Спосіб інактивації вірусів

Способ инактивации вирусов, включающий культивирование клеток, приготовление вирусной суспензии, инактивацию вирусов ин витро, о т л и ч а ю щ и й с я тем что инактивацию вирусов ин витро выполняют настойкой женьшеня. Изобретение относится к области ветеринарной медицины, вирусологии, биотехнологии и может быть использовано при изготовлении противовирусных препаратов. Известны способы инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препарзтов путем их обработки химическими реагентами, например N-зцетилэтиленимином, N-этилотиленимином [1] Известны методы замораживания-размораживания инфицированной культуры клеток с последующими прогреваниями, нейтрализацией, лиофилизацией, удалением частиц-агломератов осаждением спиртом [2] Однако этот процесс трудоемкий, не достигается положительный результате целым рядом вирусов В качестве прототипа вибрано средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов [3] Используют димер этиленимин, который получают при полимеризации этиленимина. Однако он имеет сравнительно высокую токсичность в безводном состоянии, требует при работе растворения в дистиллированной воде, свободной от СО2, хранения в герметически закрытой таре. Кроме этого, его нужно Известно, что N-этилэтмленимин в концентрации 0,05% инактивирует вирус ящура типа О в культуральной жидкости в течение 11 ч при 37°С и 52 ч при 22°С. Однако этот способ является крайне нестабильным, труднодоступным и слабым инактивирующим средством. 20500 нейтрализовать, для чего используют тиосульфат натрия. Для инактивации вируса необходимо также применение фосфатного буферного раствора определенной рН и температуры, что приводит к дополнительным 5 затратам времени (до 24 часов). Остаток димера этиленимина необходимо дополнительно вторично нейтрализовать 2%-ным раствором тиосульфата натрия с использованием раствора HCI Большие требования 10 предъявляются по самой обработке вирусной суспензии, включающей экстрагирование, обработку хлороформом с жесткими требованиями по содержанию белка после очистки - не более 0,25 г %, т е. необходимо 15 проведение анализа по определению содержания белка. Продолжительность инактивации составляет 24 часа при периодическом помешивании, после инактивации снова необходимо добавление раствора тиосульфата 20 натрия, а после нейтрализации необходимо измерять рН суспензии и выравнивать ее до значения 7,5-7,6 раствором HCI В конечном результате ингибиция вирусов частичная, снижение титров вируса на 1,56-1,70 1д 25 БОЕ/мл Таким образом, предложенное вещество и процесс обработки им вируса трудоемкий, ведет к значительной затрате времени и реактивов. Задачей изобретения является изыска- 30 ние препаратов с более широким спектром противовирусной активности на основе естественного сырья, упрощение технологического процесса, уменьшение затрат времени. Поставленная задача достигается ис- 35 пользование дпя ингибироваиия вирусов in vitro настойки женьшеня. Для этого используется растение женьшень - концентратор серебра, которое относится к числу сапонисодержащих растений. При производстве 40 вакцин с целью повышения их иммуногенности применяют в качестве адьювантов сапонины. Кроме того, в его состав входят ферменты -диастаза и фанолаза. Женьшень характеризуется содержанием больших ко- 45 личеств веществ извлекаемых водой и другими растворителями и экстрагирующая способность увеличивается от чистого спирта к водно-спиртовым смесям низкой концентрации, достигая максимума при 50 использовании в качестве растворителя воды, при условии извлечения экстрактивных биологически активных веществ на холоду. Настойка женьшеня в качестве ингибитора вирусов снижает их инфекционную ак- 55 тивность в перевиваемых культурах клеток свинного происхождения: СПЭВ (свиной по'їки эмбриональная версенная линия) и ПТП (перевиваемая культура клеток тестикул поросят). Критерием антивирусного действия служит снижение титров вирусов в присутствии различных концентраций настойки женьшеня в сравнении с контрольными титрами вирусов, обработанных в тех же концентрациях изотоническим раствором натрия хлористого. Эффект женьшеня на организм в значительной степени зависит от дозы, которая используется. Также необходимо отметить, что препараты женьшеня стимулируют синтез ядерных рибонуклеиновых кислот и РНК-полимеразы, увеличивают синтез дезоксирибонуклеиновой кислоты и липидов, увеличивают АМФ и оксикокортикостероидов в различных органах организмов. Присутствующий в корнегинзеин оказывает регулирующее влияние на обмен углеводов. Для изучения антивирусной активности и спектра антиоирусного действия настойки женьшеня проведены исследования в эксперименте ин витро на перевиваемых культурах клеток свиного происхождения - СПЭВ и ПТП в отношении вирусов животных к двум различным семействам РНК-содержащих вирусов - коронавирусов и реовирусов. Моделью служили вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) и возбудитель ротавирусной болезни свиней (РВБС). Оба антигена используются при производстве живых вакцин против вирусных гастроэнтеритов свиней. Оба вируса адаптированы к системам перевиваемых культур клеток свиного происхождения - СПЭВ и ПТП, Изобретение осуществляется следующим образом Женьшень получают культивированием на твердой среде калусной культуры корня женьшеня. Полученную массу снимают с поверхности среды и лиофилизируют с последующим использованием ее для приготовления настойки. Для получения экстракта женьшеня навеску его корня весом 15,0 г измельчают, заливают 0 85% изотоническим стерильным раствором натрия хлористого, экстрагируют в течение 72 часов в холодильнике при температуре +4°С, а затем стерилизуют путем нагревания на водяной бане при температуре 75± 2°С в течение 60 минут. Используемые перевиваемые культуры клеток свиного происхождения выращивают в ростовой среде, содержащей смесь сред 199 (30%) и пятипроцентного гемогидролизата лактальбумина (60%) с добавлением инактивированной (при 56°С в течение 60 мин) сыворотки крупного ро/этого скота (10%) и раствора бикарбоната натрия для установления рН 7,2-7,4, а также антибиоти 20500 ков - бензилпенициллин натриевой соли 100 Ед/см3, стрептомицина сульфата 100 мг/см . Для получения клеточной суспензии мо- 5 нослой культуры клеток снимают с культуралыюй посуды растворами 0,3% раствором трипсина и 0,02% раствора версена (1:1). Полученную суспензию клеток разводят ростовой средой до конечной кон- 10 центрации 200,000 клеток/см и выращивают в пробирках либо во флакончиках. Для подсчета количества клеток к 0,2 мл суспензии добавляют 0,8 мп 0,5%-ного водного раствора трипанового синего и тща- 15 тельно перемешивают. Через 5 минут окрашенной взвесью клеток заполняют счетную камеру Горяева. Трипановый синий окрашиваеттолько мертвые клетки. Подсчет ведут только неокрашенных клеток при ма- 20 лом увеличении микроскопа (окуляр 7, объектив 20) в двух и более сетках по всей их площади. Число клеток в 1 мл суспензии определяют по формуле 25 а • п -1000 у = 0,9 где X - число клеток в 1 мл суспензии; а - среднее число клеток в одной сетке; п - кратность разведения концентриро- 30 ванной клеточной суспензии; 1000 - число кубических миллиметров в 1 см 3 ; 0,9 - объем сетки Горяева в кубических миллиметрах. 