірно на 18, 21, 24, 27 добу після імплантації пухлини. Результати експерименту викладені в таблиці 1. Час подвоєння пухлини = 3,4 доби. Використовували наступні кінцеві точки: - Токсичність виявляли при дозуваннях, що викликають ≥ 20% утрату маси або тіла ≥10% смерть від лікарського засобу, - Протипухлинну ефективність визначали шляхом оцінки log 10 смерті клітин = (TC)/[3,32×(час подвоєння пухлини, доб)] (T - означає середній час досягнення 750 мг мишею, що проходила лікуванню, а C - означає середній час (26,9 доби) досягнення того ж розміру контрольними мишами; безпухлинних, що вижили виключали з цих досліджень і зводили в окрему таблицю). Протипухлинна активність не виявлена при log смерті клітин 100 доби після останнього лікування). - Терапевтичний синергізм: комбінація має терапевтичний синергізм, якщо вона більш активна, ніж краще окремо досліджений засіб (щонайменше на 1 log смерті клітин). Токсичність окремо для Palmo Ara-C спостерігали при дозі 96,3 мг/кг/ін'єкція - 6 смертей, пов'язаних з лікарським засобом, серед 6 мишей, що проходили лікування. Найвища нетоксична доза (HNTD) для Palmo Ara-C склала 58,0 мг/кг/ін'єкція (загальна ін’єктована доза = 232,0 мг/кг). Виявлено, що доза 58,0 мг/кг/ін'єкція має високу активність з log10 смерті клітин 5,4 і 3/6 TFS на 160 добу. Також виявлено, що доза нижче 36,0 мг/кг/ін'єкція (загальна ін’єктована доза = 144,0 мг/кг) має високу активність з log10 смерті клітин 4,3. Найнижча доза 22,3 мг/кг/ін'єкція активна з log10 смерті клітин 2,0. 5 UA 104160 C2 5 10 15 Відносно hu38SB19, продукт показав гарну переносимість при дозі 40 мг/кг/ін'єкція. Токсичність не спостерігали, що можна пояснити відсутністю перехресної реактивності антитіла з CD38 миші. log10 смерті клітин склав 0,5, що вказує на неактивність hu38DB19 у цих умовах. Комбінація Palmo Ara-C у дозі 96,3 мг/кг/ін'єкція і hu38SB19 у дозі 40 мг/кг/ін'єкція показала токсичність - 5 смертей, пов'язаних з лікарським засобом, серед 6 мишей, що проходили лікування, тобто дуже близьку до того, що спостерігали при використанні тільки Palmo Ara-C у такій же дозі. Дозу Palmo Ara-C 58,0 мг/кг/ін'єкція і hu38SB19 40 мг/кг/ін'єкція рахували за HNTD. Відмінно те, що при цій дозі 5 з 6 мишей залишалися TFS до кінця дослідження (160 доба). Більш низька доза Palmo Ara-C 36,0 мг/кг/ін'єкція і hu38SB19 40 мг/кг/ін'єкція показала log10 смерті клітин 8,1 і 3/6 TFS у порівнянні з log 10 смерті клітин 4,3 і 0/6 TFS для дози тільки Palmo Ara-C однакової токсичності і, таким чином, її вважали високо активною. Протипухлинну активність log10 смерті клітин 2,7 зареєстрували для найнижчої дози комбінації, у порівнянні з log10 смерті клітин 2,0 для дози Palmo Ara-C однакової токсичності. Автори даного винаходу прийшли до висновку про те, що комбінація виявляє терапевтичний синергізм у порівнянні з кращим окремо дослідженим засобом Palmo Ara-C. Таблиця 1 Комбінація hu38SB19 і Palmo Ara-C проти запущеного T-клітинного гострого лімфобластного лейкозу людини DND-41, імплантованого самкам SCID мишей hu38SB19IV Palmo AraC SC 40,0 (160,0) 18, 21, 24, 27 96,3 (385,2) 58,0 (232,0) 18, 21, 24, 27 36,0 (144,0) 22,3 (89,2) 40,0 (160,0) 96,3 (385,2) 40,0 (160,0) 58,0 (232,0) 18, 21, 24, 27 40,0 (160,0) 36,0 (144,0) 40,0 (160,0) 22,3 (89,2) 0/6 6/6 0/6 0/6 0/6 5/6 0/6 0/6 0/6 -2,1 (19) -26,6 (31) -6,1 (31) -4,6 (30) -0,5 (32) -21,6 (34) -6,5 (30) -3,2 (31) -1,7 (19) 6,1 60,5 48,6 22,1 0,5 5,4 4,3 2,0 0/6 3/6 0/6 0/6 5/6 90,9 8,1 3/6 30,8 2,7 0/6 HDT - неактивна Токсична HNDT - високо активна Високо активна Активна Токсична HNDT - Високо активна Високо активна Активна Час подвоєння пухлини = 3,4 доби. Середній розмір пухлини на початку лікування = 124-136 мг. Час до досягнення середньою контрольною пухлиною 750 мг = 26,9 доби. BWC = зміна маси тіла, T-C = затримка росту пухлини, HDT = найвища протестована доза, HNTD = найвища нетоксична доза, TFS = безпухлинні, що вижили, IV = внутрішньовенно, SC = 2+ 2+ підшкірно. Сполуки: hu38SB19 = фізіологічний розчин з фосфатним буфером без Ca і Mg , p 7,4, Palmo Ara-C = 3% етанол, 1% полісорбат 80, 96% вода. 6 UA 104160 C2 7 UA 104160 C2 8 UA 104160 C2 9 UA 104160 C2 10 UA 104160 C2 11 UA 104160 C2 12 UA 104160 C2 13 UA 104160 C2 14 UA 104160 C2 15 UA 104160 C2 16 UA 104160 C2 17 UA 104160 C2 18 UA 104160 C2 19 UA 104160 C2 20 UA 104160 C2 21 UA 104160 C2 22 UA 104160 C2 23 UA 104160 C2 24 UA 104160 C2 25 UA 104160 C2 26 UA 104160 C2 27 UA 104160 C2 28