Композиції та способи лікування у клінічних застосуваннях широкого спектра дії, недиференційованих або змішаних

Реферат: Винахід стосується композиції для лікування або профілактики діареї, що містить: а) ефективну кількість для людини, за виключенням новонародженої щонайменше однієї специфічно зв'язуючої молекули, при цьому щонайменше одна специфічно зв'язуюча молекула містить пул IgY, характерний принаймні для ентеротоксигенного Е.соli spp., адгезивного фактора пілей Е.соli К99, Clostridium perfringens toxoid, Salmonella typhimurium, ротавірусу і коронавірусу; та, б) матрицю-носій, що містить коров'яче молозиво, та де композиція містить специфічно зв'язуючу молекулу в кількості, ефективній для лікування або профілактики недиференційованої діареї, недиференційованої педіатричної діареї, діареї мандрівників, ротавірусної діареї, токсин-опосередкованої діареї, холери, інфекції C. difficile, UA 115524 C2 (12) UA 115524 C2 дизентерії, черевного тифу, пептичної виразки або ведення шлунково-кишкової флори у людини, за виключенням новонародженої. UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 ПЕРЕХРЕСНЕ ПОСИЛАННЯ НА СПОРІДНЕНУ ЗАЯВКУ Дана заявка була подана 21 листопада 2011 року як міжнародна патентна заявка РСТ від імені національної корпорації США PanTheryx, Inc., заявник вказаний в усіх країнах, окрім США, та Timothy W. Starzl, жителя США, та заявляє про пріоритет відносно попередньої заявки США №61/416667, поданої 23 листопада 2010 року, яка включена сюди в якості посилання у повному обсязі. ГАЛУЗЬ ТЕХНІКИ Даний винахід описує композиції та способи для пасивної імунізації. У варіантах втілення винаходу описана композиція, яка містить синергічну комбінацію специфічних поліклональних антитіл, яку вводять в матрицю-носій. Винахід забезпечує ефективні і економічні композиції та способи для лікування патогенних інфекцій у клінічному застосуванні широкого спектру дії, недиференційованого або змішаного. В одному варіанті втілення винаходу описані запропоновані композиції та способи для лікування діареї і кишкових інфекцій. РІВЕНЬ ТЕХНІКИ Антитіла, імуноглобуліни та інші біологічні імунні фактори (названі тут всі разом як антитіла) як природні, так і синтетичні аналоги, відомі як терапевтичні засоби в організмі людини та тварин. Антитіла діють шляхом зв’язування (за допомогою нековалетних сил) між активним центром антитіла і фрагментом антигену, яка називається антигенною детермінантною або епітопом. Антитіла мають високий ступінь специфічності. Наприклад, у сфері моноклональних антитіл останні були у більшому ступені розроблені для отримання більш специфічних та точних характеристик зв’язування. Однак, ця висока специфічність може призвести до надмірно обмежених атрибутів зв’язування, де агенти або антигени, які функціонально ідентичні, не реагують однаково з імунореагентом або імунотерапевтичним препаратом. Перехресна реактивність з іншої сторони, як правило, розглядається як помилка або неможливість забезпечити специфічність зв’язування, і тим самим являється реакцією між антигеном і антитілом, яка була згенерована з аналогічним, але іншим антигеном. Контрольована перехресна реактивність може конструктивно використовуватися для розширення діапазону зв’язування антитіла. Молозиво природно розвинулося у ссавців спеціально для доставки його компонентів новонародженим і через шлунково-кишковий тракт в дуже концентрованій форми формі при малого об’ємі. Молозиво, як відомо, містить антитіла, такі як IgA, IgG і IgM. Інші компоненти молозива включають лактоферрин, лізоцим, лактопероксидазу, комплемент і багатий проліном пептид (PRP). Кількість цитокинів (невеликі пептидні месенджери, які контролюють функціонування імунної системи) також знаходяться в молозиві, включаючи інтерлейкіни, фактор некрозу пухлини, хемокіни та ін. Молозиво також містить ряд факторів росту, таких як інсуліноподібний фактор росту I і II, трансформуючий фактор росту альфа-, бета-1 та бета-2, фактори росту фібробластів, епідермальний фактор росту, гранулоцитарно-макрофагальний стимулюючий фактор росту, тромбоцитарний фактор росту, фактор росту судинного ендотелію, та колонієстимулюючий фактор-I. За допомогою годування грудьми антитіла та кофактори в молозиві можуть забезпечувати пасивний імунітет реципієнту. Зазвичай антитіла та кофактори передаються новонародженому від матері і забезпечують перший захист від патогенних мікроорганізмів. Фактори росту також стимулюють відновлення та покращення роботи кишечника. Однією з умов, яка може бути вирішена за допомогою пасивного імунітету є діарея. Діарея обумовлена, головним чином, прийманням патогенів. За даними Всесвітньої організації охорони здоров’я (ВОЗ), причиною діареї у восьмидесяти восьми відсотках випадків в усьому світі є небезпечна вода, антисанітарні умови або недотримання гігієни. Ці випадки призводять до приблизно 1,5 мільйону смертей на рік, більшість з них - це загибель дітей.(Pruss-Urstun et al., Safer water, better health: costs, benefits and sustainability of interventions to protect and promote world health. World Health Organization, Geneva, 2008. ISBN 978 92 4 1596435). Особливе місце займає глобальна проблема випадків інфекційної діареї в країнах, що розвиваються, які є причиною високої захворюваності та смертності, особливо в педіатричній популяції. Наприклад, Індія має один з найвищих показників смертності новонароджених у світі за даними Human Development report, Організації Об’єднаних Націй 2009 року. Наприклад, глобальна некомерційна організація Save the Children повідомляє, що кожні 15 секунд в Індії помирає одна дитина, і в 90% цих випадків смерті від хвороб, таких як діарея, можна було б запобігти. Ротавірус і вакцина проти кору, миття рук з милом, покращення постачання питної води та каналізації являються рекомендаціями ВОЗ для профілактики діареї, однак і ці міри не є ефективними для лікування цієї хвороби. 1 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Стандартний протокол лікування в більшості країн світу для діареї у дітей включає в себе одночасне введення антибіотиків і пероральну регідрацію. По багатьом причинам антибіотики є ліками, які відпускаються за рецептом. Антибіотики не ефективні при лікуванні вірусних інфекцій. Наприклад, ротавірус є причиною приблизно 40 відсотків всіх випадків госпіталізації, пов’язаних з діареєю серед дітей у віці до п’яти років у всьому світі (Weekly Epidemiological Record, vol. 83, no. 47, 21 November 2008). Невірне використання антибіотиків може сприяти резистентним штамам бактерій. І навпаки, інфекція може бути викликана резистентними штамами бактерій. Навіть при найсприятливіших умовах, використання відповідного антибіотика може зайняти декілька днів, щоб зменшити прояв симптомів діареї. Іншим недоліком є те, що введення антибіотиків може викликати руйнування, як патогенних, так і доброякісних бактерій в шлунково-кишковому тракті, які можуть надалі призвести до звільнення ендотоксичих ліпополісахаридів. (Holzheimer, The significance of endotoxin release in experimental and clinical sepsis in surgical patients-evidence for antibiotic-induced endotoxin release? Infection. 1998 Mar-Apr;26(2):77-84). Ці ендотоксини мають багато системних побічних ефектів, включаючи лихоманку, зміну кількості лейкоцитів, дисемінованого внутрішньосудинного згортання крові, гіпотонії, шоку і смерті, мальабсорбцію, і як наслідок - пряма ін’єкція достатньо невеликих доз ендотоксину призводить до смерті у більшості ссавців. Todar K. Bacterial Endotoxin. Textbook of Bacteriology. 2008. textbookofbacteriology.net. За даними ВОЗ, терапія пероральною регідратацією і цинком при продовженні годування, включаючи грудне годування, рекомендується для лікування діареї у дітей. Сироп цинку або збагачений цинком розчин для пероральної регідратації (РПР, 40 мг/л) зазвичай використовується в дозі від 15 до 30 мг в день. Цинк є недорогим засобом, але достатньо ефективним. Сироп цинку призводить лише до 25 відсотків скорочення продовження гострої діареї, і 40-відсотковому зменшенню летальних наслідків. (Bhutta et al. Therapeutic effects of oral zinc in acute and persistent diarrhea in children in developing countries: pooled analysis of randomized controlled trials. The American Journal of Clinical Nutrition. 2000; 72(6):1516-22). В одному дослідженні оцінювали ефективність та безпечність збагачених цинком (40 мг/л) СПР серед 1219 дітей з гострою діареєю. Клінічні результати серед збагачених цинком СПР групи були значно кращими, порівняно з тією контрольною групою, яка отримала тільки стандартні СПР. У цьому дослідженні, загальна кількість випорожнень була нижче серед цинк-СПР групи порівняно з загальною кількістю в контрольній групі. Суттєвого впливу на тривалість діареї або ризик тривалого проносу не було відзначено. (Bahl R, Bhandari N, Saksena M, et al. Efficacy of zinc-fortified oral rehydration solution in 6- to 35-month-old children with acute diarrhea. J Pediatr 2002;141:677-82). Відомо, що антибіотики неефективні для лікування вірусних інфекцій, наприклад, ротавірусної інфекції. Інші втручання мають обмежену ефективність. Крім того, підходящі діагностичні способи визначення причини діареї не завжди доступні. Очевидно, що швидкий, ефективний та економічний варіант для недиференційованої діареї є бажаним. Існує потреба в ефективних, економічних композиціях і способах для лікування діареї і кишкових інфекцій у клінічних застосуваннях широкого спектру дії, недиференційованих або змішаних. СУТНІСТЬ ВИНАХОДУ Винахід розкриває композиції та способи пасивної імунізації, в котрих специфічно зв’язуючі молекули, такі як специфічний імуноглобулін, в поєднанні з матрицею-носієм створюють композиції для перорального введення або введення через слизову оболонку для ведення мікроорганізмів; в тому числі для лікування або профілактики патогенних інфекцій або небажаних деформацій. У варіантах втілення винаходу композиції не вводять новонародженим. В одному із варіантів втілення винаходу пропонується введення композиції не новонародженій людині для ведення мікроорганізмів, які містять щонайменше одну специфічно зв’язуючу молекулу, або її фрагмент, отриманий з адаптивної імунної системи тварини, причому специфічно зв’язуюча молекула вибрана з імуноглобулінів, антитіл, пептидів, варіабельного рецептору лімфоцитів, фактору передачі, або їх суміші, а матриця-носій містить два або більше компонентів вродженої імунної системи ссавця, окрім людини, при чому матриця може бути вибрана або отримана з компонентів, таких як молозиво, молоко, сироватка, плазма, слина, лімфатична рідина, слизові або слізні рідини, до того ж матриця і специфічно зв’язуючі молекули отримані з різних видів. У переважному варіанті втілення винаходу матриця-носій складається з коров’ячого молозива. В іншому варіанті втілення винаходу матриця містить компоненти імунної системи, які вибрані з лізоцима, фосфоліпази, дефензину, опсонінів, компонентів системи комплементу, бета-у протеїн-багатих пептидів (ПБП), лактоферину, трансферину, цитокинів, інтерлейкинів, 2 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 хемокинів, інтерферинів, ФНО-альфа, фібронектину, лейкоцитів, білих кров’яних тілець, фагоцитів, макрофагів, моноцитів, нейтрофілів, поліморфно-ядерних клітин, дендритних клітин, тучних клітин, еозинофілів, базофілів, натуральних кілерів (NK), лімфокін-активованих кілерів (ЛАК), дефензину, елестази, катепсину G, мієлопероксидази та NADPH-оксидази. В різних варіантах втілення винаходу композиція містить фармацевтично прийнятний носій. В інших варіантах втілення винаходу композиція містить носій для харчових продуктів. Також у варіанті втілення винаходу композиції можуть бути введені за допомогою перорального введення, назального введення, очного введення або їх комбінації. В інших варіантах втілення винаходу композиція не включає екзогенного доданого полімеру, сополімеру, ліпосоми, гідрогеля або фібрину. В інших варіантах втілення винаходу композиція не містить мікросфер або мікрокапсул. У ще одному варіанті втілення винаходу композиція не містить екзогенно доданого антигена. В іншому варіанті втілення винаходу специфічно зв’язуючі молекули специфічно зв’язуються з патогеном, патоген-пов’язаним токсином, патоген-пов’язаним елементом адгезії, небажаним штамом або їх комбінаціями. В одному аспекті патоген включає людський або ветеринарний, кишковим або шлунково-кишковий патоген, який викликає гастроентерит. В різних аспектах, патоген або небажаний штам обирають з групи, яка складається з: Campylobacter jejuni, Salmonella enterica serovar Typhi, Shigella dystenteriae, Plesiomonas shigelloides, Escherichia coli (включаючи ентеропатогенний E. coli, (ETEC) ентеротоксигенний E. coli, (EaggEC) ентероагрегативний E. coli, (EIEC) ентероінвазивний E. coli, та (EHEC) геморагічний E. coli), Clostridium dificile, Yersinia enterocolitica, холерний вібріон (Vibrio cholera) 01, Vibrio 0139, Non-Ol Vibrios, Vibrio parahaemolyticus, Aeromonas hydrophia, Clostidium perfringens, Clostridium difficile, ентерогепатичний Helicobacter (включаючи Helicobacter pylori), Staphylococcus aureus, Klebsiella, ротавірус, коронавірус, норовірус, кальцивірус, кишкові аденовіруси, цитомегаловірус, астровірус, S. pneumoniae, H. influenzae, Neisseria gonorrhoeae, вірус оперізувального герпесу, Fusarium spp. i Acanthamoeba spp. В конкретному аспекті патоген-пов’язаний токсин містить ендотоксин або екзотоксин. У другому конкретному аспекті, патоген-пов’язаний елемент адгезії містить адгезини, кадгерини, війки, фібріли, вірусну адгезивну структуру або їх комбінації. В різних варіантах втілення винаходу композиція вводиться перорально в кількості, ефективній для лікування або профілактики недиференційованої діареї, діареї мандрівників, ротавірусної діареї, токсин-опосередкованої діареї, холери, інфекції С.difficile, дизентерії, черевного тифу, пептичної виразки або ведення шлунково-кишкової флори. В іншому аспекті ефективна кількість композиції наділяє пасивним імунітетом суб’єкт. В іншому варіанті втілення винаходу винахід відноситься до способу отримання композиції шляхом наступних кроків: (а) отримання від тварини, щонайменше, однієї специфічно зв’язуючої молекули або її фрагменту, який зв’язується з антигеном, в якому специфічно зв’язуючу молекулу вибирають з імуноглобуліну, антитіла, пептида, варіабельних рецепторів лімфоцитів, передачі фактору трансферу, та іх суміші; (б) отримання щонайменше однієї матриці-носія, яка містить щонайменше два компоненти, отримані з тварини, яка не є людиною, обрані з групи, яка складається з ферментів, лактоферину, трансферину, неспецифічних імуноглобулінів, цитокинів, білих кров’яних тілець, компонентів комплементу, інтерферонів і фібронектинів; (в) отримання твердої форми матриці-носія та специфічно зв’язуючої молекули або її фрагменту; та (г) змішування твердої форми матриці-носія з твердою формою специфічно зв’язуючої молекули або її фрагменту. В іншому варіанті втілення винаходу даний винахід відноситься до способу отримання імунітету за допомогою композиції. Спосіб містить (а) отримання щонайменше одного екзогенного специфічно цільового імунного фактора, (б) отримання в порошкоподібній формі щонайменше одного екзогенного специфічно цільового імунного фактору, (в) отримання щонайменше однієї екзогенної матриці-носія, необов’язково змішаної екзогенної матриці-носія шляхом змішування агентів для підтримки та взаємодії з екзогенними специфічними цільовими імунними факторами, (г) отримання в порошкоподібній формі щонайменше однієї екзогенної матриці-носія, і (е) змішування порошкоподібної форми з кроку (б) з порошкоподібною формою з кроку (г), в результаті отримавши композицію, яка надає пасивний імунітет. В одному з аспектів композиція, що надає пасивний імунітет, включає дозу препарату з контрольованим вивільненням. В різних аспектах композиції, які надають пасивний імунітет, містять фармацевтично прийнятний носій. В різних аспектах композиції, які надають пасивний імунітет, не містять полімер, сополімер, ліпосому, гідро гель або фібрін. В різних аспектах композиції, які надають пасивний імунітет, не містять мікросфер або мікрокапсул. В різних аспектах композиції, які надають пасивний імунітет, не містять імуноген або антиген. 