35 Пробирки с клетками помещают в лотки под углом 5°, пробками вверх. Лотки с матрасами и пробирками помещают в горизонтальном положении. Культивирование клеток производят при +37°С в стационар- 40 ных условиях. Через сутки после посева клеток в целях поддержания дальнейшего роста клеток производят смену ростовой среды и культивируют далее при тех же условиях до сформирования полного клеточного моно- 45 слоя. Подготовка вирусного сырья для исследований производится следующим образом: готовят расплодку вируса в той же культуре клеток, в какой проводят исследования. Для 50 этого из флаконов со сформированным монослоем клеток сливают ростовую среду и инфицируют культуру клеток вируссодержащей жидкостью, равномерно распределяя ее по клеточному монослою. Затем оставля- 55 ют для адсорбции на 1 час при комнатной температуре, после чего вируссодержащий материал сливают, а к клеточному монослою прибавляют поддерживающую среду и инкубируют при +37°С до проявления цитопати ческого действия вируса (ЦПД). При поражении клеточного монослоя вирусом на 5075% флаконы с инфицированным монослоем подвергают трехкратному замораживанию-оттаиванию для дезинтеграции клеток и полному выходу вируса в поддерживающую среду. После этого проводят центрифугирование при 5000 об/ЗО мин для полного осаждения разрушенных частей клеток. Надосадочную жидкость отбирают в стерильных условиях, определяют титр вируса любым из известных методов титрования, расфасовывают по флакончикам приблизительно в количестве 5 мл и замораживают для проведения дальнейших исследований. Используемые вирусы: 1. Референтный штамм вируса ТГС "Пурдью-115", адаптирован к культуре клеток СПЭВ на уровне 38 пассажа. 2. Вакцинный штамм "К" ротавирусной болезни свиней, адаптированный к культуре клеток ПТП, использован на уровне 70 пассажа. Проведение всех работ происходило в условиях строжайшей асептики. Монослой культуры клеток выращивали в витаминных плоских флакончиках, емкостью 50 см . Для сформирования монослоя во флаконы заливают по 7 мл клеточной суспензии с количеством клеток 200 000 о одном миллилитре. Флаконы помещали одной большой плоской стороной на ровную горизонтальную поверхность и инкубировали в термостатах при +37°С. Формирование монослоя контролировали ежедневно под световым микроскопом. Клеточный монослой формировался полностью обычно на вторые сутки после посева и был пригоден для выполнения вирусологических работ. Готовую настойку женьшеня прибавляли к суспензии культурального вируса в концентрациях от 0,01 см - 5,0 см , хорошо встряхивали, после чего сразу наносили, равномерно распределяя эту смесь на отмытый раствором Хенкса сформированный монослой клеток для адсорбции. Адсорбция длилась один час в темноте при комнатной температуре (опытные образцы). После этого инфицированную культуру клеток покрывали поддерживающей средой гемогидролизатом 5% с рН 6,5-7,0 и культивировали дальше в термостате при +37°С параллельно с интактными контролями и контролем, в монослой которого вносили то же количество настойки женьшеня для контакта на то же время, что и опытные образцы, после чего добавляли ту же поддерживающую среду. Результаты учитывали под световым микроскопом начиная с 20500 12 часов после инфицирования. По степени и характеру развития цитопатического действия вируса на монослой клеток, оценивали в процентном отношении повреждение культуры клеток, а также время развития Читопэтического действия вируса, как это обычно производится при всех вирусологических исследованиях. Характер ЦПД при воздействии изучаемых разных концентраций настойки женьшеня на вирус не изменился и скорость развития повреждения монослоя клеток вируса не зависела от времени проявления (например, 100%-ное повреждение монослоя клеток могло произойти через 41 час, в то же время через 48 часов могла возникнуть дегенерация 25% монослоя культуры клеток) (таблица). Корреляцию между возрастанием концентраций настойки женьшеня и более быстрой или более медленной дегенерации клеточного моиоспоя под воздействием вируса, обработанного этой настойкой не была обнаружена. Однако имелись изменения инфекционной активности вируса, обработанного указанными концентрациями настойки женьшеня по сравнению с вирусом, не обработанным этой настойкой (контроль). Оказалось, что настойки женьшеня способствовали снижению вирусной активности (см. график). П р и м е р і . В экспериментах с вирусом ТГС при определении его инфекционной активности без и с обработкой настойки женьшеня применяли титрование методом предельных разведений. При этом все параметры опыта выдерживались одинаковые в контроле и опыте за исключением концентраций настойки женьшеня. Культура клеток для изучения вируса ТГС-СПЭВ (к которой вирус адаптирован). Был определен интервал значений, в которых проведение иссле 8 дований с поставленной целью было возможным. Им оказалась обработка вирусной суспензии настойкой женьшеня в концентрациях от 0.09-3,0 см . На культуре клеток 5 СПЭВ концентрации настойки женьшеня выше 2,0-5,0 см оказались токсичными для культуры клеток. Титр контрольного вируса "Пурдыо115" составил 7,61 ±0.043 !д ТЦД 50 /см . Под 10 влиянием настойки женьшеня при ее концентрациях, например, 0,3; 0,7; 1,0 см титр вируса снижался на 2,99; 3,31; 2,62 Ig ТЦД 50 /см 3 , т.е. значительно (Р>0,005). 15 П р и м е р.2. Культуру клеток ПТП инфицировали вирусом ротавирусной болезни свиней. При инфицировании культуры клеток с 20 добавлением настойки женьшеня 0.6 см титр вируса снижался на 1,0 Ід ТЦД 50 /см ; 2,0 см 3 и 3,0 см 3 на 1,1 Ід ТЦД 50 /см 3 соответственно по сравнению с необработанным контролем. 25 Концентрации настойки 3.0-5,0 см были токсичными для культуры ПТП. Таким образом, при осуществлении изобретения, настойка женьшеня снижает инфекционную 30 активность вирусов ТГС и РВБС при культивировании ин витро в культурах клеток СПЭВ и ПТП от 1,1-3,31 Ig ТЦД 5О /см 3 , безопасна в обращении за счет применения естественного сырья, обладает широким 35 спектром действия, приводит к сокращению времени и упрощению технологического процесса за счет уменьшения и продолжительности воздействия заявляемого ингибитора (1 час по сравнению с прототипом 40 6,6-24 часовой обработки), не требует дополнительной его обработки. Проявление цитопатического действия вирусов при культивировании их с настойкой женьшеня Концентрация настойки Токсичность женьшеня (в 3 настойки ™ см женьшеня для культуры кле Вирус ток 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,1 0,2 0.3 0,4 0,5 0.6 0.7 0,8 0,9 1.0 1.5 2,0 2,5 3,0 3,55,0 Не токе. -"-"-"-"-"_•'_ -"_ _'•_ • " .'• • . - " - " - " - " - " - " - " Токсична -"-"."-" Культура клеток ПТП Культура клеток СПЭВ тгс шт. "Пурдью115" Поражение Время разви- Токсичность клеточного мотия ЦПД настойки женьшеня для нослоя (в/х %) (час/х) культуры клеток 62,5 100* 100 100 75 75 100 100 100 25 100 100 25 100 100 100 100 100 І00 100 _ — 48 41 46,5 45 Не токе. 48 -'• 48 48 45 45 48 48 41 48 ' 48 43 43 41 45 48 48 — -•' к -" - " Вирус Ротааирус свиней шт. 'К" 100 100 50 25 100 50 50 100 25 75 * - " - " - " -•• _"11 _•' -"-" -"-"_"_ Токсичн. со Время развиПоражение клеточного мотия ЦПД (час/х) нослоя (в/х %) 75 75 50 50 75 87 5 50 100 50 50 100 100 100 18 24 24 24 21 24 24 21 24 24 24 го о ел о о 24 24 24 24 21 24 18 24 22 24 24 24 о | ! 20500 I* о Q of v0) щ fll з: si > J: о Ф cr to о; з: з Л he s Ч Q s O4 Упорядник Замовлення 4387 Техред М.Келемеш Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101 УКРАЇНА (19) \«?ГЛ (II) (13) (si)5 А 61 К 35/00 ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по гуті на підставі Постанови Верховної Ради України №3769 XII від 23X11 1993 р Публікується в редакції заявника (54) СПОСІБ ІНАКТИВАЦІЇ ВІРУСІВ 1 (21)95052507 (22) 25 05.95 (24)15 07.97 (46)27 02.98. Бюл. Ns 1 {47)15.07.97 (56)1. Гембицкий П.А и др. Синтез олигомеров етилениминов -Химическая промышленность, 1972, №7, с 30. 2. Авторское свидетельство СССР № 1504844 А 1. кл А 61 К 35/48. 3. Авторское свидетельство СССР № 594771.кл А'61 К 39/12. С 12 N 7/04, 07 05.73. (72) Клестова ЗІмаїда Сергіївна, Собко Анатолій Іванович, Рижєнко Василь Петрович (73) Інститут ветеринарної медицини Української академії аграрних наук (57) Способ инактивации вирусов, включающий культивирование клеток, приготовление вирусной суспензии, инактивацию вирусов ин витро, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что инактивацию вирусов ин витро выполняют настойкой женьшеня. С Изобретение относится к области ветеринарной медицины, вирусологии, биотехнологии и может быть использовано при изготовлении противовирусных препаратов. Известны способы инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов путем их обработки химическими реагентами, например N-ацетилэтиленимином, N-этилотиленимином [1]. Известно, что N-этилэтиленимин в концентрации 0,05% инактивирует вирус ящура типа О в культуральной жидкости в течение 11 ч при 37°С и 52 ч при 22°С. Однако этот способ является крайне нестабильным, труднодоступным и слабым инактивирующим средством. Известны методы замораживания-размораживания инфицированной культуры клеток с последующими прогреваниями, нейтрализацией, лиофилизацией, удалением частиц-агломератов, осаждением спиртом [2] Однако этот процесс трудоемкий, не достигается положительный результате целым рядом вирусов. В качестве прототипа выбрано средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов [3]. Используют димер этиленимин, который получают при полимеризации этиленимима Однако он имеет сравнительно высокую токсичность в безводном состоянии, требует при работе растворения в дистиллированной воде, свободной от СО2, хранения в герметически закрытой таре. Кроме этого, его нужно 20500 нейтрализовать, для чего используют тиосульфат натрия. Для инактивации вируса необходимо также применение фосфатного буферного раствора определенной рН и температуры, что приводит к дополнительным 5 затратам времени (до 24 часов} Остаток димера этиленимина необходимо дополнительно вторично нейтрализовать 2%-ным раствором тиосульфата натрия с использованием раствора HCI Большие требования 10 предъявляются по самой обработке вирусной суспензии, включающей экстрагирование, обработку хлороформом с жесткими требованиями по содержанию белка после очистки - не более 0,25 г %, т.е необходимо 15 проведение анализа по определению содержания белка. Продолжительность инактивации составляет 24 часа при периодическом помешивании, после инактивации снова необходимо добавление раствора тиосульфата 20 натрия, а после нейтрализации необходимо измерят ь рН суспензии и выравнивать ее до значения 7,5-7,6 раствором HCI. В конечном результате ингибиция вирусов частичная, снижение титров вируса на 1,56-1,70 1д 25 БОЕ/мл. Таким образом, предложенное вещество и процесс обработки им вируса трудоемкий, ведет к значительной затрате времени и реактивов. Задачей изобретения является изыска- 30 ні/іе препаратов с более широким спектром противовирусной активности на основе естественного сырья, упрощение технологического процесса, уменьшение затрат времени. Поставленная задача достигается ис- 35 пользование для ингибирования вирусов in vitro настойки женьшеня. Для этого используется растение женьшень - концентратор серебра, которое относится к числу сапонисодержащих растений. При производстве 40 вакцин с целью повышения их иммуногенности применяют в качестве адьювантов сапонины, Кроме того, в его состав входят ферменты - диастаза и фанолаза. Женьшень характеризуется содержанием больших ко- 45 личеств веществ, извлекаемых водой и другими растворителями и экстрагирующая способность увеличивается от чистого спирта к водно-спиртовым смесям низкой концентрации, достигая максимума при 50 использовании в качестве растворителя воды, при условии извлечения экстрактивных биологически активных веществ на холоду. Настойка женьшеня в качестве ингибитора вирусов снижает их инфекционную ак- 55 тивность в перевиваемых культурах клеток свинного происхождения: СПЭВ (свиной поч'ки эмбриональная версенная линия) и ПТП (перевиваемая культура клеток тестикул поросят). Критерием антивирусного действия служит снижение титров вирусов в присутствии различных концентраций настойки женьшеня в сравнении с контрольными титрами вирусов, обработанных в тех же концентрациях изотоническим раствором натрия хлористого. Эффект женьшеня на организм в значительной степени зависит от дозы, которая используется. Также необходимо отметить, что препараты женьшеня стимулируют синтез ядерных рибонуклеиновых кислот и РНК-полимеразы, увеличивают синтез дезоксирибонуклеиновой кислоты и липидов, увеличивают АМФ и оксикокортикостероидов в различных органах организмов. Присутствующий в корне гинзеин оказывает регулирующее влияние на обмен углеводов. Для изучения антивирусной активности и спектра антивирусного действия настойки женьшеня проведены исследования в эксперименте им витро на перевиваемых культурах клеток свиного происхождения ~ СПЭВ и ПТП о отношении вирусов животных к двум различным семействам РНК-содержащмх вирусов - коронавирусов и реовирусов Моделью служили вирус трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) и возбудитель ротавирусной болезни свиней (РВБС). Оба антигена используются при производстве живых вакцин против вирусных гастроэнтеритов свиней. Оба вируса адаптированы к системам перевиваемых культур клеток свиного происхождения - СПЭВ и ПТП. Изобретение осуществляется следующим образом. Женьшень получают культивированием ** на твердой среде калусной культуры корня женьшеня. Полученную массу снимают с поверхности среды и лиофилизиругот с последующим использованием ее для приготовления настойки. Для получения экстракта женьшеня навеску его корня весом 15,0 г измельчают, заливают 0,85% изотоническим стерильным раствором натрия хлористого, экстрагируют в течение 72 часов в холодильнике при температуре +4°С, а затем стерилизуют путем нагревания на водяной бане при температуре 75± 2°С в течение 60 минут. Используемые перевиваемые культуры клеток свиного происхождения выращивают в ростовой среде, содержащей смесь сред 199 (30%) и пятипроцентного гемогидролизата лактальбумина (60%) с добавлением инактивированной (при 56°С в течение 60 мин) сыворотки крупного рогатого скота (10%) и раствора бикарбоната натрия для установления рН 1,2-7А, а также антибпоти 20500 ков - бенэиппеиициллин натриевой соли 100 Ед/см*. стрептомицина сульфата 100 мг/см . Для получения клеточной суспензии мо- 5 нослой культуры клеток снимают с культуралыюй посуды растворами 0,3% раствором трипсина и 0,02% раствора версена (1:1). Полученную суспензию клеток разводят ростовой средой до конечной кон- 10 центрации 200.000 клеток/см и выращивают в пробирках либо во флакончиках. Для подсчета количества клеток к 0,2 мл суспензии добавляют 0,8 м і 0.5%-ного водного раствора трипанового синего и тща- 15 тельно перемешивают. Через 5 минут окрашенной взвесью клеток заполняют счетную камеру Горяева. Трипановый синий окрашивает только мертвые клетки. Подсчет ведут только неокрашенных клеток при ма- 20 лом увеличении микроскопа (окуляр 7, объектив 20) в двух и более сетках по всей их площади. ' Число клеток в 1 мл суспензии определяют по формуле 25 v - a • п • 1000 * 0,9 где X - число клеток в 1 мл суспензии: а - среднее число клеток в одной сетке; п - кратность разведения концентриро- 30 ванной клеточной суспензии: 1000 - число кубических миллиметров в 1 см 3 ; 0,9 - объем сетки Горяева в кубических миллиметрах. 