3 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Даний винахід включає щонайменше одну з наступних відмінних ознак: (а) він дозволяє розробити дизайн матриці, специфічних факторів, а також активізувати передумови для конкретних або цільових захворювань, (б) він забезпечує дозу композиції з контрольованим вивільненням з різних сумішей та компонентів, які можуть бути відрегульовані залежно від необхідного ефекту, (в) забезпечує дозу композиції з контрольованим вивільненням, яка містить специфічні компоненти, які перевищують нормальні фізіологічні рівні, які можуть бути досягнуті в природних системах, (г) він використовує важкі багатокомпонентні багато шляхові взаємодії для створення системного ефекту, який імітує нативну відповідь імунної системи, (д) дозволяє створювати попередню або потенційовану пасивну імунну відповідь, яка може бути введена в потенційований стан, а потім активується присутністю патогенів-мішеней, токсинів, хворобливим станом або синдромом, (е) він забезпечує створення композицій, які мають певну специфічність або широкий спектр дії, щоб відповідати потребам конкретного цільового хворобливого стану або синдрому, включаючи практичне оточуюче середовище, в якому буде використовуватися продукт, і (ж) забезпечує створення композицій, які можуть на використовуватися для профілактики, а також для терапевтичного використовування. В іншому аспекті шляхом регулювання кількості специфічно зв’язуючих молекул, таких як поліклональні антитіла, може бути отримана композиція препарату дози, що регулюється. В переважному варіанті втілення винаходу щонайменше одна специфічно зв’язуюча молекула включає імуноглобулін Y, отриманий від імунізованих курей. В інших специфічних аспектах імуноглобулін Y містить пул IgY, характерний, принаймні, для ентеротоксигенного E.coli spp., адгезивний фактор пілей E.coli K99, Clostridium perfringens toxoid, Salmonella typhimurium, ротавіруса і коронавіруса. В іншому варіанті втілення винаходу композиція вводиться місцевим способом у слизову мембрану. В іншому варіанті втілення винаходу патоген містить збудник вагініту. В різних аспектах патоген обраний з групи, яка складається з: Gardnerella SPP, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydiaceae trachomatis, Mycoplasma spp., Campylobacter jejuni, Trichomonas vaginalis, віруса герпесу 1-го типу, віруса герпесу 2-го типу, Candida albicans, Candida glabrata, Candida tropicalis, Candida parapsilosis i Candida krusei. В іншому варіанті втілення винаходу збудником є бактерії Streptococcus групи А. В іншому варіанті втілення винаходу патоген збудника включає патоген, який викликає кон’юктивіт, та обирається з групи, що складається з: S. aureus, S. pneumoniae, H. influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, аденовірусу, вірусу простого герпесу, вірусу оперізувального герпесу, ентеровірусу, Fusarium spp, Candida spp. i Acanthamoeba spp. В іншому варіанті втілення винаходу композиції за винаходом використовують в якості препаратних композицій для введення суб’єкту, який потребує цього та страждає захворюванням, яке утворює спеціальні дієтичні потреби, такі як діарея у дітей, хвороба Крона та виразковий коліт. КОРОТКИЙ ОПИС КРЕСЛЕНЬ На Фігурі 1 зображена середня щоденна частота випорожнень протягом 5 днів польових випробовувань 2-х контрольних груп у порівнянні з негативним контролем для композиції Прикладу 1А. В дослідженні 1 (n=29) та дослідженні 2 (n=31) композицію за Прикладом 1А вводять один раз на день протягом трьох днів з антибіотиком та солями пероральної регідратації (СПР). В групі негативного контролю (n=28) вводяться лише антибіотик та СПР без композиції за винаходом. На Фігурі 2 зображена середньодобова консистенція випорожнень за шкалою від 1 до 5 (1 = нормальна і 5 = рідка) в порівнянні з аналогічним п’ятиденним періодом для тих самих трьох груп із Фігури 1. На Фігурі 3 зображена середня оцінка самопочуття хворого лікарем за шкалою від 1 до 5 (1 = здоровий і 5 = важкий важко хворий) за той же п’ятиденний період для тих самих груп з Фігури 1. На Фігурі 4 зображена середня щоденна частота випорожнень протягом періоду 5 днів польового випробовування (дослідження) 3-х контрольних груп. Дослідження 1 і 2, та негативний контроль такі ж самі, як показано на Фігурі 1. У дослідженні 3 (n=140), пацієнтам вводили композиції за Прикладом 1В з антибіотиком та СПР. На Фігурі 5 зображена середньодобова консистенція випорожнень за шкалою від 1 до 5 (1 = нормальна і 5 = рідка) протягом аналогічного п’ятиденного періоду для тих самих чотирьох груп із Фігури 4. 4 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 На Фігурі 6 зображена середня оцінка самопочуття хворого лікарем за шкалою від 1 до 5 (1 = здоровий і 5 = важкий важко хворий) за той же п’ятиденний період для тих самих чотирьох груп з Фігури 1. На Фігурі 7 зображена середня щоденна частота випорожнень протягом 5 днів для Досліджень 1 і 2, негативний контроль, Дослідження 3 розбито на шість підгруп (ES204A): 2 г висушеного розпиленням яйця з 4 г молозива вводили протягом 3 днів; (ES204B): 2 г висушеного розпиленням яйця з 4 г молозива вводили протягом 2 днів; (MT204A) 2 г термічно висушеного яйця з 4 г молозива вводили протягом 3 днів; (MT304A) 3 г термічно висушеного яйця з 4 г молозива вводили протягом 3 днів; (MS204A) 2 г висушеного розпиленням яйця з 4 г молозива вводили протягом 3 днів; (MS304A) 3 г висушеного розпиленням яйця з 4 г молозива вводили протягом 3 днів; На Фігурі 8 зображена середньодобова консистенція випорожнень за шкалою від 1 до 5 (1 = нормальна і 5 = рідка) в порівнянні з аналогічним п’ятиденним періодом для тих самих груп із Фігури 7. На Фігурі 9 зображена середня оцінка самопочуття хворого лікарем за шкалою від 1 до 5 (1 = здоровий і 5 = важкий важко хворий) за той же п’ятиденний період тієї ж самої групи з Фігури 7. ДЕТАЛЬНИЙ ОПИС ВИЗНАЧЕННЯ Терміни «попередження», «запобігання», «недопустимість», «профілактика», які використовуються тут та відносяться до опису дії (наприклад, введення сполуки або фармацевтичної композиції по даному винаходу), що застосовується до настання клінічного прояву хворобливого стану або для того, щоб запобігти або зменшити такі клінічні прояви хворобливого стану або хвороби. Такі попередження та присікання не повинні бути абсолютними, щоб бути корисними. Терміни «лікування», «лікувати» і «лікувальний» в даному описі відносяться до курсу дій (наприклад, введення сполуки або фармацевтичної композиції), які ініційовані після початку клінічних проявів хворобливого стану або стану таким чином, щоб усунути або зменшити такі клінічні прояви хворобливого стану або хвороби. Таке лікування не повинно бути абсолютним, щоб бути корисним. Термін «потребує лікування» використовується тут по відношенню до судження, зробленого особою, яка піклується, про те, чого потребує пацієнт або що принесе користь пацієнту від лікування. Це рішення приймається на основі цілого ряду факторів, які знаходяться в області компетенції такої особи, але які включають в себе розуміння того, що пацієнт хворий або буде хворий, результатом чого буде стан, який піддається лікуванню способом, сполукою або фармацевтичною композицією за винаходом. Термін «потребує профілактики», що використовується тут, посилається на рішення, прийняте особою, яка піклується, про то, чого пацієнт потребує або чи буде корисна профілактика. Це рішення приймається на основі цілого ряду факторів, які знаходяться в області компетенції такої особи, але які включають в себе розуміння того, що пацієнт хворий або буде хворий, результатом чого буде стан, який піддається лікуванню способом, сполукою або фармацевтичною композицією за винаходом. Термін «індивідуум», «суб’єкт» або «пацієнт», який тут використовується, відноситься до будь-якої тварини, включаючи птахів та ссавців, таких як миші, «норвезькі пацюки», бавовняні пацюки, піщанки, морські свинки, хом’яки, інші гризуни, кролики, собаки, коти, свині, велика рогата худоба, вівці, кози, коні або примати і люди. Термін може означати чоловіка, жінку або обох, або виключати чоловіка або жінку. В одному аспекті, пацієнт є дорослою людиною. В іншому аспекті, пацієнт є дитиною людини. В іншому аспекті пацієнтом є новонароджений, дитина чи підліток. Термін «новонароджений» відноситься до немовля в перші 28 днів після народження. Термін «дитина» відноситься до тварини старше 28 днів. Термін «ефективна кількість», який використовується тут, означає кількість агенту, окремо або як частина фармацевтичної композиції, яка має можливість надавати помітний позитивний вплив на будь-який симптом, аспект, характеристики стану захворювання або хвороби. Такий ефект не повинен бути абсолютним, щоб бути корисним. Термін «включаючи», який використовується тут, не обмежений за своїм обсягом, таким чином, додаткові елементи розглядаються як можливі доповнення до названих; цей термін може означати в будь-якому випадку як «включаючий, але не обмежуючий». Термін «імунізувати», «активна імунізація», «активно імунізувати» означає цілеспрямовану імунізацію суб'єкту, при цьому суб’єкт підлягає дії з боку антигену, наприклад, антигену, 5 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 отриманого з мікроорганізму, такі як, але не обмежуючись ними, віруси або бактерії; контакт такий вплив може бути здійснений шляхом впливу на суб'єкт інтактного організму, послабленого організму, частини організму, одного або декількох антигенів, присутніх в організмі або комбінацією вищевказаних. Термін «пасивно імунізувати», «пасивно імунізуючий» та «пасивна імунізація» означає забезпечити антитіла проти антигену, наприклад, антигену, отриманому з мікроорганізму, такого як, але не обмежуючись ними, віруси або бактерії, для суб’єкту без необхідності виклику імунної відповіді на організм суб’єктом. Пасивна імунізація забезпечує миттєвий захист, але в результаті у суб’єкта не розвиваються клітини пам’яті. Термін «пасивний імунітет», який використовується тут, відноситься до штучно отриманого імунітету, який досягається шляхом передачі антитіл суб’єкту. Терміни «яйце» або «яєчний продукт» означають, що джерелом є пташина яєчна шкарлупа цілком (звичайна, імунізована або інша) або будь-який інший продукт або фракція, отримані з неї. Терміни «імунне яйце» або «імунний яєчний продукт» означають продукт з цілого яйця або будь-який продукт або фракція, отримані з нього, які, в свою чергу, отримані від тварин, несучих яйця, у котрих підтримують імунізований стан. Термін «антиген» відноситься до повної молекули або її фрагменту, які можуть викликати імунну відповідь в організмі, зокрема тварини. Цей термін включає імуногени та області їх фрагменти, відповідальні за антигенність або антигенні детермінанти. Термін «поліклональні антитіла» відносяться до антитіл, які являють собою гетерогенні популяції молекул антитіл, отриманих із сироватки тварин, імунізованих антигеном або його антигенним функціональним похідним. Для отримання поліклональних антитіл, різноманітні тварини-носії можуть бути імунізовані ін’єкціями антигену. Різні ад’юванти можуть бути використані для збільшення імунної відповіді, в залежності від виду хазяїна. Термін «моноклональні антитіла» добре відомий в науці та означає антитіла, отримані масовим чином в лабораторії з одного клону, та такі, які розпізнаються тільки одним антигеном. Моноклональні антитіла, як правило, отримують шляхом злиття типових короткоживучих Вклітин, які продукують антитіла, зі швидко зростаючими клітинами, такі як ракові клітини (їх іноді називають «безсмертні» клітини). В результаті гібридні клітини або гібридоми, швидко розмножуються, утворюючи клон, який виробляє велику кількість антитіл. «Моноклональні антитіла», по суті, є однорідною популяцією антитіл, націлених на конкретний антиген або епітоп. Вони можуть бути отримані будь-яким способом, який забезпечує виробництво молекул антитіл безперервними клітинними лініями в культурі. Моноклональні антитіла можуть бути отримані способами, відомими спеціалістами в даній галузі. Див., наприклад, Kohler, et al., Nature 256:495-497, 1975, та патент США No. 4376110. Термін «кристалічний» означає антитіло, таке як моноклональне антитіло, котре очищають шляхом кристалізації, наприклад, шляхом серійної кристалізації. Кристалічні антитіла можуть бути використані для отримання невеликого об’єму висококонцентрованих форм. (Yang et al., 2003, Crystallline antibodies for subcutaneous delivery. PNAS 100(12):6934-6939). Термін «недиференційована діарея» означає, що збудника діареї не діагностовано. Термін «фрагмент антитіла» включає в себе будь-який синтетичний інженерії або рекомбінантний білок, який діє як антитіло шляхом зв’язування з конкретним антигеном з подальшим утворюванням комплексу. Наприклад, фрагменти антитіл включають виділені фрагменти, «Fv»-фрагменти, які складаються з варіабельних областей важкого та легкого ланцюгів, молекули рекомбінантного одноланцюгового поліпептиду, в якому легкий і важкий ланцюг варіабельних областей з’єднаний пептидним лінкером («scFv-білки») та мінімальних одиниць розпізнавання, які складаються з амінокислотних залишків, які імітують гіперваріабельну область. Фрагменти антитіл включають в себе частки антитіла, такі як F (ab’)2, F(ab)2, Fab’, Fab, Fv, sFv і таке інше. Незалежно від структури, фрагмент антитіла зв’язується з тим же антигеном, який розпізнається інтактним антитілом. Термін «фактор переносу» означає імунну молекулу приблизно 5000 Дальтон, яка містить амінокислоти, які викликають антигенспецифічний клітинно-опосередкований імунітет, в першу чергу гіперчутливість уповільненого типу та виробництво лімфокинів, а також зв’язування антигенів між собою. (Kirkpatrick 1993, Structural nature and functions of transfer factors. Ann. N.Y. Acad. Sci. 685:362-368.) Термін «варіабельні рецептори лімфоцитів» означає лімфоцит-отримані молекули, виявлені у безщелепних хребетних, таких як міноги і міксини. Ці тварини володіють безліччю варіабельних рецепторів лімфоцитів, які виробляються тільки з невеликої кількості генів і які зв’язуються з патогенними антигенами аналогічно антитілам, і з тим же ступенем специфічності. 6 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (Alder et al., 2005, Diversity and function of adaptive immune receptors in a jawless vertebrate. Science, 310(5756):1970-1973). Термін «клітинний рецептор» відноситься до ліганд-зв'язуючої молекули В-клітинного рецептору; мембрано-зв’язуючої молекули імуноглобуліну одного ізотипу (наприклад, IgD, IgM, IgE). За виключенням присутності області мембрани інтегрального мембранного домену, вони ідентичні своїми формами, що секретуються. Термін «специфічне зв’язування» в контексті характеристики специфічного зв’язування молекул, також відомий як специфічно-зв’язані імунні фактори, такі як антитіло, фрагмент антитіла, варіабельні рецептори лімфоцитів або фактор передачі, відносяться до можливості переважно зв’язуватися з конкретним антигеном, який присутній в однорідній суміші різних антигенів. У певних варіантах втілення винаходу взаємодія за типом специфічного зв’язування буде розрізняти бажані та небажані антигени (наприклад, антигени-«мішень» та антигени-«немішень») у зразку, в деяких варіантах втілення винаходу більше, ніж приблизно від 10 до 100 разів або більше (наприклад, більше ніж приблизно 1000 - або 10000 разів). В деяких варіантах втілення винаходу специфічно зв’язуюча молекула може специфічно зв’язуватися з епітопом, використання загальним для різноманітних видів або штамів мікроорганізмів у порівнянні з незагальними епітопами. В деяких варіантах втілення винаходу аффінність між антитілом та антигеном, коли вони специфічно зв’язуються в комплекс антиген-антитіло, характеризується -6 -7 -8 -9 -10 Kd (константа дисоціації) менше 10 М, менше 10 M, менше 10 М, менше 10 М, менше 10 -11 -12 М, менше 10 М, або менше приблизно 10 М або менше. Термін «вроджена імунна система» або неспецифічна імунітет імунна система, відноситься до клітин, молекулярних компонентів і механізмів які захищають хазяїна від інфекції іншими організмами неспецифічним шляхом. Клітини і молекулярні компоненти вродженої імунної системи розрізняють і реагують на патогени загальним шляхом, але на відміну від адаптивної імунної системи, це не дає довгострокового або захисного імунітету суб’єкту. Вроджена імунна система забезпечує миттєвий захист від інфекції. Хребетні володіють другим рівнем захисту адаптивної імунної системи, яка активує вроджену відповідь. Термін «адаптивна імунна система» відноситься до вузькоспеціалізованих, системних клітин і процесів, які розпізнають і реагують на антиген, наприклад, для усунення, нейтралізування або запобігання росту патогена. Система легко адаптується із-за соматичної гіпермутації (процес прискорення соматичної мутації) і V(D)J рекомбінації (необоротна генетична рекомбінація генних сегментів антигенних рецепторів). Адаптивний імунітет також згадується як набутий імунітет та створює імунологічну пам’ять. Адаптивною імунною відповіддю є патоген і специфічний антиген, та існує розрив в часі між впливом і максимальною відповіддю. Адаптивна імунна відповідь базується на принципі клонального розпізнавання, так що після першого контакту з антигеном, примовані лімфоцити або диференціюються в імунні ефекторні клітини або утворюють розширений пул клітин пам’яті, які відповідають за вторинний вплив того ж антигену шляхом ампліфікованої послідовності та більш швидкої реакції. Термін «тварина» відноситься до визначення тваринного світу. Всі займенники призначені для більш широкого значення. Якщо не вказано інше, займенники жіночого роду охоплюють чоловічі такі чоловічого роду, займенники чоловічого роду охоплюють жіночі такі жіночого роду, займенники однини включають такі множини, так займенники множини охоплюють займенники однини. Числові діапазони, які тут використовуються, включають кожне число та підмножинність чисел, які містяться в межах цьому діапазоні, які конкретно розкриті або ні. Крім того, ці числові діапазони повинні розглядатися як підтримка пунктів формули, які відносяться до будь-якого числа або підмножинності чисел в цьому діапазоні. Наприклад, вказування від 1 до 10 повинно розглядатися як підтримка діапазону від 2 до 8, від 3 до 7, від 5 до 6, від 1 до 9, від 3,6 до 4,6, від 3,5 до 9,9 і так далі. Усі патенти, патентні публікації і рецензовані публікації (тобто «посилання»), приведені тут, включені в якості посилання в тій самій мірі, як якби кожне окреме посилання було конкретно і індивідуально вказане за допомогою посилання. У випадку протиріччя між даним винаходом та включеним посиланнями, дійсним вважати опис винаходу. СПОСОБИ ВИНАХОДУ Винахід розкриває композиції та способи, які використовуються у веденні небажаних штамів або патогенних мікроорганізмів. Один варіант втілення цього винаходу базується на способі створювання композиції на основі антитіл-мішеней, вбудованих або включених в матрицю-носій, де антитіла використовують контрольовану форму з перехресною реактивністю на безліч кластерів пов’язаних антигенів-мішеней, і де матриця-носій містить базу і