35 Пробирки с клетками помещают в лотки под углом 5°, пробками вверх. Лотки с матрасами и пробирками помещают в горизонтальном положении. Культивирование клеток производят при +37°С в стационар- 40 ных условиях. Через сутки после посева клеток в целях поддержания дальнейшего роста клеток производят смену ростовой среды и культивируют далее при тех же условиях до сформирования полного клеточного моно- 45 слоя. Подготовка вирусного сырья для исследований производится следующим образом: готовят расплодку вируса в той же культуре клеток, в какой проводят исследования. Для 50 этого из флаконов со сформированным монослоем клеток сливают ростовую среду и инфицируют культуру клеток вируссодержащей жидкостью, равномерно распределяя ее по клеточному монослою Затем оставля- 55 ют для адсорбции на 1 час при комнатной температуре, после чего вируссодержащий материал сливают, а к клеточному монослою прибавляют поддерживающую среду и инкубируют при +37°С до проявления цитопати ческого действия вируса (ЦПД). При поражении клеточного монослоя вирусом на 5075% флаконы с инфицирован ным монослоем подвергают трехкратному замораживанию-оттаиванию для дезинтеграции клеток и полному выходу вируса п поддерживающую среду. После этого проводят центрифугирование при 5000 об/ЗО мин для полного осаждения разрушенных частей клеток. Надосадочную жидкость отбирают в стерильных условиях, определяют титр вируса любым из известных методов титрования, расфасовывают по флакончикам приблизительно в количестве 5 мл и замораживают для проведения дальнейших исследований. Используемые вирусы: 1. Референтный штамм вируса ТГС "Пурдью')15", адаптирован к культуре клеток СПЭВ на уровне 38 пассажа. 2. Вакцинный штамм "К" ротавирусной болезни свиней, адаптированный к культуре клеток ПТП, использован на уровне 70 пассажа Проведение всех работ происходило в условиях строжайшей асептики. Монослой культуры клеток выращивали в витаминных плоских флакончиках, емкостью 50 см Для сформирования монослоя во флаконы заливают по 7 мл клеточной суспензии с количеством клеток 200 000 в одном миллилитре. Флаконы помещали одной большой плоской стороной на ровную горизонтальную поверхность и инкубировали в термостатах при +37°С. Формирование монослоя контролировали ежедневно под световым микроскопом. Клеточный монослой формировался полностью обычно на вторые сутки после посева и был пригоден для выполнения вирусологических работ. Готовую настойку женьшеня прибавляли к суспензии культурального вируса в концентрациях от 0,01 см 3 - 5,0 см , хорошо встряхивали, после чего сразу наносили, равномерно распределяя эту смесь на отмытый раствором Хенкса сформированный монослой клеток для адсорбции. Адсорбция длилась один час в темноте при комнатной температуре (опытные образцы). После этого инфицированную культуру клеток покрывали поддерживающей средой гемогидролизатом 5% с рН 6,5-7,0 и культивировали дальше в термостате при +37°С параллельно с интактными контролями и контролем, в монослой которого вносили то же количество настойки женьшеня для контакта на то же время, что и опытные образцы, после чего добавляли ту же поддерживающую среду. Результаты учитывали под световым микроскопом начиная с 20500 12 часов после инфицирования. По степени и характеру развития цитопатического действия вируса на монослой клеток, оценивали в процентном отношении повреждение культуры клеток, а также время развития 5 цитопатического действия вируса, как это обычно производится при всех вирусологических исследованиях. Характер ЦПД при воздействии изучаемых разных концентраций настойки жень- 10 шеня на вирус не изменился и скорость развития повреждения монослоя клеток вируса не зависела от времени проявления (например, 100%-ное повреждение монослоя клеток могло произойти через 41 час, в 15 то же время через 48 часов могла возникнуть дегенерация 25% монослоя культуры клеток) (таблица). Корреляцию между возрастанием концентраций настойки женьшеня и более быстрой или более медленной дегене- 20 рации клеточного монослоя под воздействием вируса, обработанного этой настойкой не была обнаружена. Однако имелись изменения инфекционной активности вируса, обработанного указанными концентрациями 25 настойки женьшеня по сравнению с вирусом, не обработанным этой настойкой (контроль). Оказалось, что настойки женьшеня способствовали снижению вирусной активности (см. график). 30 П р и м е р і . В экспериментах с вирусом ТГС при определении его инфекционной активности без и с обработкой настойки женьшеня применяли титрование методом предельных разведений. При этом все пара- 35 метры опыта выдерживались одинаковые в контроле и опыте за исключением концентраций настойки женьшеня. Культура клеток для изучения вируса ТГС-СПЭВ (к которой вирус адаптирован). Был определен интер- 40 вал значений, в которых проведение иссле 8 дований с поставленной целью было возможным. Им оказалась обработка вирусной суспензии настойкой женьшеня в концентрациях от 0,09-3,0 см 3 . На культуре клеток СПЭВ концентрации настойки женьшеня выше 2,0-5,0 см" оказались токсичными для культуры клеток. Титр контрольного вируса "Пурдьга115" составил 7,61 ±0.043 Ig ТЦД 5 о / с м - П °Д влиянием настойки женьшеня при ее концентрациях, например, 0,3; 0,7: 1,0 см 3 титр вируса снижался на 2,99; 3,31; 2,62 Ig ТЦД 50 /см 3 , т.е. значительно (Р>0,005). П р и м е р 2 . Культуру клеток ПТП инфицировали вирусом ротавирусной болезни свиней. При инфицировании культуры клеток с добавлением настойки женьшеня 0,6 см титр вируса снижался на 1.0 Ig ТЦД 50 /см ; 2,0 см 3 и 3,0 см 3 на 1,1 Ig ТЦД 50 /см 3 соответственно по сравнению с необработанным контролем. Концентрации настойки 3,0-5,0 см были токсичными для культуры ПТП. Таким образом, при осуществлении изобретения, настойка женьшеня снижает инфекционную активность вирусов ТГС и РВБС при культивировании ин витро в культурах клеток СПЭВ и ПТП от 1,1-3,31 Ig ТЦЦ 50 /см 3 , безопасна в обращении за счет применения естественного сырья, обладает широким спектром действия, приводит к сокращению времени и упрощению технологического процесса за счет уменьшения и продолжительности воздействия заявляемого ингибитора (1 час по сравнению с прототипом 6,6-24 часовой обработки), не требует дополнительной его обработки. Проявление цитопатического действия вирусов при культивировании их с настойкой женьшеня Концентрация настойки женьшеня (в см 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,07 0,08 0,09 0,1 0,2 0,3 0,4 Культура клеток СПЭВ Культура клеток ПТП Токсичность настойки женьшеня для культуры клеток Вирус Вирус Не токе. ТГС шт. "Пурдью115" -"-"-"-"_"_ -"-"_ -" " " " 0,6 0,7 0,8 0,9 1,0 1,5 2,0 2.5 3,0 3,55,0 " " " " " • Токсична -"-"-"-" 48 41 100 100 100 25 100 100 25 0,5 62,5 100' 100 100 75 46,5 45 48 43 48 45 45 48 48 41 48 100 100 100 100 100 100 — 43 48 41 45 48 48 75 Поражение Время разеития ЦПД (час/х) нослоя (в/х %) КЛеТОЧНОГО МО" ГОК • Поражение Бремя разви- Токсичность клеточного мотия ЦПД настойки нослоя (в/х %) женьшеня для (час/х) культуры кле | 100 48 Не токе. -"_"-"-"_ -"-". -" ."_ -"_". -"-"_"_ -"-"-"-"Токсин н. -" Ротавирус СЕИНЄЙ ШТ. ' К " 100 100 50 25 100 50 50 100 25 75 75 75 50 50 75 87 5 50 100 50 50 100 100 100 18 24 24 24 21 24 24 21 24 24 24 24 24 24 24 21 24 18 24 22 24 24 24 to о СП о о 20500 ю о о п. (Ц .0 о я =-. X о ф X а: w а> з 'Л о о X з: Упорядник Замовлення 4387 Техред М.Келемеш Коректор Л.Лукач Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101 (19) (13) (П) (51)6 С 12 N 15/OG ОПИС ДО ПАТЕНТУ ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підставі Постанови Верховної Ради України Г*3769-ХІІ від 23 XII 1993 р Публікується в редакції заявника (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ЕКСПРЕС-МОДЕЛІ ПО ВИПРОБОВУВАННЮ АИТИМУТАГЕННИХ ПРЕПАРАТІВ ПРИ ВІРУСНИХ ПОШКОДЖЕННЯХ ГЕНОМІВ КЛІТИН СВИНЕЙ t (21)95073164 (22)06.07.95 (24) 15.07.97 • (46)27.02.98. Бюл.№1 (47) 15.07.97 (72) Клестова ЗІнаТда Сергіївна, Собко Анатолій Іванович, Риженко Василь Петрович (73) Інститут ветеринарної медицини (57) Способ получения экспресс-модели по испытанию антимутагенных препаратов при вирусных повреждениях геномов клеток свиней, включающий культивирование клеток, инкубирование с мутагеном, повреждение хромосомного аппарата клеток, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что проводят культивирование перевиваемых клеток свиней, причем для повреждения хромосомного аппарата клеток используют штаммы коронавируса трансмиссивного гастроэнтерита и ротавируса свиней. Изобретение относится к области ветеринарной медицины, вирусологии, биотехнологии и может быть использовано при оценке антимутагенных веществ. Известны методы повреждения структур наследственности факторами физической, химической и биологической природы, которые относятся к мощным мутагенам: ионизирующие излучения, ультрафиолетовый свет, фотодинамическое действие органических красителей, алкилирующие соединения, гидроксиламин и гидразин, азотистая кислота, аналоги оснований, производные актидина, некоторые антибиотики (даунамицин) и другие Ионизирующие излучения, например рентгеновские лучи, индуцируют изменения, касающиеся в первую очередь однонитевых разрывов ДНК, затем появление дицентриков, парных концевых делений, хроматмдных перестроек, симметрических транслокаций хромосомного типа, колец [1]. Ионизирующие излучения индуцируют мутации рандомизированно как по отдельным хромосомам, так и по их длине. Известно, что количество перестроек хромосомного типа при ионизирующем облучении зависит от многих факторов, фазы клеточного цикла, особенности и состояния объекта исследований, длительности, дозы и мощности облучения, типа излучения, температуры и т.д. Недостатками при индуцировании мутаций с помощью ионизирующих излучений является необходимость наличия дорогостоящего оборудования, выполнение таких работ связано с вредными условиями труда, возможно облучение персонала, ионизирующие облучения вызывают несколько иной спектр хромосомных аберраций, нежели при вирусном мутагенезе, так, что данные, полученные при облучениях нельзя полностью экстраполировать на процессы, происходящие при повреждении хромосом вирусами. 20529 Известно, что химические мутагены, такие как алкилирующие соединения вызывают хромосомные и хроматидные перестройки [2]. Химические мутагены чаще повреждают гетерохроматиновые участки 5 хромосом. Однако строго обоснованных закономерностей пока не выявлено. Недостатком метода индукции мутаций химическими соединениями является неопределенность судьбы мутагена, введенного 10 в клетку, поскольку как в клетке, так и в водном растворе они подвергаются гидролизу. Продукты гидролиза могут быть не мутагенны, но в то же время токсичными для клеток, что приводит их к гибели. Гибель 15 отравленных клеток снижает число мутаций после обработки высокой концентрацией мутагена. Важным моментом при изучении химического мутагенеза является учет реакцион- 20 ных способностей каждого из конкретных мутагенов, а количество перестроек зависит от многих факторов: концентрации мутагена, величину его рН и рН обьекта, продолжительность и доза мутагена, состояние 25 объекта, воздействия модифицирующих факторов и т д. Известно, что выбор объекта исследований и учет его физиологического состояния играет большую роль. 30 Проверку мутагенных свойств химических веществ проводили на растениях, дрозофиле, лабораторных животных (мышах). Наиболее широко используемыми объектами для изучения хромосомных аберраций, 35 возникших в результате действия факторов внешней среды ин витро являются культуры лимфоцитов периферической крови человека или эмбриональных фибробластов, иногда клеток костного мозга. 40 Однако при проведении исследований по концентрационным и экспозиционным зависимостям на животных (мышах) требуется большое их количество, а также большое число клеток требуется анализировать. 45 Одним из недостатков при использовании метода учета хромосомных аберраций в костном мозге является выбор линии мышей, из-за генотипических различий разных линий при воздействии химических мутагенов. 50 Метаболизм химических веществ в организме животных специфичен из-за генетического полиморфизма популяций по ферментным и белковым системам. Метод изучения мутагенности веществ с 55 использованием дрозофилы основан на учете рецессивных летальных мутаций, возникающих в зародышевых клетках. Однако, при воздействии некоторых химических соединений (например, иприт) на спермии дрозофилы мутации возникали только в отцовских хромосомах. Недостатками опытов, проведенных на поколениях дрозофилы являются значительные затраты времени (экспозиции мутагена 2-3 суток, затем время на получение потомства) по сравнению с получением ответа на культурах клеток. Используя насекомых и животных возможны погрешности экспериментов, выражающиеся в неправильном объеме выборки, стандартизации дозировки факторов и т.д., существование межиндивидуальных различий лабораторных животных по чувствительности к мутагенам. В изучении мутагенности факторов в условиях культуры лимфоцитов является возможность изменений метаболизма соединений и проницаемости клеточных мембран под влиянием фитогемагглютинина (который обязательно вводят в качестве мутагена по методике культивирования). Известно, что при проверке антимутагенного средства в качестве мутагенного агента используют сточные воды химического предприятия, вводимые беспородным мышам перорально [3] Недостатком этого метода является то, что животные генетически разнообразны, не указан объем выборки животных. Наиболее близким к предлагаемому способу получения экспресс-модели по испытанию антимутагенных препаратов при вирусных повреждениях геномов клеток свиней является использование штаммов вирусов ТГС и РВБС [4] Однако, не все штаммы вызывают мутацию хромосом, что сказывается на точности результатов сложности и длительности технологического процесса по созданию мутагенной эксп ресс-мо дел и. Использование соматических клеток свиней (лимфоцитов) связано с применением дорогостоящих и редких реактивов и у животных-доноров существует межиндивидуальные (генетические) различия по ответу на введение мутагена (существуют различные генетически детерминированные репаративные системы), что приводит к различной элиминации повреждений из организма, а также изменяет метаболизм клеток и их мембран под влиянием фитогемагглютанина, а также усложняет технологию получения экспресс-модели. Задачей изобретения является поиск семейств вирусов животных, индуцирующих мутации хромосом их клеток и выявление этих мутаций для проведения поисковых работ по антимутагенным веществам, упрощение и сокращение технологического процесса получения экспресс-модели. 20529 Поставленная задача решается тем, что в способе получения экспресс-модели по испытанию антимутагенных препаратов при вирусных повреждениях геномов клеток свиней, включающем культивирование кле- 5 ток свиней, инкубирование с мутагеном, повреждение хромосомного аппарата, культивирование проводят перевиваемыми клетками свиней, а для повреждения хромосомногоаппарата используют штаммы коро- 10 нааируса трансмиссивного гастроэнтерита и ротавируса свиней. Предложенный способ осуществляется следующим образом. Выращивают перевиваемую культуру клеток почек поросенка 15 СПЭВ в 50 см витаминных флакончиках. Для этого необходимо применять в качестве ростовой среду, состоящую из смеси следующего состава: среда 199 - 30% и пятипроцентного гемагидролизата лактальбумина - 20 60% с добавлением инактивированной (при 56°С в течение 60 мин) сыворотки КРС- 10% и раствора бикарбоната натрия для установления рН 7,2-7',4. а также антибиотиков бензилпенициллина натриевой соли - 25 100 ЕД/см 3 , стрептомицина сульфата 100 мг/см 3 . Культуру клеток выращивают при +37°С до образования монослоя, который обычно сформировывался на 2-е сутки (при посев- 30 ной дозе 200 тыс.