кофактори, які посилюють дію 7 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антитіл. Використання таких композицій антитіло/матриця може включати забезпечення широкого спектру дії терапевтичних втручань при умовах, коли клас збудника, але не конкретного або певного збудника, відомий або підозрюється, або в умовах, коли більшість (змішаних) збудників являються активними. Новий спосіб застосування антитіла подібним чином був розроблений, щоб використовувати обидві переваги - специфічність та перехресну реактивність - антитіла, а потім додатково використовувати компоненти в матриці-носії для отримання багатокомпонентної імунної відповіді in situ. В цьому варіанті втілення винаходу антитіла призначені для з’єднання до всіх тісно пов’язаних епітопів, які являють собою структурно зв’язаний кластер антигенів. Ці антигени можуть значно відрізнятися в багатьох характеристиках і можуть походити з різних джерел, організмів або видів. В одному варіанті втілення винахід містить спосіб специфічного зв’язування молекул (імунних факторів, наприклад - антитіл) в матриці-носії, де специфічно зв’язані молекули володіють специфічністю по відношенню до класу зв’язаних антигенів, і специфічно перехреснореактивні з різноманітними екземплярами членів цього класу. Існує ступінь структурної подібності в зв’язаних кластерах антигенів-мішеней, не дивлячись на організм або патоген, який є джерелом антигену. Подібність в структурі може призвести до явища, котре відомо як «перехресна реактивність» (стеричне зв’язування реакційноздатної молекули з антигеном, окрім призначеного антигену). Перехресна реактивність часто ненавмисна, і в більшості випадків вважається джерелом помилок і неспецифічності. Тим паче, в цьому варіанті втілення винаходу міра і ступінь перехресної реактивності контролюється за допомогою різних засобів для обмеження і направлення її експресії таким чином, щоб забезпечити бажані характеристики. Це лікування наділяє пацієнтів пасивним імунітетом. Характер лікування зв’язує фактори ризику із їжею з джерела, де антитіла були зібрані (наприклад, аналогічними факторами ризику будуть використані в їжу яйця і склянка молока). Дане лікування є більш ефективним і з меншою токсичністю, ніж існуючі в теперішньому часі альтернативні втручання. Даний винахід базується на відкритті того, що використання екзогенної (які містять компоненти, отримані від тварини, що відрізняються від тварини, яка підлягає лікуванню) матриці-носія в поєднанні з екзогенно отриманими (отримані або відповідні імунним факторам, отриманим від тварини, що відрізняються від тварини, яка підлягає лікуванню) специфічно цільовими імунними факторами може бути використано для транспортування і введення ефективного багатопараметричного імунітету суб’єкту, який потребує цього. В одному аспекті, винахід відноситься до композиції, яка містить: а) ефективну кількість для людини, за виключенням новонародженої, щонайменше однієї специфічно зв’язуючої молекули або її фрагмента, отриманого від тварини і котре специфічно зв’язується з антигеном, в котрому специфічно зв’язуючі молекули обрані з імуноглобулинів, антитіл, пептидів, варіабельних рецепторів лімфоцита, факторів переносу і їх сумішей, та, б) матрицю-носій, яка містить, щонайменше, два компоненти, отримані від нелюдиноподібної тварини, вибраних з групи, яка складається з ферментів, лактоферина, трансферина, неспецифічних імуноглобулінів, цитокинів, білих кров’яних тілець, компонентів комплементу, інтерферонів і фібронектинів, де щонайменше одна специфічно зв’язуюча молекула і, щонайменше, два компоненти матриціносія, отримані з різноманітних тварин. В іншому аспекті, винахід відноситься до способу отримання композиції, включаючого (а) отримання, щонайменше, однієї специфічно зв’язуючої молекули або її фрагменту від тварини, яка зв’язується зі специфічним антигеном, в котрому специфічно зв’язуюча молекула обрана з імуноглобуліна, антитіла, пептида, варіабельних рецепторів лімфоцита, фактора переносу, та їх суміші, (б) отримання, щонайменше, однієї матриці-носія, яка містить, як мінімум, два компоненти, отриманих з нелюдиноподібної тварини, обраної з групи, яка складається з ферментів, лактоферина, трансферина, неспецифічних імуноглобулинів, цитокинів, білих кров’яних тілець, компоненти комплементу, інтерферонів і фибронектинів; (в) отримання в твердій формі матриці-носія і специфічно зв’язуючої молекули з твердою формою специфічно зв’язуючої молекули або їх фрагментів; та (г) змішування твердої форми матриці-носія із твердою формою специфічно зв'язуючої молекули або її фрагментом. В ще одному аспекті, композиції за винаходом корисні при лікуванні або профілактиці мікробних інфекцій. У варіантах втілення винаходу мікробні інфекції включають ті, які викликані Campylobacter jejuni, Salmonella, Salmonella enterica serovar Typhi, Shigella dystenteriae, Plesiomonas shigelloides, Escherichia coli, ентеропатогенною E. coli, ентеротоксигенною E. coli, геморагічною E. coli, Clostridium dificile, Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae O1, Vibrio O139, Non-O1 Vibrios, Vibrio parahaemolyticus, Aeromonas hydrophila, Clostridium perfringens, 8 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ентерогепатичним Helicobacter, Helicobacter pylori, Staphylococcus aureus, Klebsiella, ротавірусом, коронавірусом, норовірусом, кальцивірусом, кишковим аденовірусом, цитомегаловірусом і астровірусом. У варіантах втілення винаходу композиції корисні для лікування або профілактики станів, таких як недиференційована діарея, діарея мандрівників, ротавірусна діарея, токсин-опосередкована діарея, холера, інфекції C. difficile, дизентерія, черевний тиф, пептична виразка, вагініт, або для ведення шлунково-кишкової флори. У конкретному варіанті втілення винаходу композиції і способи винаходу використовуються для лікування або профілактики діареї. Є декілька організмів, які викликають діарею, включаючи віруси, бактерії, паразити та найпростіші. Основними причинами бактеріальної інфекції, наприклад, в Індії, є: Escherichia coli spp., ентеротоксигенна E. coli, етероадгерентна E. coli, Auromonas spp., Camphylobacter jejuni, Shigella spp., Vibrio spp., Vibrio cholera O1, Vibrio parahaemolyticus, Salmonella spp., Staphylococcus aureus, Clostridium difficile, Clostridium perfringens и Yersinia enterocolitica. Вторинними причинами є: Clostridium difficile (токсин А або В). Головною причиною вірусної діареї є ротавірусна інфекція, хоча Calcivirus, Astrovirus, Norwalk вірус та аденовірус, як відомо, також викликають діарею. Вторинними причинами вірусної діареї є: кишковий аденовірус, вірус простого герпеса і вірусний гепатит. (John B. nd Sullivan and Gary R. Krieger, Clinical Environmental Health and Toxic Exposures, 2 Ed., Lippincott Williams & Wilkins, 2001,page 1040). Також відомі регіональні та сезонні відмінності в розповсюдженні. Наприклад, в Пранам, Індія, одне дослідження показало, що на ротавірус доводилося в середньому 15-25% випадків дитячої діареї. Ентеротоксигенна E. coli нараховувала від 10 до 20% від загальної кількості випадків діареї, ентеропатогенна E. coli викликає приблизно від 1 до 5 % випадків. Інфекція Camphylobacter jejuni викликає приблизно від 10 до 15%, і на Shigella доводиться від 5 до 15% випадків діареї у дітей. Холерний вібріон викликав приблизно від 5 до 10% випадків. Salmonella (не черевна) викликала приблизно до 5% випадків. Простіші інфекції в основному були викликані Cryptosporidium (5-15%). Непатогенний випадок був ідентифікований в приблизно від 20 до 30% випадків (Fricker, Children in the Tropics, Putting an end to diarrheal diseases, 1993-No. 204: 1-66). Різним регіонам всередині Індії приписують випадки бактеріальної діареї у дітей різноманітними патогенами з різним ступенем поширеності. Наприклад, дослідження в Оріссе, Індія, знайдені винайшло, що серед 866 зразків з позитивністю на культуру E. coli sp. (75,5%), патогенна E. coli sp. (13,2 Aeromonas spp. (2%), Shigella spp. (4.5%), Vibrio cholera Ol (17.3%), V cholera 0139 (1%) і Salmonella spp. (0,7%). find-health-articles.com/rec_pub_18806340-incidence. У зв’язку з широкою різноманітністю етіології, найбільш бажаним є ефективний, широкого спектру дії, економічний та безпечний спосіб лікування недиференційованої діареї. Більшість випадків дитячої діареї, схоже, викликані бактеріальною і вірусною інфекціями, але бажаним є альтернатива антибіотикам і противовірусним засобам. А. Композиції Один з аспектів даного винаходу включає в себе композиції, які підходять для лікування, профілактики або ведення мікробної флори. В варіантах втілення винаходу композиції є корисними для лікування патогенних інфекцій, зокрема шлунково-кишкового тракту. У варіантах втілення винаходу винахід забезпечує композицію, що містить: а) ефективну кількість для людини, за виключенням новонароджених, щонайменше, однієї специфічно зв'язуючої молекули або її фрагмента, які отримують від тварини і які специфічно зв'язуються з антигеном, при цьому специфічно зв'язуюча молекула вибрана з імуноглобулінів, антитіла, пептиду, варіабельних рецепторів лімфоцита, фактору трансферу і їх суміші; і, б) матриці-носія, що містить, щонайменше, два компонента, отриманих з нелюдиноподібної тварини, вибраних з групи, що складається з ферментів, лактоферину, трансферину, неспецифічних імуноглобулінів, цитокінів, білих кров'яних тілець, компонентів комплементу, інтерферонів і фібронектину, де, щонайменше, одна специфічно зв'язуюча молекула і, щонайменше, два компоненти матриці-носія отримують з різних тварин. Специфічно зв'язуючі молекули Композиції і способи винаходу забезпечують отримання специфічно зв'язуючих молекул або їх фрагментів з тварин, які специфічно зв'язуються з антигеном. Специфічно зв'язуючі молекули складаються з антитіла, фрагменту антитіла, пептиду, варіабельних рецепторів лімфоциту, фактору трансферу і їх суміші. Антитіла Антитіла, імуноглобуліни і інші біологічні імунні чинники (спільно іменовані як антитіла), як природні, так і їх синтетичні аналоги, є відомими терапевтичними агентами в організмі людини і тварин. 9 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Антитіла діють шляхом зв'язування (за допомогою нековалентних сил) між антигензв'язуючою ділянкою антитіла і частиною антигена, що називається антигенною детермінантою або епітопом. Антитіла мірою мають високий ступінь специфічності. Наприклад, область моноклональних антитіл розроблена, в основному, ніж для отримання більш специфічних і точних характеристик зв'язування. Проте ця висока специфічність може призвести до надмірно обмежених зв'язуючих атрибутів, коли агенти або антигени, які функціонально ідентичні, не реагують однаково на імунореагент або імунотерапію. Кросреактівність з іншого боку, як правило, розглядається як помилка або збій і є реакцією між антигеном і антитілом, яка була згенерована з аналогічним, але іншим антигеном. Контрольована перехресна реактивність може конструктивно використовуватися для розширення діапазону зв'язування антитіла. Один із варіантів втілення даного винаходу оснований на способі створення композицій цільових антитіл на основі вбудованих або таких, що входять в матрицю-носій, де антитіла використовують контрольовану форму перехресної реактивності на декілька груп відповідних антигенів-мішеней, і де матриця-носій містить опору і кофактори, які підсилюють дію антитіл. Використання таких композицій антитіло/матриця може включати надання широкого спектру дії терапевтичних втручань за умов, коли клас збудника, але не певного або конкретного збудника, відомий або підозрюється, або в умовах, коли безліч (змішаних) збудників є активними. Було розроблено новий підхід до вживання антитіла, який дозволяє отримати перевагу від специфічності і перехресної реактивності антитіл, а потім додатково використовувати компоненти в матриці-носієві для отримання багатокомпонентної імунної відповіді in situ. У цьому варіанті втілення винаходу антитіла призначені для з'єднання всіх тісно зв'язаних епітопів, які є структурно зв'язаним кластером антигенів. Ці антигени можуть значно відрізнятися в останньому і можуть походити з різних джерел, організмів або видів. Для цілей даного опису, антитіла можуть бути як моноклональними, так і поліклональними, отримані з будь-якої тварини, фрагментів, хімерної, людської або будь-якої іншої форми, та антитіла можуть бути будь-якого ізотипу, наприклад IgA, IgD, IgE, IgG і IgM (плацентарних плацентарні ссавці), IgY (кури) або інших, можуть бути біспецифічним або біфункціональним, або багатофункціональним або мультиспецифічним антитілом або його фрагментом. У варіантах втілення винаходу специфічно зв'язуюча молекула може бути вибрана з однієї з трьох основних категорій: моноклональних антитіл ссавців, поліклональних антитіл ссавців і поліклональних антитіл пташиних, або будь-яких інших фрагментів, отриманих з них, які зберігають здатність зв'язуватися з патогенним компонентом. Одним з варіантів втілення даного винаходу є використання у виробництві терапевтичних препаратів широкого спектру дії. Один спосіб отримання цього типу реаційної композиції включає отримання поліклональних антитіл, отриманих від відповідним чином імунізованих тварин, після чого такі антитіла розміщували в матриці-носієві. Поліклональними антитілами (або антисироватки) є антитіла, які отримані з різних ліній B-клітин. Їх зазвичай збирають однією масою з сироватки, молока, молозива, яєць або біологічних рідин імунізованої тварини. Вони є сумішшю молекул, що секретуються імуноглобулінами проти специфічного антигена або групи антигенів, враховуючи діапазон різних епітопів. Може існувати декілька антитіл для одного антигена (зв'язаних з різними епітопами) або для одного антитіла, щоб зв'язуватися з декількома антигенами унаслідок перехресної реактивності. Поліклональні антитіла можуть бути отримані з тварин, таких як: велика рогата худоба, вівці, коні, кози, свині, кролі, кури, качки, гуси або індички, які були вакциновані або інокульовані антигенами, отриманими з компонентівмішеней. Антитіла можуть бути зібрані, наприклад, з тканини, сироватки, молока або яєць, отриманих від прищеплених тварин. Це відрізняється від моноклональних антитіл, які ідентичні і моноспецифічні; виробляються одним типом імунних клітин, які є клонами однієї клітини «батька». Антитіла, що використовуються в даному винаході, можуть бути отримані з сироватки, плазми, молозива, молока, яєць або інших рідин, біологічно відповідних або з живильного середовища клітин, надосадової рідини і та ін. Антитіла, що використовуються в даному винаході, можуть бути оброблені будь-яким відповідним способом для отримання композиції і використання, включаючи, але не обмежуючись способи розділення, плазмаферез, процеси сушки, ліофілізацію, пастеризацію і консервацію. Антитіла, що використовуються в даному винаході, можуть бути оброблені і концентровані, сепаровані або очищені різними способами залежно від їх остаточного передбачуваного використання. При зміні суміші антитіл відповідно до різних варіантів втілення, винахід забезпечує композиції і способи, відповідні для лікування або профілактики інших шлунково-кишкових 10 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 інфекцій, таких як холера, C. difficile, дизентерія, Salmonella typhi (черевний тиф) і H.Pylori (виразкова хвороба). В одному варіанті втілення винаходу антитіла переважно виробляються у тварин, наприклад, за допомогою декількох підшкірних ін'єкцій або внутрішньочеревних ін'єкцій відповідного антигена і, при необхідності, ад'юванту. В одному аспекті, корисним може використовуватися кон'югація відповідного антигену (особливо, коли використовуються синтетичні пептиди) з білком, який є імуногенним для видів, що підлягають імунізації. Наприклад, антиген може бути кон'югований з гемоціанином морського молюска фіссурелли (KLH), сироватковим альбуміном, бичачим тіроглобуліном або інгібітором трипсину сої, з використанням біфункціонального або дериватизуючого агента, наприклад складного ефіру сульфо сукцинімід малєїмід бензоїлу (кон'югація через залишки цистеїну), N-гідроксісукцінімід (через залишки лізину), глутарового альдегіду, бурштинового ангідриду, SOCI2, або RN=С=NR, де R та R є різними алкільними групами. Тварин імунізують антигеном, імуногенними кон'югантами або похідними, як описано тут. В інших варіантах втілення винаходу антитіла можуть бути синтетичними або напівсинтетичними, наприклад, отримані з бібліотеки фагового дисплея, або отримані, як гуманізовані або химерні антитіла. Птахи (такі, як курка-несучка) значною мірою економічно ефективні як виробники антитіл, в порівнянні з ссавцями, та традиційно використовуються для такого виробництва. Пташині антитіла мають переваги в порівнянні з антитілами біохімічних ссавців. Імунологічні відмінності між ссавцями і птицями призводять до підвищеної чутливості і зниження фону в імунологічних тестах; а також високої специфічності і відсутності додаткових імунних ефектів при введенні ссавцям. На відміну від антитіл ссавців, пташині антитіла не активують людську систему комплементу через первинний або класичний шлях і вони не вступатимуть в реакцію з ревматоїдними чинниками, людськими антимишиними IgG антитілами, білками стафілококу А або G, або бактеріальними і людськими Fc рецепторами. Пташині антитіла, проте, можуть активувати незапальний альтернативний шлях поширення. Таким чином, пташині антитіла мають багато переваг в порівнянні з антитілами ссавців. У переважному варіанти втілення специфічні молекули є поліклональними антитілами, отриманими з курячих яєць, інокульованих одним з або сумішшю патогенних компонентів. Різні препарати антигенів можуть бути також використані для інокуляції. Після інокуляції курка несе яйця, що містять значну кількість специфічного імуноглобуліну IgY у жовтку, а також невелику кількість IgM і IgА імуноглобулінів в альбуміні. Тому яйця є відмінним джерелом для виробництва великої кількості економічно вироблених, високо специфічних і стабільних антитіл. В одному варіанті втілення винаходу кури використовуються для виробництва пташиного антитіла; проте, індички, качки, гуси, страуси і так далі можуть бути використані альтернативно. В одному аспекті, кури інокулюють будь-яким способом, відомим в даній галузі, який описаний тут. Наприклад, антиген може бути введений внутрішньом'язово або підшкірно. Переважним пташиним внутрішньом'язовим способом ін'єкції є ін'єкція в грудний м'яз. Інші способи введення, які можуть бути використані, включають підшкірні ін'єкції, внутрішньовенні ін'єкції, внутрішньочеревинні ін'єкції, внутрішньошкірні, ректальні суппозіторії, аерозолі або пероральне введення. Специфічний імунний стан переважно індукується і підтримується у цільових тваринах шляхом імунізації і повторюється підвищенням введень відповідного дозування з фіксованими інтервалами часу. Тимчасові інтервали складають переважно 1-8 тижневі інтервали протягом 112 місяців. Дозування вибране між приблизно 0,01-5 мг антигену. В одному аспекті, дозування складає від 0,01 мг до 1,0 мг антигена на щеплення, переважно від 100 мг, 200 мг, 250 мг, 300 мг, 400 мг, 500 мг або 750 мг антигена на щеплення на одну курку. Загальна кількість щеплення може бути вибрана з 1, 2, 3, 4, 5 або 6 разів протягом 12 місячного періоду. Як правило, перше щеплення виконується в день 1, бустерні вакцинації на 10 день і 20 день. Курка може бути повторно вакцінована в міру необхідності шляхом моніторингу певної концентрації антитіла або його титру, в яйцях, наприклад, за допомогою іммуноферментного аналізу (ІФА). Звичайна доза підшкірного об'єму для курки вибрана від приблизно 0,2 до 1,0 мл, від 0,3 до 0,7 мл або 0,5 мл. Проте, важливо, що бустерні введення не приводять до імунологічної толерантності. Такі способи добре відомі в даній галузі. Можна використовувати інші щеплення або комбінацію процедур, такі як, наприклад, внутрішньом'язові ін'єкції для первинної імунізації і внутрішньовенні ін'єкції для бустерних ін'єкцій. Подальші процедури включають одночасне введення мікрокапсульованих і рідких імуногенів, або внутрішньом'язові ін'єкції для первинної імунізації і бустер доз при пероральному введенні або парентеральному введенні шляхом мікрокапсульованих засобів. Деякі комбінації первинної і повторної імунізації відомі фахівцям в даній галузі. 11 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Ад'юванти, відомі також як фармацевтичні носії або функціональні еквіваленти, можуть бути включені в розчин імунізації/вакцинної композиції для підвищення імунної відповіді у тварини. Велика кількість ад'ювантів була описана і використана для отримання антитіл у лабораторних тварин, таких як миші, щури, кролі і кури. У такій установці толерантність побічного ефекту досить висока, оскільки основна мета є отримання сильної відповіді на антитіло. Ад'юванти, що відносяться до цього винаходу, можуть бути згруповані відповідно до їх походження, бути мінеральними, бактеріальними, рослинними, синтетичними або продуктом хазяїна. У першу групу під цією класифікацією входять мінеральні ад'юванти, такі як сполуки алюмінію. Антигени осаджують солі алюмінію або антигени, змішані з адсорбованими сполуками алюмінію, широко використовуються для збільшення імунної відповіді у тварин і людини. В одному варіанті втілення винаходу допоміжний засіб при імунізації композиції може мати бактерійне походження. Ад'юванти з бактерійним походженням можуть бути очищені і синтезовані (наприклад, мурамілу дипептіди, ліпід А), а також були клоновані медіатори хазяїнів (інтерлейкин 1 і 2). Відомі декілька ад'ювантів хімічного очищення, які є активними компонентами бактерійного походження, включають: Bordetella pertussis, Mycobacterium tuberculosis, ліпополісахарид, повний ад'ювант Фрейнда (ПАФ) і неповний ад'ювант Фрейнда (Difco Laboratories, Детройт, Мічіган) і Ад'ювант Мірка 65 (Merck і Company, Inc, Раувей, НьюДжерсі). У конкретному аспекті, повний ад'ювант Фрейнда або неповний ад'ювант Фрейнда використовуються в імунізації композицій за винаходом. Крім того, відповідними допоміжними речовинами відповідно до даного винаходу, є, наприклад, Titermax класичний ад'ювант (Sigmaaldrich), ISCOMS, Quil A, ALUN, див. патенти США 58767 і 5554372, похідні ліпіду А, холеротоксин похідні, HSP-похідні, LPS-похідні, синтетичні пептидні матриці, GMDP та інші, а також у поєднанні з імуностимуляторами (патент США 5876735). B. pertussis представляє інтерес в якості ад'юванта в контексті даного винаходу завдяки своїй здатності модулювати клітинний імунітет за допомогою дії на Т-лімфоцити популяції. Повний ад'ювант Фрейнда є стандартом в більшості експериментальних досліджень. Мінеральне масло може бути додане до композиції вакцини з метою захисту антигена від швидкого катаболізму. Багато інших типів матеріалів можуть бути використані як ад'юванти в імуногенних або імунізованих композиціях відповідно до даного винаходу. Вони включають рослинні продукти, такі як сапоніни, продукти тваринного походження, такі як хітин і багаточисельні синтетичні хімічні речовини. Кури, іммунізовані внутрішньом'язово, можуть виробляти високий питомий рівень антитіл в своїх яйцях на 28-й день після імунізації і продовжують виробляти специфічні антитіла протягом більш ніж 200 днів, роблячи доступним виготовлення препаратів антитіл протягом короткого періоду часу, наприклад, менше 4-5 тижнів. Яйця містять концентрації антитіла IgY приблизно від 50 до 100 мг на яйце. Більше 100 мг очищеного IgY можуть бути отримані з одного яйця. Відсоток специфічних для антигена антитіл в одному яєчному жовтку може досягати приблизно від 2% до 10%. (daSilva et al., IgY: A promising antibody for use in immunodiagnostic and in immunotherapy. Veterinary Immunol. Immunopath., 135(2010):173-180). Одна курка високої яйценоскості може виробляти приблизно 20 яєць в місяць. Вага яйця складає приблизно від 33 до 77 г, при цьому приблизно 10,5% від всього яйця складає оболонка. Жовток складає приблизно 31% від ваги всього яйця. Із 72 яєць після сушки може бути отримано приблизно 1 кг сухого яєчного порошку. Виходячи з цього розрахунку, одне яйце може складати приблизно 13,9 г сухого цілісного яйця. В іншому аспекті, одне імунне яйце може складати приблизно від 10 г до 15 г сухого цілісного яйця. В іншому аспекті, згідно з винаходом імунне яйце може складати від 40 до 55 мл на яйце з 1-2 мг/мл загального IgY на яйце. В іншому аспекті розкриття імунні яйця містять від приблизно 0,01 мг/мл до 0,05 мг/мл конкретних IgY на яйце. Таким чином, в одному аспекті після обробки, одне сухе цілісне імунне яйце містить приблизно від 80 до 110 мг загальної IgY і приблизно від 6 до 10 мг загального змішаного антиген-специфічних IgY, наприклад, з курей, імунізованих, наприклад, змішаним препаратом антигена. Можна визначити, чи є вакцина причиною, яка викликала імунну відповідь у тих тварин, що продукують яйця, за допомогою ряду способів, відомих фахівцям в даній галузі імунології. Приклади містять твердофазний іммуноферментний аналіз (ІФА), тести на наявність антитіл до стимулюючого антигена і тести, мета яких оцінити здатність імунних клітин з хазяїна реагувати на антиген. Мінімальна доза імуногена, необхідна для індукції імунної відповіді, залежить від використання процедури вакцинації, у тому числі типа ад'ювантів і формулювання імуногена(ів), а також від типа тварини, яйця яких використовували в якості хазяїну. В одному варіанті втілення винаходу курка підходить для комерційного виробництва яєць виробляють для отримання поліклональних антитіл. Будь-яка порода курячих підходить для 12 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 даного вироблення яєць. Наприклад, можуть підійти наступні породи: Род-Айленд червоні, Білі леггорни, Коричневі леггорни, Ломанн Браун, схрещені гібридні, також підходять інші породи, що несуть яйця великих розмірів, з високим об'ємом яйценоскості і легкістю в утримуванні. В одному аспекті, курей на стадії курчат інокулюють стандартними захворюваннями (наприклад, сальмонелою, пташиним грипом або вірусом Ньюкасл і так далі). В одному аспекті, кури будьякого віку можуть бути інокульовані. Кур, вік яких наближається до яйценесучого, приблизно 1519 тижнів, або в будь-який заданий час до або після цього, інокулюють згідно із заданим графіком певною кількістю і в період, кінцевим продуктом, що призведе до стійкого безперервного потоку виробництва. Як правило, після відповідного періоду ізоляції і акліматизації - приблизно від 2 до 4 тижнів, кожна група входить в програму інокуляції з використанням різних антигенів або імунізованих композицій, що містять специфічні антигени, яких потребує антитіло. В одному варіанті втілення винаходу яйця збирали у прищеплених курей і обробляли цілком. Яйця зберігаються в охолодженому стані, поки не підготовлена достатня партія. В партії яєць із заздалегідь визначених груп курей, які мають тріщини, вміст відділяється від шкаралупи, змішується і переважно пастеризується для усунення потенційного забруднення від патогенних мікроорганізмів курки. В одному аспекті, імунні яєчні продукти пастеризують. Яєчні продукти обробляються в санітарних умовах. Натуральне яйце переробляється в імунний яєчний продукт на автоматизованому устаткуванні, яке відокремлює яйця від шкаралупи, миє і дезінфікує шкаралупу, розбиває яйця. Необов'язково білки відділяються від жовтків. Рідкий продукт яйця, при необхідності, фільтрують, і необов'язково змішують з іншими інгредієнтами, а потім охолоджують до додаткової обробки. Отриману рідину яєчних продуктів потім піддають летальній обробці, такий як пастеризація або нагрівання у висушеній формі. У США, згідно з Актом перевірки яєчних продуктів (EPIA) 1970р. необхідно, щоб всі продукти, що містять яйця для вживання були пастеризованими. Після пастеризації, весь вміст яєць сушать з використанням стандартних комерційних способів, таких як сушка розпиленням з використанням атмосферного або гарячого повітря, термічна сушка, сушка сублімацією або ліофілізація. У одному аспекті, відповідний спосіб сушки пастеризованої яєчної рідини зводить до мінімуму пошкодження антитіл і молекулярного компонента в яйці, внаслідок чого продукт має високу живильну цінність і здатний надавати пасивний захист. В одному з аспектів, висушене яйце випробовують для визначення загального титру або рівня антитіл. Використовуються стандартні способи випробувань, наприклад, ІФА, ФІА (флуоресцентний імуноаналіз), РІО (радіоімуноаналіз) і тому подібне. В іншому аспекті, партія змішується з партіями з групи курей інших середніх рівнів виробництва, результатом чого стає багатомістка стандартизована кількість антитіл. Висушені яйця, що містять специфічні поліклональні антитіла, можуть зберігатися в герметичному контейнері при кімнатній температурі до моменту створення складу композиції за винаходом. У варіантах втілення винаходу висушений матеріал яйця використовується як цілісне яйце і не відділяється. У варіантах втілення винаходу весь висушений матеріал яйця містить, принаймні, 5 мг на яйце специфічних IgY. В іншому варіанті втілення винаходу IgY ізольований. Першим кроком до ізоляції IgY є відділення водорозчинних білків від ліпопротеїнів. Водорозчинні білки представляють 42,4% від загального білка в яєчному жовтку (Osuga et al., "Egg Proteins: In Food Proteins, J. R. Whitaker and S. R. Tannenbaum eds., AVI Pub. Co., Westport, Conn. (1977)). Багато способів було використано для виділення і очищення імуноглобулінів з яєчного жовтка (Martin et al., Can J. Biochem. Physiol. 35:241 (1957); Martin et al., Can. J. Biochem Physiol. 36:153 (1958); Jensenius et al., J. Immunol. Methods 46:63 (1981); Bade et al., J. Immunol. Methods 72:421 (1984); Polson et al., Immunol. Invest. 14:323 (1985); Hassl et al., J. Immunol. Methods 110:225 (1988)). Hatta et al. (Agric. Biol. Chem. 54:2531 (1990)), використовуючи харчові природні смоли (наприклад, каррагинан), щоб відокремити ліпопротєїнів жовтка у вигляді осаду і відновити IgY у водорозчинній фракції з яєчного жовтка. Способи відновлення антитіл з курячого жовтка добре відомі в даній галузі. Деякі способи можуть бути використані для отримання IgY з яєчного жовтка, і комерційні набори для екстракції доступні представлені на ринку (van Regenmortel, M.H. V. (1993). Eggs as protein and antibody factories. In Proceedings of the European Symposium on the Quality of Poultry Meat, pp. 257-263. Tours, France: INRA). Моноклональні антитіла можуть бути отримані з використанням гібридомного способу, вперше описаного Kohler et al., Nature.256:495 (1975), або можуть бути отримані способами рекомбінантних ДНК (патент США 4816567). У цьому гібридомному способі миша, або інша 13 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 відповідна тварина-хазяїн, така як хом'як, імунізується, як описано вище, щоб отримувати лімфоцити, які продукують або здатні продукувати антитіла, і які специфічно зв'язуватимуться з білком, використовуваним для імунізації. Альтернативно, лімфоцити можуть бути імунізовані в пробірці. Після імунізації, лімфоцити відокремлювали і потім зливали з лінією клітин мієломи з використанням відповідного агента для злиття, такого як поліетіленгліколь, із отриманням гібридомної клітини (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, ρp.59-103 (Academic Press, 1986)). Культуральне середовище, в якому вирощують клітини гібридоми, досліджують на продукування моноклональних антитіл, направлених проти антигена. Переважно специфічність зв'язування моноклональних антитіл, що продукуються клітинами гибрідоми, визначають імунопреципітацією або аналізом зв’язування in vitro, такого як радіоімуноаналіз (РІА) або ІФА. Аффінність зв'язування моноклонального антитіла може, наприклад, бути визначена за допомогою аналізу Скетчарда, описаного Munson et al., Anal. Biochem.. 107:220 (1980). Моноклональні антитіла, які секретуються субклонами, відповідним чином відокремлюють від культурного середовища, асцитної рідини або сироватки звичайними способами очищення антитіл, таких як, наприклад, аффінна хроматографія (наприклад, використовуючи білок А або білок G-сефарозу) або іонообмінна хроматографія, хроматографія на гідроксилапатиті, гельелектрофорезі, діалізі і так далі. ДНК, що кодує моноклональні антитіла, легко виділяють і секвенують з використанням звичайних способів (наприклад, з використанням олігонуклеотідних зондів, які здатні специфічно зв'язуватися з генами, що кодують важкі і легкі ланцюги мишачих антитіл). Клітини гібридоми служать як переважне джерело такої ДНК. Після виділення, ДНК може бути поміщена в вектори експресії, які потім трансфікують в клітини-хазяїни, такі як клітини E.coli, мавпячі COSклітини, клітини яєчника китайського хом'яка (СНО) або клітини мієломи, які інакше не продукують білок антитіла, для отримання синтезу моноклональних антитіл в рекомбінантних клітинах-хазяїнах. Оглядові статті по рекомбінантній експресії в бактеріях ДНК, що кодує антитіло: Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) and Plύckthun. Immunol. Revs. 130:151-188 (1992). В іншому варіанті втілення винаходу моноклональні антитіла або фрагменти антитіл можуть бути виділені з фагових бібліотек антитіл, отриманих з використанням спосібів, описаних McCafferty et al,. Nature. 348:552-554 (1990). Clackson et al. Nature. 352:624-628 (1991) та Marks et al.,.J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991) описують виділення мишачих і людських антитіл, відповідно, з використанням фагових бібліотек. У подальших публікаціях описано продукування високо аффінних (нМ діапазон) антитіл людині шляхом перестановки ланцюгів (Marks et al., Bio/Technology. 