клеток/мл), а митотический индекс культуры клеток составил 10-16%. Предварительными исследованиями установили, что культуры клеток СПЭВ пригодна для проведения работ по изучению мутаген- 35 ного действия вирусов на генетическую структуру клеток (имеет довольно низкий процент уровня спонтанных аберраций хромосом - 5,14%, наибольшее количество клеток представлено клетками с модальным 40 классом, содержащим 38 хромосом, что соответствует диплоидному набору хромосом соматических клеток свиней) Для роста культуры клеток ПТП (перевиваемая линия клеток тестикул поросят) при- 45 меняли смеси сред - среда 199 (45%) и гемогидролизат лактальбумина 5% (45%) с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота и также антибиотиков, как и для СПЭВ. 50 Культура клеток ПТП также пригодна для проведения работ по вирусному мутагенезу, так как имеет низкий уровень спонтанных аберраций хромосом 9,8% (клеток с повреждениями), и большинство клеток 55 имеет модальный класс 38 хромосом, что соответствует диплоидному набору хромосом вида. Для осуществления способа с применением культуры клеток СПЭВ используют следующие штаммы коронавируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней: референтный штамм "Пурдью-115", эпизоотический штамм "П1439/81". При использовании культуры клеток ПТП применяют штамм коронавируса свиней "П1439/81" и вакцинный штамм "К" ротавируса свиней. Все штаммы до применения адаптируют в соответствующих культурах клеток. Подготовку вирусного сырья для осуществления способа проводят следующим образом готовят расплодку вируса в той же культуре клеток, в какой проводят исследования. Для этого из флаконов со сформированным моиослоем клеток сливают ростовую среду и инфицируют культуру клеток вируссодержащей жидкостью, равномерно распределяя ее по клеточному монослою. Затем оставляют для адсорбции на 1 час при комнатной температуре, после чего вируссодержащий материал сливают, а к клеточному монослою прибавляют поддерживающую среду и инкубируют при +37°С до проявления цитопатического действия вируса (ЦПД), При поражении клеточного монослоя вирусом на 50-75% флаконы с инфицированным монослоем подвергают трехкратному замораживанию-оттаиванию для дезинтеграции клеток и полному выходу вируса в поддерживающую среду. После этого проводят центрифугирование при 5000 об/ЗО мин для полного осаждения разрушенных частей клеток. Надосадочную жидкость отбирают в стерильных условиях, определяют титр вируса любым из известных методов титрования, расфасовывают по флакончикам приблизительно в количестве 5 мл и замораживают для проведения дальнейших исследований, Для получения метафазных пластинок хромосом указанных культур клеток за час до фиксации добавляли раствор колхицина в концентрации 0,25 мкг/см во флаконы с культурой клеток, емкостью 50 см . Фиксацию проводили через 72-74 часа от момента посева культуры клеток смесью этанол-ледяная уксусная кислота (3:1). Гипотоническую обработку клеток проводили 0,55% раствором КСІ в течение 20-30 минут при +37°С. Окраску метафазных пластинок хромосом осуществляли по методу Романовского-Гимза (5-10 мин). При использовании дифференциальной окраски с помощью метода использовали 0,25% раствор трипсина с экспозицией в 30 секунд, а затем окраска проводилась по Романовскому-Гимззвтечение 5-10 мин. П р и м е р а Сформированный клеточный монослой СПЭС инфицировали вирус 20529 8 содержащей суспензией коронавируса свиаберрациями хромосом (Р< 0,001) по сравненей штамма "Пурдью-115". Затем за час до нию с контролем и составляет 39,6% (что выше цифр в контроле почти в 8 раз). Из них окончания культивирования добавляли в - 2 2 % составляют хроматидные пробелы каждый флакон раствор колхицина в концентрации 0,25 мкг/см 3 и культирование 5 двойные и одиночные фрагменты, 10% -неравномерная конденсация хроматина) утолпродолжалось в прежнем режиме (при щение одного или обоих гомологических +37°С). После чего клеточный монослой отплеч хромосом), 4% - составляют дицентримывали раствором Хенкса или Эрла 3-5 раз. ки и 4% - поликлоиды, Клеток, содержащих Промывали подогретым до 37СС 0,2% раствором версена 1 раз. Вносили этот же рас- 10 набор хромосом меньше нормы, было 75%; а 8,33% имело число хромосом больше, чем твор в объеме 5 см во флаконы и 38. Этот штамм в 4,2% случаев вызывал инкубировали при 37°С в течение 10-20 мин, фрагментацию хромосом. покачивая 20-30 раз до момента, когда связь клеток с веществом подложки ослабевает и они отстают от стекла. Часть раствора 15 П р и м е р 2. Получение повреждений хромосом клеток с помощью ротавируса сливали, оставляя по 1 см во флаконе. В свиней. Применяемая культура клеток ПТП. оставшийся обьем жидкости быстро извлеИспользуемый штамм "К" ротавирусной бокали все клетки, имеющиеся во флаконе. лезни свиней. Клеточную взвесь осторожно собирали в центрифужные пробирки, куда быстро до- 20 Выращивание клеток, их инфицировабавляли предварительно подогретый до ние, получение метафазных пластинок хромосом, их окраска проведена, как указано и 37°С гипотонический раствор - 0,56% KCI, в примере № 1. В инфицированной культуре доводя им общий объем жидкости до 9-І 0 см . клеток уровень метафазных пластинок хроСуспензию клеток осторожно перемешивали с гипотоническим раствором, инкубиро- 25 мосом достоверно выше по сравнению с контролем (Р < 0.001). Получен широкий вали в течение 20-30 мин при 37°С. что спектр повреждений хромосом: парные и зависело от партии клеток и подбирали эмодиночные разрывы, "гепы", образование пирически. После гипотонической обработполиплоидов. Наибольший процент прихоки, суспензию клеток осаждали дится на клетки с одиночными и парными центрифугированием при 1000 об/мин в те- 30 разрывами хромосом с образованием фрагчение 10 мин. Надосадочную жидкость слиментов (26,1%). вали, оставляя около 0.5 см Положительный результат достигается гипотонического раствора над осадком, ковыбором перевиваемых культур клеток свиторый осторожно ресуспендировали до однородного состояния. Добавляли свеже- 35 ней СПЭВ и ПТП, так как мутагенная чувствительность этих клеток ин витро более приготовленный предварительно охлажденвысокая (культура клеток более однородная ный до минус 4°С фиксатор (8-10 см^, состосистема), чем у культур лимфоцитов или при ящий из ледяной уксусной кислоты и использовании свиней. метилового спирта (1:3). Клеточную взвесь При осуществлении заявляемого спосотщательно перемешивали в фиксаторе. Про- 40 ба не нужны животные-доноры крови, не цедуру смены фиксатора и осаждения кленужно вести отбор крови, достигается поток в прежнем режиме проводили трижды. вторяемость результата и эффективность На предварительно обезжиренные повреждения хромосом клеток свиней. предметные стекла, охлажденные и содерПрименение штаммов вируса ТГС "Пуржащиеся в бидистиллированной воде при 45 дью-115" и "П1439/81", а также штамма "К" 4°С наносили с высоты 15-20 см каплю клеротавируса свиней приводит к повреждеточной суспензии из капилляра пастеровнию хромосомного аппарата клеток. ской пипетки. Высушивали стекло на воздухе, и оценивали качество метафазных При осуществлении данного способа пластинок хромосом под микроскопом с ма- 50 происходит экономия затрат, расходуемых лым увеличением. Если клеток было много в на материалы: не нужно применение дорополе зрения, суспензию разбавляли фиксагостоящих реактивов - фитогемаглютинина тором, если мало - снова осаждали клетки (импортного производства), а также эконопутем центрифугирования с частотой вращения 1000 об/мин в течение 5 мин и переме- 55 мится культуральная среда, так как для выращивания указанных клеток подходят шивали в меньшем объеме фиксатора. После менее обогащенные среды, в состав которых высушивания препараты окрашивали. входит только 30% и 45% среды 199, также При анализе повреждений хромосом импортируемой и дорогой (т.к. на Украине штаммом "Пурдью-115" происходит достоона не производится), а выращивание лимверное повышение количества клеток с 9 20529 10 фоцитов производят на 100% среде 199 или зарубежном дорогом аналоге РМ1. телят (также дорогую и не производящую на Украине), а при применении указанных в способе культур клеток применяют отечестПри выращивании культуры лимфоцивенную сыворотку КРС, более дешевую и тов применяют эмбриональную сыворотку 5 производимую на Украине. Упорядник Замовлення 4389 Техред М.