10:779-783 (1992)), а також комбінаторної інфекції та in vivo рекомбінації в якості стратегії конструювання дуже великих фагових бібліотек (Waterhouse et al., Nuc. Acids. Res.21 :2265-2266 (1993)). Таким чином, ці способі є прийнятною альтернативою традиційнім гибрідомним способам для отримання моноклональніх антитіл. ДНК, яка кодує антитіло, може бути модифікована для отримання химерних або злитих поліпептидів, наприклад, заміною важкого ланцюга людини і константного домену легкого ланцюга (CH і CL) у послідовностях на гомологічні мишачі послідовності (патент США 4816567; і Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)), або шляхом злиття кодуючої послідовності імуноглобуліну зі всією або частиною кодуючої послідовності для неіммуноглобулінового поліпептиду (гетерологичного поліпептиду). Неіммуноглобулінові поліпептидні послідовності можуть замінити константні домени антитіла або їх можуть замінити варіабельні домени однієї антигензв'язуючої ділянки антитіла для створення химерного двовалентного антитіла, що включає одну антигензв'язуючу ділянку, яка володіє специфічністю до антигена, і іншу антигензв'язуючу ділянку, яка володіє специфічністю по відношенню до іншого антигена. АНТИГЕНИ ДЛЯ ІМУНІЗАЦІЇ ДЛЯ ОТРИМАННЯ СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЮЧОГО БІЛКА Антигени, відібрані для імунізації, можуть бути бактеріальними, вірусними, протозойними, грибковими, паразитарними, клітинними, або будь-якими іншими субстанціями, на яку реагуватиме імунна система тварини. В одному аспекті, імуногенність антигенів посилюється використанням ад'юванту. В одному аспекті, тварин щеплять патогенними компонентами, антигенами або імуногенами, що містяться у вакцині композиції. В одному аспекті, патогенні компоненти або антигени можуть бути отримані або здобуті з комерційних джерел, таких як Американська колекція типових культур (АТСС). В іншому аспекті, патогенні компоненти можуть бути виділені зі штаму дикого типа. В іншому аспекті, патогенні компоненти або небажані штами присутні у вигляді змішаного 14 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 препарату антигену. Будь-які антигени або комбінація антигенів, отримані з різних штамів або небажаних патогенних компонентів, можуть бути використані в імунізації композиції. В одному аспекті, інокулянт, антиген або імуноген вибирають із загального або збереженого компонента або області цільового антигенного кластера, ігноруючи варіабельні або відмінні компоненти або області окремих членів кластера відповідних антигенів. Спосіб включає підготовку відповідного імуногена з характеристиками, які викликають утворення антитіл, які є перехресно-реактивними з бажаним епітопом, але які не реагують на інші епітопи, а також інокуляцію або вплив на продукуючі клітини або організм таким чином, щоб викликати утворення антитіл, які вбудовані у відповідну матрицю-носій для введення. Композиції цього типу можуть бути розроблені, щоб використовувати добавки продукованих антитіл згідно з даним способом і забезпечити широке охоплення більш одного кластера цільових антигенів. Наприклад, у разі, коли два кластери неродинних антигенів пов'язані із захворюванням або станом, бажаним є створення єдиної композиції для лікування цього захворювання або стану, та суміш з двох антитіл, імуноглобулінів або біологічних імунних чинників може бути отримана з використанням цього способу, який одночасно має два широких домена реактивності. Один приклад цього варіанту втілення підходить для виробництва антитоксину антитіл, які специфічно реагують на кластери структурно родинних токсинів. В одному варіанті втілення винаходу цей спосіб використовується, щоб зробити антитіло широкого спектру дії по відношенню до ліпополісахариду (LPS) (ендотоксин) з будь-якого грамонегативної бактерії (Escherichia coli, Salmonella, Shigella, and other Enterobacteriaceae, Pseudomonas, Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas та ін.), або, наприклад, антитіло широкого спектру дії до Ab5 токсинів (у тому числі Campylobacter ентеротоксин, холерний токсин, термолабільний ентеротоксин (LT і LT-II) (E.coli), токсин коклюшу, токсин Шига (Shigella), Шига-подібний токсин (або веротоксин)). У переважному аспекті, антитоксин антитіла має ефект незалежно від видів, з яких походить токсин. В іншому аспекті, продуковані антитіла є нейтралізуючими антитілами, які здатні нейтралізувати або інактивувати біологічну активність цільових токсинів. Такий широкий спектр нейтралізуючих антитіл може бути використаний для втручання в патологічних випадках (наприклад, певних типів діареї), де токсин опосередковує симптоми і є одним з кластерівмішеней (у цих прикладах, Ab5 або LPS), без необхідності знання того, який організм був збудником. Крім того, якщо домішка була підготовлена, з вмістом антитіла до AВ5 та антитіла до LPS в клінічно ефективних кількостях, препарат може бути використаний для втручання у разі, коли активний токсин був AВ5 або ЛПС або представлений обома. Цей спосіб може бути поширений на будь-яку кількість (в даному прикладі) кластерів токсину, а також включати широкий спектр нейтралізуючих антитіл до медіаторів інших токсиноподібних реакцій (наприклад, вірусне токсин-подібне явище), щоб створити широке втручання (в даному прикладі) при діареї, коли симптомами і патологією можна управляти без знання інфекційних причин, або у випадку множинних причин інфекції. В одному аспекті, винахід розкриває композицію, що включає синергічне поєднання антитоксинових антитіл у поєднанні з матрицею-носієм. У деяких варіантах втілення винаходу способи і композиції згідно з винаходом використовуються для різних патогенів або агентів, включаючи, без обмежень, холерний токсин (Vibrio cholera), E. coli (у тому числі ентеротоксигенну (ETEC)), Shigella Shigella, Salmonella, Campylobacter, Clostridium difficile, паразитів (наприклад, Giardia, Entamoeba histolytica, Cryptosporidiosis, Cyclospora), і віруси діареї (наприклад, ротавірус). Після попадання в шлунково-кишковий тракт, багато патогенних мікроорганізмів, включаючи, але не обмежуючись бактеріями, такими якE.coli, прив'язуються (прилипають) до епітеліальних, слизових або інших тканин і стають вбудованими в шлунково-кишковій тканині, такої як стінка кишечника. Після прилипання до тканини в шлунково-кишковому тракті, патогени реплікуються, що призводить до збільшення концентрації токсинів, або виробництвом результаті продукування напряму або побічно із збільшенням лізису клітин патогенів дії під дією імунної системи. Інгібування здатності патогенів до прилипання до тканини шлунково-кишкового тракту сприяє більш ефективній мобілізації патогенів, розщеплення і виділення до колоній достатнього розміру, щоб викликати ураження і формування інших симптомів. При блокуванні класу рецепторів і лігандів на патогені, який буде використовуватися, щоб приєднатися до шлунково-кишкового тракту, включаючи, але не обмежуючись адгезином, кадгерінами, війки, фібрілли і/або вірусні структури адгезії, адгезія тканини шлунково-кишкового тракту може бути попереджена або бути зведена до мінімуму, в кінцевому рахунку істотно знизиться патологія від патогенів, які використовують такий спосіб дії. 15 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У різних варіантах втілення винаходу патоген вибирають з одного або комбінації людських або ветеринарних, кишкових або шлунково-кишкових, патогенів, що викликають гастроентерит. У різних аспектах, патоген вибирають з групи, що складається з: Campylobacter jejuni, Salmonella, Salmonella typhimurium, Salmonella enterica serovar Typhi, Shigella dystenteriae, Plesiomonas shigelloides, Escherichia coli (включаючи (EPEC) ентеропатогенну E. coli, (ЕТЕС) ентеротоксигенну E. coli, (EaggEc) ентероагрегативну E. coli, (EIEC) ентероїнвазивну E. coli, і (EHEC) геморагічну E. coli), Yersinia enterocolitica, Vibrio cholerae O1, Vibrio O139, Non-O1 Vibrios, Vibrio parahaemolyticus, Aeromonas hydrophila, Clostridium perfiingens, Clostridium difficile, ентерогепатичний Helicobacter (включаючи Helicobacter Pylori), Staphylococcus aureus, Klebsiella, ротавірус, коронавірус, норовірус, кальцивірус, кишкові аденовіруси, цитомегаловірус і астровірус. В іншому аспекті, патогензв'язаний токсин містить ендотоксин або екзотоксин. В іншому аспекті, патогензв'язаний елемент зчеплення включає адгезіни, кадгеріни, війки, фібрілли, вірусну структуру адгезії, або їх комбінації. У різних специфічних аспектах патогенних компонентів, імуногени або антигени можуть бути отримані, наприклад, з ротавірусу, вірусу Corona, Clostridium Perfiingens типу С; Escherichia coli (клітинної); ентеротоксигенних штамів, і ентеротоксинів, E.coli; будь-яких бактерій, які мають антиген до фатору зчеплення пілій K99, 987P або F41; ендотоксин (або LPS), викликанпаличковий E. coli і Salmonella Typhimurium (грамнегативні бактерії, в загальному випадку). У конкретному аспекті, кури інокульовані антигенами або токсинами, що отримані з одного, двох, трьох, чотирьох, п'яти, шести, семи або восьми або декількох патогенних мікроорганізмів. В одному з аспектів, імунна відповідь є сильнішою, коли відстань між джерелом антигена і імунною системою у вакцинованих тварин збільшується. У конкретному варіанті втілення винаходу першу групу курей інокулюють першим змішаним антигенним препаратом. В одному аспекті, другу групу курей інокулюють другим змішаним антигенним препаратом, що містить різний набір антигенів, на відміну від першого. В іншому аспекті, третю групу курей інокулюють третім змішаним антигенним препаратом. Ще в одному аспекті, четверту групу курей інокулюють четвертим змішаним антигенним препаратом. Хоча це обмежено не означає обмеження об’єму винаходу, вважається, що вигідно імунізувати різні групи з різними антигенами щоб уникнути перевантаження антигенів. Яйця збирають від кожної групи, вибірково титрують повністю або частково IgY, вибірково відокремлюють і очищають, і обробляють окремо для отримання сухого порошку. В іншому аспекті, сухий яєчний порошок з першої і другої; першої, другої і третьої; або першої, другої, третьої і четвертої груп змішують або пакують з матрицею-носієм для отримання композиції даного винаходу. В одному аспекті, перший антигенний препарат містить бичачий ротавірус (серотипи G6 і G10), бичачий коронавірус, ентеротоксигенний штам Escherichia coli, що має фактор зчеплення з пілями K99, і Clostridium perfringens типа С. Змішаний антигенний препарат необов'язково має бути ад'ювантом, щоб підвищувати імунну відповідь. В іншому аспекті, другий антигенний препарат включає бета-токсин, продукований Clostridium perfringens типу С і ентеротоксигенні штами Escherichia coli, які виробляють термолабільний токсин або мають фактори зчеплення K99, K88, 987P або F41. В одному аспекті, третій антигенний препарат складається з E.coli і Salmonella Typhimurium. JVAC знижує частоту і ступінь важності ендотоксемії, викликані E.coli і Salmonella Typhimurium. Пов'язані з ними ендотоксини викликають коліформні мастити і інші грамнегативні захворювання, пов'язані з ендотоксемією. В іншому аспекті, антигени отримані будь-якими способами, відомими в даній галузі. Наприклад, клітини від джерела дикого типу, наприклад, тварини, страждаючої від діареї, яка викликана E.coli . Ізольовані клітини можна культивувати, наприклад, тріптіказно-соєвим бульйоном (TСБ) при 37°С протягом ночі і концентрувати центрифугуванням. Отриманий осад повторно суспендують з 0,4% формальдегідом в буфері PBS, і інкубують при 37 °С для інактивації. Формальдегід може бути видалений центрифугуванням. Гранули можуть бути повторно суспендовані в буфері PBS і використані як антиген. В одному аспекті, антигени емульгують в рівному об'ємі повного ад'юванту перед посівом. В іншому варіанті втілення винаходу антигени вибирають з патогенних мікроорганізмів, що викликають кон'юнктивіт. Відомі збудники описані в патенті US2008/0031903, Gambotto et al., що включено в даний опис у вигляді посилання. Епідемічний кератокон'юнктивіт (ЕКК) є виснажливим інфекційним захворюванням очей, яке спостерігається у всьому світі. Захворювання обумовлене, в основному, аденовірусами особливо серотипа 8, 19 і 37. Серотипи 3, 4 і 11 були також залучені в деякі ЕКК епідемії. Хвороба охоплює всі вікові групи, дуже заразлива і швидко поширюється в школах, шкільних 16 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 басейнах, дитячих відділеннях і таборах. Лікування на даний час симптоматичне, оскільки ефективного лікування не існує. Розробка ефективних антивірусних агентів є актуальною для лікування захворювання і запобігання епідемії. Кон'юнктивіт також може бути викликаний рядом додаткових бактеріальних, вірусних, грибкових і простих агентів, включаючи, але не обмежуючись наступними: S. aureus, S. pneumoniae, H. influenzae, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, аденовірус, вірус простого герпесу, вірус оперізувального герпесу, ентеровіруси, види Fusarium, види Candida і види Acanthamoeba. Деякі вірусні інфекції, такі як аденовірусні інфекції, можна лікувати за допомогою противірусних лікарських засобів, наприклад цидофовіра. Як правило, лікарські засоби мають побічні ефекти, такі як очні і ниркові побічні ефекти, пов'язані з сидофовіром. Виникають і інші матеріально-технічні питання пов'язані з лікарськими препаратами, включаючи стабільність, собівартість продукції і так далі. Таким чином, недорогі, досяжні, добре сприймані і стабільні лікарські засоби для лікування очних інфекцій є актуальними. В одному аспекті, винахід розкриває композицію для лікування кон'юнктивіту і почервоніння очей, що містить поліклональні антитіла до цих патогенів, які об'єднані в матриці-носієві, як описано нижче. Антитіла отримують згідно з наведеним тут описом. В іншому варіанті втілення винаходу антигени вибирають з патогенних мікроорганізмів, що викликають вагініт. Інфекція може бути бактеріальною, грибковою (дріжжі) або паразитарною. Бактеріальний вагініт може бути викликаний, наприклад, Neisseria gonorrhoeae, Chlamydiaceae trachomatis, Mycoplasma spp., Campylobacter jejuni. Паразитарний вагініт може бути викликаний, наприклад, Trichomonas vaginalis. Вірусний вагініт може бути викликаний, наприклад, вірусом герпесу типу 1 або 2. Кандидозний вагініт викликається дріжжеподібними грибами Candida. Існує більш ніж 170 видів описаних дріжжеподібних грибів. C. albicans є найбільш частим збудником кандидозного вагініту у 85-90% жінок. C. glabrata (5-10%), C. tropicalis (3-5%), C. parapsilosis (3-5%) і C. krusei (1-3%) також є клінічно значимими серед інших видів Candida. Будь-який з цих патогенів може бути вибраний як антигенне джерело поліклональних антитіл, як описано тут. Кандидозний вульвовагініт часто є наслідком ряду сприяючих чинників, таких як довге і неконтрольоване використання антибіотиків, кортикостероїдів, цитостатиків, оральних контрацептивів, променевої терапії, важких інфекційних захворювань, ендокринних розладів, імунодефіцитного стану і так далі. Призначення антибіотиків широкого спектру дії пригнічує не лише патогенні бактерії, але і сапрофіти слизової оболонки піхви: лактобацилли і біфідобактерії. В результаті рН піхви підвищується (у бік лужного діапазону) і відбувається порушення самоочисних процесів. Крім того, Candida може використовувати деякі антибіотики як живильні субстрати. Таким чином, в жіночих статевих органах виникають сприятливі умови для активного розростання Candida. В одному аспекті, винахід розкриває композицію для лікування вагініту, що містить поліклональні антитіла до одного або більш з описаних патогенів, які об'єднані в матриці-носієві, як описано нижче. У конкретному аспекті, композиція винаходу містить суміш специфічних поліклональних антитіл в матриці-носієві, яка забезпечує широкий спектр і спосіб лікування бактеріальних, вірусних, грибкових і паразитарних вагінітів. В іншому аспекті, композиції згідно з винаходом, можуть бути використані для лікування недиференційованого вагініту, у суб’єкта, що потребує цього. Інші специфічно зв'язуючі молекули. Композиції і способи винаходу включають інші специфічно зв'язуючі молекули, у тому числі фактори трансферу, варіабельні рецептори лімфоцита і клітинні рецептори. Фактор трансферу є імунною молекулою приблизно 5000 Дальтон, що складається з амінокислот, які викликають специфічний для антигена клітинно-опосередкований імунітет, в першу чергу, гіперчутливість сповільненого типу і виробництво лімфокінів, зв'язування між собою антигенів. (Kirkpatrick 1993, Structural nature and functions of transfer factors. Ann. N.Y. Acad. Sci. 685:362-368.). Варіабельні рецептори лімфоциту є отриманими від лімфоцитів молекулами, які виявлені в щелепних хребетних, таких, як міноги і міксини. Ці тварини володіють великою кількістю варіабельних рецепторів лімфоцита, які виробляються лише з невеликого числа генів і які зв'язуються з патогенними антигенами та аналогічним чином з антитілами, і з тією ж мірою специфічності. (Alder et al., 2005, Diversity and function of adaptive immune receptors in a jawless vertebrate. Science, 310(5756):1970-1973). МАТРИЦЯ-НОСІЙ Винахід розкриває композиції для лікування або профілактики патогенних інфекцій у суб’єкта. Композиції містять специфічно зв'язуючі молекули, такі як поліклональні антитіла, у поєднанні з матрицею-носієм. Хоча це і не обмежено областю винаходу, матриця-носій служить 17 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 подвійній меті. По-перше, для захисту антитіла в їх передбачуваному функціональному середовищі, наприклад, при пероральному введенні, і всередині шлунково-кишкового тракту дитині суб’єкту; і, по-друге, дає можливість компонентам, наприклад, компонентам імунної системи, синергічно реагувати з антитілами в управлінні інфекцією. Термін "матриця-носій" або захисна/реакційна матриця відноситься до будь-якого субстрату, сполуки, композиції або додаткової домішки (природного або синтетичного походження), що містить елементи, ко-фактори або інші компоненти у відповідних співвідношеннях і концентраціях, для подачі елементів, необхідних для поширення, заохочення, підтримки або підвищення імунної відповіді за типом in situ, каскаду або реакції. Ці елементи можуть порізному сприяти реакціям розщеплення і дозрівання, утворенню агрегатів і комплексів, функції зменшення кількості і адсорбції, поставкам основних елементів, біологічних препаратів або сполук, а також забезпечити функції захисту для активних елементів або компонентів. Матрицяносій може містити або не містити ендогенні антитіла (імунні фактори), які можуть бути або не бути специфічними для антигенів-мішеней. В одному варіанті втілення винаходу матрицю-носій вибирають з або отримують з, сироватки, плазми, молозива, молока, слини, лімфатичної рідини, слизових або слізних рідин, отриманих з нелюдиноподібного ссавця. Прикладом природної матриці-носія є молозиво. Молозиво розвинулося природним чином у ссавців спеціально для потрапляння його компонентів новонародженим через шлунковокишковий тракт в дуже концентрованій формі в малих об'ємах. Молозиво або "перше молоко", виробляється відразу після пологів у ссавців. Антитіла і ко-фактори передаються новонародженому від матері і забезпечують перший захист від хвороботворних мікроорганізмів. Ростові фактори також стимулюють розвиток і оновлення кишечника. Молозиво містить безліч іммуносприяючих чинників. Серед них інтерферони, імуноглобуліни (у тому числі IgG і секреторний IgА), поліморфноядерні лейкоцити, макрофаги і лімфоцити. Молозиво також містить багатий на пролін поліпептид або ПБП, Т-клітинний активатор. Молозиво, як відомо, має високий вміст імуноглобуліну в порівнянні з молоком. Молозиво, як відомо, містить антитіла, такі як IgA, IgG та IgM у ссавців. IgA потрапляє в організм через епітелій кишечника, проходить через кров і виділяється на інший тип 1 слизових поверхонь. Відмічено, що в бичачому молозиві, в будь-якому місці міститься від 6% до 20% імуноглобулінів; в першу чергу IgG1 і IgG2. В одному аспекті, все бичаче молозиво використовується як матрицяносій. Молозиво також допомагає регулювати кишкове середовище і робить його ворожим для чужих патогенів. Молозиво містить лактоферин, залізо-зв'язуючий білок, який запобігає розмноженню бактерій і вірусів при отриманні заліза, необхідного для реплікації. Молозиво також вибірково запліднює певні пробіотичні види, які, у свою чергу, допомагають захиститися від інфекції. Це єдине природне джерело двох основних факторів росту, трансформуючого фактору росту (TGF) альфа і бета, а також джерело інсуліноподібного фактору росту 1 і 2. Ці чинники сприяють відновленню і розвитку тканин. Молозиво також є джерелом фактору росту гепатоцитів, що стимулює зростання і розширення клітин стінок кишечника. Молозиво природним чином служить в якості матриці-носія в шлунково-кишковому тракті. Синтетичні версії матриці-носія також включені в даний опис. Матриці-носії, які складаються з природних і синтетичних компонентів, також включені в даний винахід. Молозиво дуже багате білками, вітаміном А і хлоридом натрію, але містить меншу кількість вуглеводів, ліпідів і калію, ніж звичайне молоко. Найбільш близьким біологічно активним компонентом в молозиві є фактор росту і антимікробні чинники. Антитіла в молозиві забезпечують пасивний імунітет, тоді як фактори росту стимулюють розвиток в кишечнику. Вони передаються новонародженому і забезпечують перший захист від патогенних мікроорганізмів. Пасивний імунітет від матері буде переданий новонародженому. Новонароджені мають дуже маленькі травні системи, а молозиво поставляє живильні речовини в дуже концентрованій формі малих об'ємів. Шлунково-кишковий тракт новонародженого особливо сприйнятливий до пасивної передачі імунітету від молозива. При народженні, шлунковий діапазон рН змінюється від 6-8 із-за залишкової амніотичної рідини в шлунку. Шлунковий рН потім падає до рН від 1,5 до 3 від 24 до 48 годин. Таким чином, дані умови новонародженого сприяють пасивній імунізації. Крім того, спорожнення шлунку у новонароджених і недоношених дітей затягуються, з дорослішанням досягаються в межах віку 6-8 місяців. Антитіла і кофактори в молозиві можуть, при певних обставинах (наприклад, грудного вигодовування), забезпечувати пасивний імунітет їх одержувачеві, що особливо актуально для новонароджених. Шлунково-кишковий тракт неновонароджених малюків дітей, 18 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 підлітків і здорових дорослих є агресивнішим середовищем по відношенню до перорального введення імуноглобулінів. Інші імунні компоненти молозива містять основні компоненти імунної системи, такі як, лактоферин, трансферин, лізоцим, лактопероксидаза, комплемент і багатий на пролін поліпептид (ПБП). Кількість цитокінів (невеликі пептиди-месенджери, які контролюють функціонування імунної системи) також знаходяться в молозиві, включаючи інтерлейкіни, фактор некрозу пухлини, хемокіни і ін. Молозиво також містить ряд факторів росту, таких як інсуліноподібний фактор росту I і II, трансформуючий фактор росту альфа-, бета-1 і бета-2, фактору росту фібробластів, епідермальний фактор росту, гранулоцитарно-макрофагальний стимулюючий фактор росту, тромбоцитарний фактор росту, фактор росту судинного ендотелію і колонієстимулюючий фактор-1. В одному з аспектів, матриця-носій складається з двох або більше, трьох або більше, чотирьох або більше, п'яти або більше, шести або більше або семи або більше неіммуноглобулінових компонентів молозива. В іншому аспекті, матриця-носій містить молозиво, яке було оброблено, щоб видалити більшість імуноглобулінів. У варіантах втілення винаходу матриця-носій містить, щонайменше, два компоненти, отримані з нелюдиноподібної тварини, вибраних з групи, що складається з ферментів, лактоферину, трансферину, неспецифічних імуноглобулінів, компонентів системи комплементу, цитокінів, білих кров'яних тілець, компонентів комплементу, інтерферонів і фібронектину, де, щонайменше, одна специфічно зв'язуюча молекула і, щонайменше, два компоненти матриці-носія отримані з різних тварин. В іншому аспекті, матриця складається з двох або більше агентів, обраних з лізоциму, фосфоліпази, дефензінів, опсонінів, багатого на пролін поліпептиду (ПБП), бета-лізину, лактоферину, трансферину, цитокінів, інтерлейкинів, хемокинів, інтерферонів, ФНР-альфа, фібронектину, багатих на пролін поліпептидів, інсуліноподібного фактору росту типа 1, інсуліноподібного фактору росту типа 2, тромбоцитарного фактору росту, епідермального фактору росту, фактору росту фібробластів, трансформуючого тромбоцитарного фактору росту альфа, трансформуючого фактору росту бета, фактору росту нервів, лептіну, лейкоцитів, білих кров'яних тілець, фагоцитів, макрофагів, моноцитів, нейтрофілів, поліморфноядерних клітин, дендритних клітин, тучних клітин, еозинофілів, базофілів, натуральних кілерів (NK), лімфокінактивованих кілерів (ЛАК), катіонних білків, включаючи дефензіни, протеолітичних ферментів, у тому числі еластази, катепсину G, мієлопероксидази, компонентів НАДФН-оксидази, або їх комбінацій. В іншому аспекті, матриця містить негиперіммунне бичаче молозиво. Бичаче молозиво виробляється коровами для їх новонароджених телят. У багатьох стадах годування телят молочною коровою не вирішується годувальницею, замість цього, їх годують молозивом, а потім молоком з пляшки, потім з відра. Молозиво збирається і обробляється для комерційного використання. Різні композиції, що містять молозиво і способи отримання молозива були розкриті в патентах США No.5846569, 6410058, 6475511 і 6521277, вміст яких повністю включений в якості посилання. Сухе бичаче молозиво є комерційно доступним. В одному конкретному аспекті, матріця-носій є комерційним сухим бичачим молозивом. Тваринники/заводчики зазвичай зберігають молозиво, отримане від своїх тварин. Молозиво, вироблене з власних джерел вважається більш якісним за молозиво з інших джерел, оскільки воно виробляється у тварин, які вже піддавалися (і таким чином виробляють антитіла до) дії патогенів, що походять з території. Як правило, молозиво тварин, які зазнали впливу відповідних патогенів, матиме перевершуючі імунологічні характеристики. Бичаче молозиво і його компоненти є безпечними для споживання людиною, за винятком непереносимості або алергії на лактозу або інші компоненти. Бичаче молозиво корів, яких випасали на пасовищі, містить імуноглобуліни, специфічні для багатьох патогенів людини, у тому числі Escherichia coli, Cryptosporidium parvum, Shigella flexneri, Salmonella, Staphylococcus і ротавіруса, залежно від їхнього природного впливу на ці патогени. До появи антибіотиків, молозиво було основним джерелом імуноглобулінів, яке використовувалося для боротьби з інфекціями. Гіперімунне молозиво є спробою підвищити ефективність природного бичачого молозива шляхом імунізації корів конкретним патогеном. Цей спосіб є перспективним, якщо антитіла отримують з конкретних патогенів або антигенів, що використані у вихідному ураженні. Проте, варіабельна відповідь на антигени, біологічна варіабельність і низька прибутковість виробництва молозива обмежили його клінічне і комерційне використання. В одному аспекті, винахід пропонує композицію, що містить молозиво, яке не є гіперімунним або яке не містить конкретну або значну кількість антитіл, специфічних до патогенів або компонентів антигена-мішені. В іншому аспекті, винахід пропонує композицію, в якій матриця 19 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 носій містить різні компоненти імунної системи без значної кількості специфічних або неспецифічних антитіл. В одному варіанті втілення винаходу молозиво може бути оброблене, щоб вилучити більшу частину імуноглобуліну, наприклад, шляхом поглинання антитіл на аффінній смолі (наприклад, білок G або білок A сефарозой; або білок A або білок G агарозой) у форматі партії або колонки утримуючи зі збереженням елюату для подальшої обробки. Імуноглобуліни можуть бути видалені за допомогою хроматографії з гель-фільтрацією на Sephadex G-200 або іонобмінній хроматографії DEAE Sephadex А-25. (Lloyd and Soulsby, Immunology, The role of IgA immunoglobulin in the passive transfer of protection to Taenia taeniaeformis in the mouse. 34, 939945). Ці процеси можуть бути запущені в форматах форматі партії або колонки за допомогою різних способів і способів, відомих в даній галузі. В одному конкретному варіанті втілення винаходу матриця-носій включає молозиво. В одному аспекті, комерційне молозиво використовують в якості підтримуючої/реактивної матриці. У переважному аспекті, комерційне бичаче молозиво - це агломероване і свіжіше, пастеризоване, цілісне, сухе молозиво, отримане лише з першого доїння. В іншому аспекті, молозиво обробляється при низькому тиску і низькій температурі і піддається сушці розпиленням з використанням непрямої пари для підтримки максимальної біоактивності. В іншому аспекті, комерційне молозиво без джерел антибіотиків. В іншому аспекті, молозиво піддається мікробіологічному аналізу і виявляється негативним або нижчим за прийняті рівні по відношенню до різних патогенів. У різних інших аспектах, молозиво, тестують на інші домішки, такі, як нітрати, афлатоксин, нітрофуран, діоксин, меламін і важкі метали; їх вміст має бути негативним або нижче вказаних рівнів. В одному варіанті втілення винаходу композиція винаходу може бути складена з молозива декількох гіперімунізованих джерел, призначених для різних кластерів або класів антигену, причому молозиво змішують, щоб забезпечити широкий спектр дії антитіл препарату. В іншому варіанті втілення винаходу матриця-носій складається з відновленої або штучної секреції слизової оболонки, такої як слізна рідина, назальна або бронхіальна слизова оболонка, слизова оболонка шийки матки, плазма сперми, піт, плазма крові або слина. Біологічні рідини, як відомо, містять декілька компонентів в різних кількостях. (Schenkels et al., Biochemical composition of human saliva in relation to other fluids, Crit. Rev. Oral Biol. Med., 1995, 6(2):161-175). Слина містить муцини, солі різних кислот, лізоцим (бактерицидний агент), ферменти амілазу і мальтазу, секреторний IgA, цистатіни, статерин, IgG, екстра-паротидний глікопротеїн (EP-GP), VEGh (ліпокалін), гістатини, лізоцим, калікреїн, лактоферин, лактопероксидазу, гаптокоррін, бета-мікросеміпротеїн, IgM, альбумін і Zn-альфа2-глікопротеїн. В одному аспекті, матриця-носій містить два або більше, три або більше, чотири або більше, п'ять або більше, шість або більше або сім або більше компонентів рідин організму. Слізна рідина, або рідини сльози, має багато однакових компонентів, що і слина, і має особливо високу концентрацію секреторного IgA, VEGh, лізоциму і лактоферину. В одному аспекті, штучна слізна рідина містить солі, такі як хлорид натрію і тому подібне, як основний інгредієнт, або очні краплі, що містять гідроксиетилцелюлозу, хондроїтін сульфат або гіалуронову кислоту або ксантанову камідь (патент США 7875271, який включений тут в якості посилання), як відомо в даній галузі і передумовлено наявністю двох або більше, трьох або більше, чотирьох або більше, п'ятьох або більше компонентів рідини, як це описано і використовується в якості матриці-носія для очищення поліклональних антитіл, як описано тут. В одному аспекті, композиція може бути використана для лікування мікробної інфекції очей, таких як кон'юнктивіт. Слизова оболонка шийки матки містить муцин, альфу-амілазу, лізоцим, лактопероксидазу, альбумін і бета-мікросеміпротеїн. Матриця утворена поєднанням двох або більше, трьох або більше, чотирьох або більше, п'яти або більше цих компонентів, як матриця-носій в композиції зі стеричною специфічно зв'язуючою молекулою, такою як антибактеріальне або протигрибкове поліклональне антитіло, отримане способами даного винаходу. В одному аспекті, винахід пропонує композицію, що містить смолу, здатну фіксувати воду або набухаючу у воді, та містить карбоксиметилкрохмаль у поєднанні з целюлозою як проникаючий агент, який, коли контактує з водою, майже миттєво набуває форми гелю і тим самим стає легко застосовним для вагінального вживання. Пігулки, що містять композицію антитіло/матриця, згідно з цим винаходом, можуть містити, наприклад, карбоксиметилкрохмаль і целюлозу, як описано в патенті США 4808415, який включений тут в якості посилання. У конкретному аспекті, антибактеріальні і протигрибкові поліклональні антитіла об'єднані в матрицю і сформульовані, щоб забезпечити лікування вагінозу широкого спектру дії. В одному 20 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 аспекті, композиція використовується для лікування вагінальної бактеріальної інфекції, такій як інфекція тріхомонадами або грибкового вагініту, такого як інфекція Candida. Слина є слизовою секрецією, яка присутня в порожнині рота і є продуктом слинних залоз. Слина виконує захисні функції, такі як змащення тканин, зволоження і ремінералізація зубів. Слина також виконує функції захисту хазяїну з імунологічною активністю, антибактеріальною, антивірусною і протигрибковою активністю. Слина також допомагає травній діяльності за допомогою травних ферментів, утворення болюсів і смаку. Слина містить різні білки, такі як гістатини і кислі багаті на пролін білки, які є унікальними для слини. Слина також містить білки, присутні в інших рідинах організму, таких як лізоцими, муцини, статеріни і імуноглобуліни. Слина містить білки, такі як альбумін і Zn-альфа-2-глікопротеїн, які виробляються в плазмі крові. Існує відома терапевтична цінність бичачої слини (Varshney et al., 1997, Therapeutic value of bovine saliva in wound healing: a histomorphological study., Indian J. Biol. May 1997, 35(5):535-7). В одному аспекті, компоненти слини можуть бути корисні, наприклад, в зубній пасті або рідині для полоскання рота або інших препаратах для перорального введення через слизові оболонки. Бронхіальна слизова оболонка містить муцин, альфа-амілазу, основні багаті на пролін поліпептиди (ПБП), цистатіни, статерін, EP-GP, лізоцим, бета-мікросеміпротеїн і альбумін. В одному аспекті, винахід пропонує композицію, що містить стеричну специфічно зв'язуючу молекулу і матрицю-носій, яка містить два або більше, три або більше, чотири або більше компоненти слини або бронхіальної секреції. В одному аспекті, композиція з матрицею-носієм має бути упакована в сухому форматі зі стеричною специфічно зв'язуючою молекулою, такою як поліклональні антитіла до Streptococcus групи А, які отримані відповідно до винаходу. В одному аспекті, суху композицію відновлюють, наприклад, у фізіологічному розчині і вводять в горло спреєм для лікування горла. Інші матриці-носії можуть бути отримані, щоб функціонувати в іншому середовищі використання, наприклад для аерозольного (інгаляційного), очного, місцевого або інших препаратів. У конкретному варіанті втілення винаходу специфічно зв'язуюча молекула і матриця-носій отримані від різних видів. У додатковому аспекті, і специфічно зв'язуюча молекула, і матрицяносій є похідними від нелюдського виду. В іншому аспекті, специфічно зв'язуюча молекула отримана від тварин, що не відносяться до ссавців. В іншому аспекті, матриця-носій є похідним від нелюдиноподібного ссавця. СКЛАДИ ТА КОМПОЗИЦІЇ В одному варіанті втілення винаходу антитіла одержують із плазми, сироватки або крові, молозива, яєць, або іншого компонента інокульованої тварини або штучної системи виробництва (наприклад, клітинної культури), потім очищають або обробляють і додають до матриці-носія, такого як молозиво. Композиції можуть використовуватися в якості середовища для доставки, наприклад, пероральне введення композиції антитіла. Цей спосіб може забезпечити ефективний шлях надійного масштабування виробництва антитіл для композиції таким чином, щоб контролювати титр, системність і постійну доступність для комерційних потреб. В одному з варіантів, антитіла одержують із яєць привитих тварин, і вони можуть бути очищені або оброблені або збережені у вигляді яєчного матеріалу, і додаватися в бичаче молозиво. Існує явна потреба в ефективному лікуванні низької вартості багатьох шлунково-кишкових патогенів, та кандидатами на цю роль є пероральні антитіла. Крім продемонстрованої ефективності, пероральні антитіла, як правило, не-імуногенні. Як правило, вони вважаються добре сприятливими і без небажаних побічних ефектів, не відрізняються реакцією і можуть бути використовуватися з їжею. Примітно, що кілька продуктів, що містять пероральні антитіла, одержали сертифікацію GRAS (у цілому визнані безпечними) від FDA (Управління контролю якості харчових продуктів і лікарських препаратів у США). Один варіант втілення винаходу являє собою широкого спектра терапевтичну або профілактичну антитоксичну композицію, яка складається із суміші широкого спектру нейтралізуючих антитіл, впроваджених у матрицю-носій, яка була вироблена відповідно до цього способу, що забезпечує ефективне введення при широкому спектру невідомих або недіагностованих умов, що призводять до опосредкованої токсинами діареї. Один варіант втілення цього винаходу являє собою широкого спектра терапевтичну або профілактичну антипатогенну композицію, впроваджену в матрицю-носій, що містить домішку широкого спектра дії антипатогенних антитіл, отриманих відповідно до цього способу. Один варіант втілення справжнього винаходу являє собою широкого спектру терапевтичну або профілактичну антипатогенну композицію, впроваджену в матрицю-носій, що містить домішку широкого спектру антиадгезивних антитіл, отриманих відповідно до цього способу. 