Келемеш Коректор М. Самборськэ Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Ґагаріна, 101 A (19) (5і)б G 10 С 3/14 ДЕРЖАВНЕ ЛАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підставі Постанови Верховної Ради України № 3769-ХІІ 8Ід 23 XII. 1993 р Публікується в редакції заявника (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ БРИКЕТІВ З НАФТОВОГО БІТУМУ, ЯКІ УПАКОВАНІ У ПОЛІМЕРНУ ТАРУ, І ПРИСТРІЙ ДЛЯ ЙОГО ЗДІЙСНЕННЯ 1 охлаждают, выбирают из ванны и штабелируют в неразрезанном виде. (21)97010215 (22) 21.01.97 (24)15 07.97 (46)27.02.98. Бюл. N* 1 (47) 15.07.97 (72) Голованов Олексій Олексійович, Аров Фелікс Миколайович, Шаповалов Олександр Михайлович, Соміков Анатолій Платонович, Літвиненко Миколай Григорович, Близниченко Сергій Константинович (73) Голованов Опексій Олексійович, Аров Фелікс Миколайович (57) 1. Способ получения брикетов из нефтяного битума, упакованных в полимерную тару, включающий заполнение сформированного рукава битумом и охлаждение рукава в погруженном в воду состоянии, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что перед заполнением битум охлаждают до аязкотекучего состояния, затаривают в рукав, предварительно погруженный в воду, с одновременным протягиванием и формованием брикета путем передавливания заполненного рукава, причем после формования брикетную ленту 2. Устройство для получения брикетов из нефтяного битума, упакованных в полимерную тару, содержащее непрерывный дозатор горячего битума, блок формирования пленочного рукава и заливки битума - в рукав, ванну для охлаждения водой, приспособления для притапливания и выгрузки рукава из ванны, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что устройство имеет буферную емкость с установленными внутри ее трубчатым теплообменником и мешалкой, соединенную на входе с битумопроводом через поплавковый дозатор, а на выходе с непрерывным дозатором, выполненным в виде шнекового питателя с теплообменником, приспособление для непрерывного протягивания и формования брикетов в виде двух беличьих колес, погруженных в воду, соединенных общей трансмиссией с притапливающим и выгружающим транспортерами, установленными в ванне. Изобретение относится к технологии затаривания и хранения тугоплавких нефтяных битумов и аналогичных ему материалов, упакованных в полимерную тару, расплавляющуюся при использовании. Устройстао предназначено для использования на нефтеперерабатывающих предприятиях в технологических схемах непрерывного действия. Известен способ заливки жидкого битума [Фрязинов В.В. и др. Транспортирование и хранение нефтяных битумов. Тематический обзор, 1981, с. 15] в вертикально расположенный мешок из полипропиленовой пленки, который по мере заполнения опускают в ванну с водой. Заполненный мешок заваривают и отпускают плыть вдоль ванны о ел 20527 с водой, где происходит охлаждение. Затем мешок вылавливают и укладывают на бетонную площадку для полного охлаждения. Полученные брикеты имеют только одну плоскую сторону, что затрудняет складиро- 5 вание и транспортировку. Этот способ предполагает наличие операций, которые очень сложно механизировать: раскрытие мешка перед заливкой, закрепление его вертикально под заливочным патрубком, заварку вер- 10 ха мешка после наполнения его битумом, вылавливание из ванны и раскладывание для доохлэждения. Известен способ затаривания битума [Патенты Украины №7274и №7275, кл. G 10 С 15 3/14] в полиэтиленовые лотки с ребрами жесткости и толщиной стенок до 1 мм, уложенные в ящики на конвейере, заполняемые водой. Битум охлаждают в трубчатом теплообменнике, предварительно снижая его вяз- 20 кость с помощью кавитационной обработки в статическом проточном суперкавитэционном аппарате и дополнительно введением разжижающих добавок: дизтоплива, керосина, бензина. Время охлаждения брикетов до 25 формоустойчивости составляет 6-Ю часов. Этот способ предполагает использование гидродинамической обработки с кавитацией, вызывающей в жидкости ударные волны с очень большим градиентом давлений. 30 В описании указывается, что вязкость выходящего из кавитатора битума снижается в 3-5 раз при неизменной температуре. Недостатком способа является то, что его свойства после кавитационной обработки 35 существенно и необратимо изменяются. Наиболее близким по технологической сущности и конструктивным особенностям является способ затаривания [Авт. св. СССР № 290304, кл, G 10 С 3/10] битумов в поли- 40 этиленовую пленку, включающий непрерывное заполнение рукава из пленки горячим битумом при интенсивном орошении водой и дальнейшее охлаждение путем протаскивания рукава с битумом под валками, погру- 45 женными в воду. После охлаждения в воде предусматривается выгрузка на площадку для доохлаждения и сматывания в бухту. Устройство для его реализации состоит из непрерывного шестеренчатого дозатора 50 горячего битума, который подключен к битумопроводу и к блоку формирования и заполнения битума в рукаа, приспособления для притапливания и выгрузки рукава из ванны. Недостатком является то, что рукав за- 55 полняется горячим битумам непосредственно из битумопровода, с температурой 160-180°С, вследствие чего заполненный битумом рукав необходимо долго выдерживать в воде, Увеличение числа валов, удер живающих рукав с битумом в затопленном состоянии по всей длине ванны, затрудняет протягивание рукава и процесс в целом. Этот способ весьма трудоемкий и предполагает высокую вероятность проплавлення пленки при заполнении битумом. В основу изобретения поставлена задача создать способ получения брикетов из нефтяного битума, упакованного в полимерную тару и устройство для его осуществления, в котором обеспечивалось бы ускорение процесса получения брикета из нефтяного битума различных марок за счет начального охлаждения до заданной вязкости и формование тары в виде брикетной ленты для обеспечения непрерывности процессов охлаждения, выгрузки и штабелирования. Поставленная задача достигается тем, что битум различных марок первоначально охлаждают до вязкотекучего состояния, затаривают в полиэтиленовый рукав, предварительно погруженный в воду, с одновременным протягиванием и формованием брикетов путем передавливания рукава, причем после передавливания брикетную ленту охлаждают, выбирают из ванны и штабелируют в неразрезанном виде. Предложенный способ расфасовки битума в полиэтиленовый рукав реализуется в устройстве, содержащем непрерывный дозатор горячего битума, блок формирования пленочного рукава и заливки битума в рукав, ванну для охлаждения водой, приспособления для притапливания и выгрузки рукава из ванны, а также дополнительно буферную емкость с установленными внутри ее трубчатым теплообменником и мешалкой, соединенную на входе битумопроводом через поплавковый дозатор, а на выходе с непрерывным дозатором, выполненным в виде шнекового питателя с теплообменником, приспособление для непрерывного протягивания и формования брикетов в виде двух беличьих колес с цилиндрическими формующими элементами, установленных в ванне, а также механический брикетоукладчик и гоузовой транспортер. Признаки изобретения, как они охарактеризованы выше, обеспечивают значительное ускорение процесса охлаждения брикетов и связанное с этим повышение производительности устройства, улучшают форму готового брикета за счет снижения степени усадки при охлаждении битума и облегчают проведение дальнейших технологических операций, а именно транспортировку и охлаждение в охлаждающей ванне, выгрузку из нее и укладку во вторичную тару. 20527 Это достигается путем предварительного охлаждения в буферной емкости и шнековом питателе до вязкотекучего состояния, и формирования полимерной тары для битума в виде непрерывной брикетной ленты, фор- 5 муемой из заполненного битумом полиэтиленового рукава путем