21 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Один варіант втілення винаходу являє собою широкого спектру терапевтичну або профілактичну антипатогенну композицію, впроваджену в матрицю-носій, що містить домішку широкого спектру антитоксинних, антипатогенних і антиадгезивних антитіл, отриманих відповідно до цього способу. Одним із важливих обмежень використання продуктів на основі природних харчових продуктів є те, що препарати обмежені результатами внаслідок природних процесів. Цей винахід дозволяє селективне додавання рівнів специфічних антитіл і загальних імунних факторів (композиції), які значно вище, ніж фізіологічні рівні, які звичайно можуть бути досягнуті в природі. Цей винахід також забезпечує зважування різних факторів таким чином, щоб створити більшу специфічність цільових захворювань, патогенів або речовин. В одному варіанті втілення винаходу композиція містить специфічно зв'язуючу молекулу в композиції сухої твердої речовини (яєчний порошок). Порошкоподібна композиція запечатана у герметичних пакетах, при необхідності, покритий шаром інертного газу. Композицію можна зберігати протягом тривалого періоду часу при кімнатній температурі, в охолодженому стані або при знижених температурах. В інших варіантах втілення винаходу висушену композицію формують у вигляді капсул або таблеток для перорального застосування. В іншому варіанті втілення винаходу композиція пресується в жувальні таблетки. В іншому варіанті втілення винаходу даний винахід звертається до фармацевтично прийнятних розріджувачів для формулювання композиції, де зазначені фармацевтично прийнятні розріджувачі вибирають із групи, що включає лактозу, манніт, сорбіт, мікрокристалічну целюлозу, сахарозу, цитрат натрію, фосфат дікальція, або будь-який інший інгредієнт подібної природи окремо або у відповідній комбінації; зв'язуючу речовину, яку вибирають із групи, що складається із трагакантової камеді, аравійської камеді, метилцелюлози, желатину, полівінілпірролідону, крохмалю або будь-якого іншого інгредієнта подібної природи окремо або у відповідній комбінації; наповнювачі допоміжних речовин, які обирають з групи, що включає агар-агар, карбонат кальцію, карбонат натрію, силікати, альгінову кислоту, кукурудзяний крохмаль, картопляний крохмаль тапіоки, примогель або будь-який інший інгредієнт подібної природи окремо або у відповідній комбінації; лубриканти, які вибирають із групи, що включає стеарат магнію, стеарат кальцію або стеорот, тальк, тверді поліетиленгліколі, лаурилсульфат натрію або будь-який інший інгредієнт подібної природи окремо; гліданти, які вибирають з групи, що включає колоїдний діоксид кремнію або будь-який інший інгредієнт подібної природи окремо або у відповідній їх комбінації; підсолоджувач, який вибирають з групи, що включає сахарозу, сахарин або будь-який інший аналогічний інгредієнт подібної природи окремо або їх відповідна комбінація; ароматизатор, який вибирають із групи, що включає м'яту перцеву, метилсаліцилат, апельсиновий ароматизатор, ванільний ароматизатор або будь-який інший фармацевтично прийнятний смак окремо або у відповідній їх комбінації; змочувальні агенти, які вибирають із групи, що складається з ацетилового спирту, моностеарату гліцерину або будь-якого іншого фармацевтично прийнятного змочувального агента окремо або в підходящій їх комбінації; абсорбенти, які вибирають із групи, що складаються з каоліну, бентонітової, глини або будь-якого іншого фармацевтично прийнятного абсорбенту окремо або у відповідній комбінації; ретарданти, які вибирають із групи, що складаються з воску, парафіну або будь-яких інших фармацевтично прийнятних ретардантів окремо або в підходящій комбінації. В іншому аспекті, добова доза для людини, яка не є новонародженим, стандартизована будь-яким способом кількісного визначення специфічних антитіл. В одному аспекті, доза композиції стандартизована використанням ІФА для оцінки концентрації специфічних антитіл проти антигену в композиції. В одному аспекті, одна доза пероральної композиції , ефективної для лікування патогенної інфекції, містить антиген-специфічну зв'язуючу молекулу у кількості від приблизно 0,0001 мг до 20 мг; від 0,001 мг до 15 мг; від 0,01 до 10 мг; від 0,05 до 5 мг; від 0,1 до 1 мг змішаної антиген-специфічної зв'язуючої молекули. Термін "тверда форма" відноситься до висушеної форми специфічно зв'язуючої молекули або висушеної форми матриці-носія або твердої лікарської форми, що містить як висушену специфічно зв'язуючу молекулу, так і матрицю-носій у вигляді порошку, спресованої таблетки, таблетки або капсули. В одному аспекті, тверда дозована форма призначена для перорального введення. В одному аспекті, порошок являє собою композицію для суспензії. В одному аспекті, порошкоподібне висушене імунне яйце та порошкоподібне висушене молозиво упаковані в герметичний пакет. Безпосередньо перед пероральним введенням, вміст пакета суспендують або розчиняють, приблизною кількістю рідини й вводять перорально. В одному аспекті, композиція також може вводитьися в рідкій формі. 22 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В одному з аспектів, одна доза містить 1 г, 2 г, 3 г, 4 г, 5 г, 5 г, 6 г, або 7 г сухого імунного яйця та 1 г, 2 г, 3 г, 4 г, 5 г, 5 г, 6 г, або 7 г сухого бичачого молозива. В одному аспекті, одна доза висушеної лікарської форми містить 3 г висушеного імунного яйця і 4 г висушеного бичачого молозива. В одному аспекті, одна доза висушеної лікарської форми містить 2 г висушеного імунного яйця і 4 г висушеного бичачого молозива. В одному аспекті, одна доза висушеної лікарської форми містить 4 г висушеного імунного яйця і 4 г висушеного бичачого молозива. В іншому аспекті, дозу вмісту одного пакета розчиняють у приблизно 2 унціях води і вводять перорально. Композиції для перорального застосування можуть бути також отримані у вигляді пастилок, жувальних таблеток або у вигляді твердих желатинових капсул, де активний інгредієнт змішаний з інертним твердим розріджувачем (наприклад, картопляним крохмалем, лактозою, мікрокристалічною целюлозою, карбонатом кальцію, фосфатом кальцію або каоліном), або у вигляді м'яких желатинових капсул, де активний інгредієнт змішаний з водою або маслянистим середовищем, наприклад, арахісовим маслом, рідким парафіном або оливковим маслом. Порошки й гранули можуть бути отримані з використанням інгредієнтів, зазначених вище для таблеток і капсул звичайним способом, з використанням, наприклад, міксера, апарата із псевдозрідженим шаром або устаткуванням для розпилюваного сушіння. У різних варіантах втілення винаходу композиції згідно з винаходом мають різні переваги в порівнянні з попереднім рівнем у даній галузі науки. В одному аспекті, композиції за винаходом, що містять антиген-специфічний IgY і матрицю-носій з бичачим молозивом мають перевагу в тому, що вони готуються за короткий період часу у межах від приблизно 6 тижнів після того як необхідні антигени визначені. Це забезпечує легку відтворюваність і стандартизацію протоколів курячої вакцинації. В одному конкретному аспекті, різні групи курей були вакциновані єдиним, змішаним антигенним препаратом кожна, а потім їх об’єднали отримання широкого спектру дії композиції для лікування патогенної інфекції. В одному конкретному аспекті, три групи курей були вакциновані окремо змішаними антигенними препаратами, а потім їх об'єднали для одержання широкого спектра дії композиції для лікування недиференційованої діареї. Цей спосіб має перевагу в тому, що суміш антигенспецифічних антитіл у композиції може бути адаптована для конкретного спалаху, регіону або сезону, якщо це необхідно. Нарешті, у варіантах втілення винаходу специфічно зв'язуючі молекули не повинні бути відділені від цільного сухого яйця для швидкого готування й тривалого зберігання. В іншому аспекті, композиції за винаходом є ефективними для перорального застосування в лікуванні патогенних інфекцій у дітей. Шлунково-кишковий тракт дитини дуже кислотний і менш абсорбтивний, ніж у немовляти, як описано тут. У прикладах винаходу композиції були ефективні при лікуванні недиференційованої діареї в дитини від 6 місяців до 5 років. В іншому аспекті, композиції за винаходом є ефективними при лікуванні або профілактиці діареї мандрівників у дорослих. Матриця-носій є захисною й реактивною матрицею для комбінації з антигенспецифічними зв’язуючими молекулами. В іншому аспекті, композиції за винаходом наведені в порошкоподібній твердій формі для готування суспензії безпосередньо перед введенням. В одному аспекті, суспендована або відновлена лікарська форма має перевагу в тому, що дуже прийнятна для немовлят і дітей, навіть якщо вони страждають від симптомів патогенної інфекції. Дана перевага в тому, що повна доза легко вводиться і потрапляє в організм суб’єкта, що страждає від патогенної інфекції. В іншому аспекті, композиції згідно з винаходом можуть бути використані для введення широкого спектра пасивного імунітету, або лікування, або профілактики патогенних інфекцій. В одному аспекті, низький рівень імунізації курей може бути достатнім для одержання композиції з ефективною кількістю антиантиген-специфічної зв'язуючої молекули для отримання ефективної, широкого спектра дії композиції при введенні з матрицею-носієм. ЛІКУВАННЯ АБО ПРОФІЛАКТИКА ПАТОГЕННОЇ ІНФЕКЦІЇ Композиції згідно з даним винаходом включають специфічно зв'язуючий білок, впроваджений у матрицю-носій. Ці композиції можуть бути введені будь-яким способом, що підходить до їх конкретних імуногенних або біологічних або імунологічних реактивних характеристик, у тому числі - пероральним, внутрішньовенним, трансбуккальним, назальним, через слизову оболонку, шкіру або іншими способами, на основі відповідної матриці-носія. Конкретний варіант втілення включає пероральне введення композиції згідно винаходу. У різних варіантах втілення винаходу композицію вводять у якості профілактичної або терапевтичної композиції. У різних аспектах, композиція містить фармацевтично прийнятний носій. У різних аспектах, композиція не містить полімер, співполімер, ліпосоми, гідрогель або фібрин. У різних аспектах, композиція не містить мікросфер або мікрокапсул. У різних аспектах, композиція не включає імуноген або антиген. Композиція за винаходом може бути введена за 23 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 допомогою перорального, назального, очного введення, через слизову оболонку або їх комбінації. Один варіант втілення даного винаходу використовує пероральне введення. Було продемонстровано на прикладі систем людини й тварини, що пероральне введення антитіл, імуноглобулінів і інших біологічних імунних факторів може виявити помітний вплив на курс, вагу й тривалість захворювання, пов'язані з, або під впливом, шлунково-кишкового тракту. Домішка широкого спектру антитіл впроваджена в межі матриці-носія, такого як, наприклад, молозиво для перорального введення. Молозиво служить для забезпечення синергічного захисту і є ефективним атрибутом по відношенню до композиції антитіла . Будь-яка комбінація антитіла може бути використана в межах носія, включаючи, але не обмежуючись, комбінацію антипатогенних, антитоксичних і антиадгезивних антитіл. В одному аспекті, композиції згідно з винаходом використовують для лікування пацієнтів, що страждають від різних патогенних інфекцій. Композиції й препарати для перорального введення можна вводити один раз, два, три або чотири рази в день за два, три, чотири, п'ять, шість, сім, 8, 9, 10, 11 або 12 послідовних днів для лікування патогенної інфекції. В одному аспекті, композицію вводять двічі на день протягом п'яти днів для лікування патогенної інфекції. В іншому конкретному аспекті, композицію вводять один раз на день протягом трьох послідовних днів для ефективного лікування недиференційованої діареї у дітей, або для лікування діареї мандрівників у дітей або дорослого. В іншому аспекті, композиція може вводитися регулярно для профілактики патогенних інфекцій. У випадку композиції для лікування патогенної інфекції слизової, шляхом місцевого введення в слизову оболонку, композиція може бути введена від двох до шести разів на день протягом періоду від 3 до 12 днів. У переважному варіанті втілення винаходу винахід пропонує композицію, ефективну для лікування недиференційованої діареї в дитини людини. Композиція використовує ефективні стратегії поліклональних антитіл (курячі щеплення, з антитілами, отриманими з яєць), щоб створити антитіла з високою специфічністю, націлені на кілька причин патологічної діареї. У конкретному варіанті втілення винаходу композиція включає специфічні поліклональні антитіла в матриці-носії, яка є комерційним бичачим молозивом. У переважному варіанті втілення винаходу винахід пропонує економічну композицію для ефективного лікування недиференційованої діареї у дітей. Композиція включає суміш поліклональних антитіл, у першу чергу IgY, специфічну E. coli, Salmonella spp., ротавірус, грамнегативні бактерії, токсини, що продукують патогени й адгезини, які забезпечують патогену закріплення й колонізацію в шлунково-кишковому тракті. У конкретному аспекті, композиція містить еквівалентну кількість висушеного імунного яєчного продукту в кожній із трьох інокульованих груп з різними антигенами або різними антигенними сумішами препаратів, які спільно упаковані з певною кількістю комерційним способом висушеного гіперімунного бичачого молозива. В одному варіанті втілення винаходу від 0,5 до 3 г, від 0,7 до 2,0 г, 1,0 г, 1,3 г або 1,5 г сухого продукту імунного яйця з кожної групи додають до однієї дози пакета. Переважно або 1,0 г або 1,3 г кожного імунного яєчного продукту додають до однієї дози пакета. В іншому аспекті, від 1 до 5 г, 2 г до 4 г, 1,5 г, 2,0 г, 2,5 г, 3,0 г, 3,5 г, 4,0 г, 4,5 г або 5 г висушеного молозива додають у той же пакет. Перед застосуванням вміст пакету або саше, змішують із приблизно 2 унціями очищеної води або іншими пероральними рідинами. Усю відновлену композицію вводять перорально суб’єкту. Композицію можна вводити один-чотири рази на день протягом від двох до десяти днів. У конкретному варіанті втілення винаходу композицію вводять один раз на день протягом 3 послідовних днів. Винахід забезпечує спосіб лікування недиференційованої діареї у дітей за допомогою введення композиції за винаходом один раз на день протягом двох, трьох або чотирьох днів. В одному з аспектів, композицію за винаходом вводять в якості додаткової терапії до лікування антибіотиками. У цьому аспекті, композиція може бути введена один раз на день протягом перших трьох днів лікування. В іншому аспекті, композицію за винаходом вводять із розчином для пероральної регідратації (РПС). В іншому аспекті, композицію за винаходом вводять разом з пероральним розчином цинку. В іншому аспекті, композицію за винаходом вводять у якості доповнення до лікування антибіотиками, щоб запобігти надмірному росту конкретного патогенного організму, що є стійким до антибіотиків. Як докладно описане в прикладах, композиція і спосіб ефективні для швидкого лікування симптомів недиференційованої діареї у дітей, у результаті чого значно знижується обсяг випорожнень, частота випорожнень та тривалість діареї, а також значно поліпшується загальний стан. 24 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 В одному альтернативному варіанті втілення винаходу композиції за винаходом використовуються для лікування діареї мандрівників. Наступ ДМ звичайно відбувається протягом першого тижня подорожі, але може відбутися в будь-який час протягом подорожі, і навіть, після повернення додому. Найбільш важливим фактором, що визначає ризик, є пункт призначення мандрівника. Високими ризиками напрямку є країни, що розвивається: Латинської Америки, Африки, Близького Сходу й Азії. Групою ризику є особи, зокрема молоді люди, люди з ослабленим імунітетом, особи із запальними захворюваннями кишечнику або діабетом, і особи, що приймають Н-2 блокатори або антациди. Більшість випадків ДМ починаються раптово. Хвороба звичайно призводить до збільшення частоти, обсягу й ваги випорожнень. Змінені послідовності випорожнень також є розповсюдженим явищем. Як правило, мандрівник робить чотири або п’ять рідких або водянистих випорожнень щодня. Іншими симптомами зазвичай є нудота, блювота, діарея, спастичні болі у животі, здуття живота, лихоманка й нездужання. Інфекційні агенти є основною причиною ДМ. Бактеріальні ентеропатогени викликають приблизно 80% випадків ДМ. Найпоширеніший збудник виділений в обстежених країнах і є ентеротоксигенною Escherichia coli (ЕТЕС). ЕТЕС продукує водянисту діарею, пов’язану із судомами й зниженням температури, але без лихоманки. Крім того, ETEC і інші бактеріальні патогени, різні вірусні й паразитарні кишкові патогени також є потенційними збудниками. В одному аспекті, композицію за винаходом вводять пацієнтові один раз на день протягом трьох послідовних днів в якості альтернативи або доповнення до антибіотиків для лікування діареї мандрівників. Обмежені дані польових досліджень спостерігають поліпшення симптомів діареї протягом 24 або 48 годин після першої дози. Крім того, дві дози на день композиції за винаходом вводять в 1-й день, після одноразової дози в дні 2 і 3. В одному аспекті, композицію за винаходом вводять за альтернативним щоденним або щотижневим графіком, або за графіком зменшення дозування для профілактики діареї мандрівників. В іншому альтернативному варіанті втілення винаходу композиції за винаходом використовуються як "пребіотик" для керування шлунково-кишковою флорою суб’єкта, наприклад, до введення пробіотика. Термін "пребіотик", що використовується тут, відноситься до композиції, яка дозволяє специфічні зміни, як у композиції, так в активності кишкової мікрофлори, що впливає на поліпшення стану здоров'я суб’єкта. В одному варіанті втілення винаходу композиція є корисною для керування кишковою мікрофлорою таким чином, щоб зменшити або усунути один або більше небажаних штамів бактерій. В одному аспекті, антиантигенна імуноглобулінова композиція створена для керування кишковою мікрофлорою таким чином, щоб зменшити або усунути один або більш небажаних штамів бактерій. В іншому аспекті, композицію використовують як доповнення до традиційних пробіотиків. В іще одному аспекті, композиція за винаходом додатково містить розчинне волокно. В іншому аспекті, композиція використовується тільки для керування флорою. В іншому аспекті, винахід пропонує спосіб керування флорою шлунково-кишкового тракту у суб’єкта, що містить стадії введення композиції за винаходом, щоб зменшити або усунути один або більше небажаних штамів бактерій, з наступним введенням пробіотика для введення одного або більш бажаних штамів бактерій. В іншому аспекті, композицію за винаходом вводять як доповнення до лікування антибіотиками, щоб запобігти надмірному росту конкретного патогенного організму, який є стійким до антибіотиків. ПРИКЛАД 1. Композиції для лікування діареї Діарея є симптомом широкого спектру причин, включаючи бактеріальні, вірусні, протозойні й паразитарні інфекції. Бактеріальну діарею індукують кілька організмів, у тому числі різні форми Escherichia coli, Salmonella, Vibrio cholerae та parahemolyticus, Shigella, Campylobacter, Yersinia та інші. Вірусна діарея у дітей часто є причиною ротавіруса, але також може бути викликана декількома іншими вірусами. Відомі кілька збудників діареї в організмі. Ці збудники можуть бути об'єднані в загальний кластер, який виробляє структурно-родинні токсини, якому до яких може бути створена серія широкого спектру нейтралізуючих антитіл, які, при змішування в композиції із клінічно ефективними титрами, можуть використовуватися в якості незалежного терапевтичного втручання широкого спектру дії на організм для токсин-опосередкованої діареї. Інакше кажучи, антитіла, специфічні до збудників діареї, генеруються за допомогою щеплення курей антигеном. Імунні яйця збирають, і цільне яйце пастеризують і сушать розпиленням, з одержанням порошкоподібної форми. Комерційне бичаче молозиво змішують у порошкоподібну форму. Два порошки додають послідовно до однієї дозі пакету й герметизують, і поширюють у сушеному вигляді для перорального застосування. Перед введенням порошкового перорального препарату, його змішують із невеликою кількістю води. 25 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Це лікування націлене на створення пасивного імунітету у пацієнтів, як показано в даних прикладах. Природа лікування виробляє супутні фактори ризику, що можуть бути порівняні з їжею з джерела, де були зібрані антитіла (наприклад, аналогічним фактором ризику буде з'їсти яйце й випити склянку молока). Це ефективне лікування з меншою токсичністю, ніж наявні на сьогодні альтернативні медикаменти. Приклад 1А. Кури були індивідуально інокульовані очищеними антигенами, отриманими з 5 штамів E.coli: чотирьох штамів АТСС, що містять антигени для адгезивних пілей E.coli F41, 97P, F19 і K99, і одного дикого типу штаму E.coli, отриманого з молока. Кожну курку інокулювали тільки одним антигеном. Кури були щеплені один раз на тиждень протягом трьох тижнів. Ад'ювант Фрейнда був використаний для першої імунізації, а потім неповний ад’ювант Фрейнда для другого й третього щеплення. Два уколи, у ліву й праву груди, були використані для щеплення. Яйця були розміщені окремо; яйця були зібрані, флеш-пастеризовані й висушені розпиленням. Кожний з п'яти препаратів антитіл змішували в рівних частинах. У вигляді сухого яєчного порошку препарат антитіла до E. coli зберігають у замороженому вигляді протягом 2 років. Друга група курей інокульована змішаним антигенним препаратом, що містить ротавірус, коронавірус і антигени E. coli. Протоколи щеплення, збору й переробки яєць були дотримані, як зазначено вище. У вигляді сухого яєчного порошку антитіла проти діареї зберігають у замороженому вигляді протягом 1,5 років. Для характеристики препаратів антитіл був використаний ІФА. Один грам кожного з висушених антитіл препарату проти E.coli, і висушені антитіла антидіарейного препарату були змішані з 3 г або 4 г комерційно висушеного жирного коров'ячого молозива в одному пакеті дози. Приклад 1Б. Три групи курей були індивідуально інокульовані, кожна різними змішаними антигенними препаратами: перший антигенний препарат містить ротавірус (серотипи G6 і G10), коронавірус, ентеротоксигенну E. Coli з фактором адгезивних пілей K99 й Clostridium perfringens типу C, анатоксин з ад’ювантом, другий препарат, що містить ентеротоксигенні штами E. coli, що має фактор адгезивних пілей K99, K88, 987P або F41); і третій змішаний антигенний препарат, що містить різні кишкові палички, ендотоксин; з ад’ювантом). Кожна із трьох груп одержала тільки по одному змішаному антигенному препарату. Яйця були зібрані, очищені, розбиті, пастеризовані й висушені розпиленням або тепловим сушінням, щоб створити три сухі імунні яєчні продукти. Сухий яєчний продукт, при потребі, додатково оцінювався ІФА для питомої активності IgY. Однакову кількість кожного із трьох висушених імунних яєчних продуктів змішували з 3 г або 4 г висушеного молозива в одній дозі пакету. Або 2 г, 3 г або 4 г загальної ваги сухого імунного яєчного продукту було використано в одній дозі пакета, як описано нижче. В одному аспекті, комерційно висушене молозиво не проявляло питому активність стосовно антигенів вакцин. Приклад 1В. Імунізація курей за допомогою виробництва IgY. Наступний протокол імунізації був адаптований із протоколу Gallus Immunotech, Inc. і може бути використаний для генерації IgY поліклональних антитіл. Кілька яєць необов'язково повинні бути зібрані перед імунізацією, щоб служити в якості базового контролю. Якщо змішаний антигенний препарат використовується для великої рогатої худоби або свиней, то він розбавляється в пропорції 1:2, 1:4, 1:8 або 1:16 перед введенням. У день 0, курям вводять середню кількість між 0,02 і 0,5 мг антигену з повним ад’ювантом Фрейнда. Ін'єкції можуть бути або підшкірними, або внутрішньом'язовими, у тканини молочної залози курки в декількох місцях. Загальний обсяг суміші антиген/ад’ювант може бути приблизно 1 мл ад’юванта від половини до двох третин від обсягу. Імунізації повторюються, звичайно, у дні 14, 21 і 28, з використанням неповного ад’юванта Фрейнда, приблизно в половині від початкової кількості антигену. Як правило, специфічне антитіло в яйцях може бути виявлене приблизно на 30-й день. При тривалому виробництві антитіл, курячі ін'єкції підвищуються кожні кілька місяців. Яйця можуть зберігатися в холодильних установках до обробки та/або очищення IgY. В одному аспекті, яйця можуть перебувати в холодному зберіганні на строк до одного місяця, або до двох місяців, до обробки або очищення. В іншому аспекті, IgY можуть бути отримані аналогічним чином з качиних, гусячих, страусових, перепелиних або індюшачих яєць, з використанням відповідних кількостей антигену. ПРИКЛАД 2. Введення антитіл для лікування Clostridium difficile В одному варіанті втілення винаходу способи й композиції за винаходом, які використовуються для лікування Clostridium difficile (C. difficile), бактерії, які природно присутня в більшості людей. Кількість бактерій C. difficile перебуває під контролем з боку іншої природної флори кишечнику. Пацієнти часто провокують інфекції C. difficile, коли вводять антибіотики 26 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 протягом іншого захворювання, тим самим руйнують природну флору кишечнику, що дозволяє бактеріям C. difficile розмножуватися безконтрольно. У той час як багато штамів C. difficile можна лікувати за допомогою антибіотиків, росте все більша кількість штамів C. difficile, яке є стійкими до лікування антибіотиками. Це призводить до тривалого й важкого відновлення для пацієнтів, і навіть може стати небезпечним для життя в певних обставинах. Процес нейтралізації популяцій C. difficile за допомогою антитіла, яке створює пасивний імунітет, здатний контролювати кількість бактерій C. difficile для їхнього природного балансу, при цьому флора кишечнику повинна бути відновлена. Як і у випадку з протидіарейними складами покликаними для використання проти ротавіруса і грамнегативних бактерій, антитіло, впроваджене в матрицю-носій, створене спеціально для прив'язки до C. difficile або його токсинів і є ефективним терапевтичним способом. Ця композиція може бути використана для лікування або поточної інфекції або для запобігання такій інфекції. Таким чином, лікування можна вводити окремо або одночасно з антибіотиком. Ця процедура приносить не тільки користь пацієнту, що переносить C difficile, також її можна вводити пацієнтам з високим ризиком розвитку C. difficile у профілактичних цілях. Антитіла, які нейтралізують C. difficile, вводяться в матрицю-носій (суміш білків і ферментів, які призначені для "активування" антитіл у кишечнику, а також забезпечення вторинного імунітету, захисту або харчування). В одному варіанті втілення винаходу антитіла вводять шляхом ін'єкції або щеплення тварини з антигеном, або комбінацією антигенів, які можуть або не можуть утримуватися у вигляді антигенного змішаного препарату (можливо в комбінації з ад’ювантом, щоб викликати сильну імунну відповідь). В одному аспекті антиген отриманий з антигену або токсину C. difficile. В іншому аспекті, комбінація антигенів містить один або кілька антигенів або токсинів, отриманих з C. difficile, а також один або кілька додаткових вірусних антигенів. В іншому аспекті, комбінація антигенів містить один або більше антигенів або токсинів, отриманих з C. difficile, і один або більше додаткових бактеріальних антигенів або токсинів. В іншому аспекті, комбінація антигенів містить один або кілька антигенів, отриманих з C. difficile, а також один або декілька додаткових протозойних антигенів. В іншому аспекті, комбінація антигенів містить один або кілька антигенів, отриманих з C. difficile, а також один або декілька додаткових грибкових антигенів. Потім антитіла отримують, ізолюють або виділяють із тваринних продуктів, таких як молоко, яйця, або молозиво тварини, або отримують безпосередньо від тваринного продукту, наприклад, сироватки, плазми. У конкретному аспекті, курей інокулюють антигеном, комбінацією антигенів або вакциною, а антитіла одержують із цілих яєць або яєчного жовтка або із цільних або очищених яєць або яєчного жовтка привитих курей. В іншому аспекті антитіла є поліклональними антитілами. Ця композиція призначена в якості допомоги для лікування інфекції C. difficile або може бути профілактичним засобом проти інфекції C. difficile. Наприклад, речовина складається з антитіл, конкретно націлених на C. difficile, впроваджених в матрицю-носій (наприклад, молозиво). Після збору, антитіла можуть бути перетворені в порошок. Матриця-носій також може мати форму порошку. Два порошки потім ретельно змішують або додають окремо в одну дозу пакета або флакона й поширюють у сухій формі. У переважному способі введення, речовину можна вводити перорально, проковтуванням. Для споживання, порошкоподібні речовини будуть змішані з невеликою кількістю рідини, такої як вода, молоко, сік або розчин електроліту, безпосередньо перед вживанням, і будуть прийняті відповідно до вказівок лікаря. Також передбачаються інші способи введення. На сьогоднішній день лікування інфекції C. difficile фокусується на антибіотикотерапії. Проте, існують випадки, коли сильні антибіотики були причиною інфекції, а у випадках, коли розвивається стійкість до антибіотиків, на сьогодні відомо кілька альтернативних способів лікування. Даний варіант втілення винаходу спрямований на нейтралізацію C. difficile, використовуючи природні імунні механізми, а не токсичні антибіотики. Перевага полягає в тому, що це дозволяє ріст природної флори кишечнику при одночасному зниженні рівня популяції C. difficile. Комбінація антитіл, введених в матрицю-носій для підвищення ефективності антитіл, у цей час не використовується при лікуванні хвороб, викликаних C. difficile. Способи за винаходом створюють пасивний імунітет у пацієнтів. Характер лікування робить супутні фактори ризику такими, що можуть бути порівняними з їжею із джерела, де були зібрані антитіла (наприклад, аналогічним фактору ризику буде з'їсти яйце й випити склянку молока). Це ефективне лікування з меншою токсичністю, ніж наявні в цей час альтернативні медикаменти. В одному аспекті, обрані антитіла одержують, очищають і відокремлюють і одержують у порошкоподібній формі. В іншому аспекті, обрані антитіла не очищені або відділені, але 27 UA 115524 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 оброблені як питомий продукт. Наприклад, вміст цільного яйця, отриманого із привитих курей, обробляють, наприклад, пастеризують і одержують у порошкоподібній формі, без додаткових стадій очищення. Активовану ферментну/білкову суміш (наприклад, включаючи молозиво) також одержують у формі порошку. Два порошки ретельно змішують і поширюють у сухому вигляді для перорального застосування. Перед введенням порошкового перорального препарату, його змішують із невеликою кількістю води. Це лікування пасивного імунітету у пацієнтів. Характер лікування робить супутні фактори ризику такими, що можуть бути порівняними з їжею із джерела, де були зібрані антитіла (наприклад, аналогічним фактору ризику буде з'їсти яйце й випити склянку молока). Це ефективне лікування з меншою токсичністю, ніж наявні в цей час альтернативні медикаменти. ПРИКЛАД 3. Введення антитіл для лікування Helicobacter avlori. Helicobacter pylori (H. pylori) являє собою грамнегативні бактерії, які можуть жити в області шлунка. Вважається, що H. pylori зв'язаний із виразкою дванадцятипалої кишки й виразкою шлунка й, можливо, раком шлунку. H.pylori, може уникнути кислотного середовище шлунка за допомогою занурення в слизовий шар епітеліальної клітинної поверхні, який має більш нейтральне рН середовище. H.pylori може виробляти адгезини для зв'язування з мембранними єднальними ліпідами й вуглеводами епітеліальних клітин. Колонізація H. Pylori всередині області шлунка може бути результатом хронічного гастриту, тривалого запалення шлунку. Інфекції H. Pylori є основною причиною виразкової хвороби. Обрані антитіла проти Helicobacter Pylori отримані й підготовлені у формі порошку. Активовану ферментну/білкову суміш (наприклад, включаючи молозиво) також одержують у формі порошку. Два порошки ретельно змішують і поширюють у сухому вигляді для перорального застосування. Перед введенням порошкового перорального препарату, його змішують із невеликою кількістю води. Способи за винаходом створюють пасивний імунітет у пацієнтів. Характер лікування робить супутні фактори ризику такими, що можуть бути порівняними з їжею із джерела, де були зібрані антитіла (наприклад, аналогічним фактору ризику буде з'їсти яйце й випити склянку молока). Це ефективне лікування з меншою токсичністю, ніж наявні в цей час альтернативні медикаменти. ПРИКЛАД 4. Клінічні дослідження ефективності при недиференційованій діареї Ефективне лікування діареї широкого спектра дії є серйозною проблемою, у зв'язку із широким спектром збудників, обмеженою доступністю діагностичного тестування для визначення режимів і способів. Поточні стандартні втручання у випадках важкої діареї включають введення антибіотиків і солей для пероральної регідратації (СПР). Однак такий підхід показав обмежену ефективність, і сприяв розвитку стійких до антибіотиків штамів бактерій. Приклад 4А. Польові дослідження (випробування) 1 і 2. Клінічні дослідження проводилися для оцінки переносимості й ефективності препарату прикладу 1А для лікування, або прискорення закінчення недиференційованої діареї. Першим прикладом для порівняльного дослідження, послужив випадок у 63 педіатричних пацієнтів з діареєю у дітей обох статей від шести місяців до п'яти років. У ході дослідження порівнювалися клінічні результати Тест-групи А, "Випробування 1", яка перорально отримувала композицію за Прикладом 1А, разом з антибіотиками і СПР; Тест-групи Б, що одержувала тільки антибіотики й СПР. Друга Тест-група АА., "Випробування 2", надійшла в кількості 33 пацієнтів для наступних досліджень по перевірці композиції Прикладу 1А при різних сезонних умовах. Усі педіатричні пацієнти, що брали участь, представляли випадок "серйозної" або "важкої" діареї (рівень 4 або 5) по 5-бальній шкалі (див. Таблицю 1), по оцінці лікаря. Діагностична диференціація не була зроблена для визначення збудника або етіології діареї у дітей. Пацієнти з підвищеним водянистим випорожненням або кров'яним випорожненням були виключені. Крім того, пацієнти, у яких була алергія на молоко, курку або яєчні продукти, також були виключені. 50 Таблиця 1 5-бальна шкала Частота випорожнень Консистенція випорожнень Стан по оцінці лікаря Рівень 1 1-2 на день 1 = норма 1 = норма Рівень 5 10 або більш на день 5 = абсолютно рідкий 5 = важке ( як правило, стаціонар) Зареєстровані діти (n = 63) були розділені на дві групи, експериментальне Дослідження 1, "Група А" (34 зареєстрованих; 29 з яких пройшли випробування), негативний контроль "Група В" 28