передавливания его непосредственно в зоне заполнения в погруженном под воду состоянии при помощи приспособления, выполненного по типу 10 двух беличьих колес. На чертеже изображено устройство для упаковки битума в полимерную тару. Устройство состоит из обогреваемого битумопровода 1 с установленным на нем 15 обогреваемым вентилем 2, соединенным через поплавковый дозатор 3 с буферной емкостью4, имеющей рубашку-теплообменник 5, внутри которой установлены секции трубчатого теплообменника 6 и рамная мешалка 20 с электроприводом 7. Выход буферной емкости 4 соединен с шнековым дозатором 8, имеющим рубашку-теплообменник 9. Иа выходе шнекового дозатора 8 установлен сливной патрубок 10 с закрепленным на нем 25 сварочно-формирующим устройством 11, на который подается полиэтиленовая пленка с рулона 12, Под сливным патрубком 10 в ванне 13 установлено брикетоформующее устройство 14, затем притапливающий 30 транспортер 15, выгружающий транспортер 16 и брикетоукладчик 17, соединенные общей трансмиссией с электроприводом 18. На брикетоукладчике 17 установлены автоматические ножницы 19, а под брикетоук- 35 ладчиком 17 установлен грузовой транспортер 20 с поддонами 21. Устройство работает следующим образом: расплавленный битум с температурой 160-200°С подается по трубопроводу 1 че- 40 рез обогреваемый вентиль 2 на поплавковый дозатор 3, поддерживающий заданный уровень битума в буферной охлаждающей емкости 4, снабженной трубчатыми теплообменниками 6, охлаждающей рубашкой 5 и 45 рамной мешалкой с электроприводом 7. В теплообменники и рубашку подается охлаждающая жидкость, например, нефтяное масло с температурой кипения выше 200°С, которое после отбора тепла от битума ох- 50 лаждается в теплообменнике любого типа до температуры 60-100°С. Управление подачей охлаждающей жидкости осуществляется в зависимости от вязкости охлаждаемого битума. Вязкость битума ре- 55 гистрируется по величине тока нагрузки электродвигателя мешалки 7. При увеличении вязкости битума выше заданной прекращается подача охлаждающей жидкости. Охлажденный до заданной вязкости битум из охлаждающей емкости 4 поступает е шнековый дозатор 8. имеющий охлаждаемую водой рубашку 9, управление подачей воды в которую также осуществляется в зависимости от вязкости битума по величине тока нагрузки электродвигателя. Охлаждение битума до вязкотекучего состояния, а не до определенной температуры играет в данном процессе важную роль. Битум, подаваемый на разлив, может быть различных марок и иметь различную температуру плавления. Испытания показали, что полиэтиленовый рукав из пленки толщиной 30 мкм, заполняемый по вышеописанному способу, может выдержать контакт с битумом при температуре 160°С. Чтобы брикете битумом, например, марки БН 70/30, охладился до состояния формоустойчивости, температура внутри брикета должна понизиться от 160 С до 90'100°С. т.е. на 60~70°С. Битум в неподвижном состоянии является очень плохим проводником тепла и брикет толщиной 80 мм будет охлаждаться в воде в течение 3-4 часов. Если битум марки БН 70/30 предварительно охладить до температуры 105— 110°С, т.е. до такого вязкотекучего состояния, при котором он может транспортироваться через охлаждающие узлы установки и нормально заполнять пленочный рукав, то до состояния формоустойчивости внутренняя температура должна понизиться только на 1Q-15°C, а для этого достаточно 45-60 мин охлаждения в воде. Различные марки битумов значительно отличаются по температурам плавления, но разность температур при изменении вязкости от вязкотекучего до пастообразного состояния у них изменяется незначительно. Таким образом, при переходе с одной марки битума на другую не возникает необходимости в переналадке установки, и нет угрозы перегрузки и выхода из строя электродвигателей. С винтового дозатора 8 битум выдавливается через сливной патрубок 10 в рукав, который формируется из полиэтиленовой пленки, поступающей с рулона 12, в сварочно-формирующем устройстве 11, Рукав, заполняемый битумом, непрерывно погружается в охлаждающую ванну 13 при помощи брикето-формующего устройства 14, выполненного по типу двух беличьих колес, вращающихся в противоположные стороны таким образом, чтобы цилиндрические формующие элементы сближались с зазором 0,5-1 мм. В месте передавливания заполненного рукава между его стенками остается тонкая прослойка битума, которая быстро остывает и за счет адгезии к пленке удерживает битум в образованном таким образом брикете. Сформированная брикетная 20527 8 лента охлаждается в ванне 13, заполненной допускающими их укладку на стандартные водой, с помощью притапливающего трансподдоны (европоддон 1200/800 мм): длина портера 15 для равномерного охлаждения. 190,280, или 390 мм; ширина 800 мм; толщиОхлажденная брикетная лента выбирается на от 30 до 100 мм. Масса брикетов может из ванны 13 транспортером 16 и поступает 5быть от 5 до 20 кг, что допускает их ручную на брикетоукладчик 17, укладывающий бриразгрузку. Штабель из 75 брикетов массой кетную ленту на поддоны, установленные на 750 кг на европоддоне не требует обрешетгрузовом транспортере 20. Обрезание брики или обвязки и может транспортироваться кетной ленты производится с помощью меподъемно-транспортными устройствами с ханических ножниц 19, установленных на 10 наклоном до 20 градусов. брикетоукладчике 17, по команде счетчика Для изготовления полимерного рукава брикетов или автоматических весов под использовалась полиэтиленовая пленка толтранспортером. Транспортирование поддощиной от 30 до 100 мкм, Расход полиэтилена нов с брикетами производится любыми подъемно-транспортными средствами. 15 на 1 тонну битума составляет 2,0-2,9 кг. Производительность установки составДля охлаждения используется оборотляет от 3 до 8 т/ч в зависимости от размеров ная технологическая вода с температурой брикета. 10-40°С. В процессе работы установки вода Предлагаемое изобретение может исне загрязняется и используется многократпользоваться на нефтеперерабатывающих но. 20 производствах и позволяет механизировать Для затаривания в полиэтиленовую с высокой степенью надежности все технопленку использовались битумы марок БН логические операции производства брикета 50/50, БН 70/30, БН 90/10. из битума различных марок и аналогичных Получаемые с помощью предлагаемого ему материалов. способа по упаковке битума в полимерную 25 Важным достоинством устройства являтару и установки для его реализации брикеется отсутствие выбросов летучих компоты имеют правильную прямоугольную форнентов битума, содержащих вредные му с округлыми краями и размерами. вещества, в атмосферу. 20527 Упорядник Замовлення 4389 Техред М.Келемеш Коректор О. Кравцова Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.ГагарІна, 101 (19) (il) (ІЗ) (5D6 A 23 L 1/34 ДЕРЖАВНЕ ПАТЕНТНЕ ВІДОМСТВО НА ВИНАХІД без проведення експертизи по суті на підставі Постанови Верховної Ради України Ns 37C9-X!! від 23 ХіІ. 1993 р Пу 6 лікується в редакції заявника (54) ЛІКУВАЛЬНО-ПРОФІЛАКТИЧНІ КОНСЕРВИ ДЛЯ ДИТЯЧОГО ХАРЧУВАННЯ 1 (21)96124814 (22)24.12.96 (24) 15,07.97 (46) 27.02.98. Бюл. N» 1 (47)15.07.97 (72) ФІліпова Людмила Юрієвна, Гайдар Ніна Михайлівна, Пилипенко Юрій Дмитрович, Завьялова Надія Іванівна (73) Науково-дослідний прое^ктно-конструкторський Інститут "Консервлромкомплекс" (57) 1. Лечебно-профилактические консервы для детского питания, содержащие фруктовое пюре из яблок, овощное пюре, сахаросодержащий компонент и добавку, о т л и ч а ю щ и е с я тем, что дополнительно содержат настой лекарственных растений, при этом в качестве фруктового, кроме пюре из яблок, консервы содержат пюре из вишни, в качестве овощного пюре из свеклы или моркови, в качестве сахаросодержащего компонента - сахарный сироп, а в качестве добавки, кроме пектина, лимонную кислоту, при следующем соотношении указанных компонентов, мас.%: Настой лекарственных растений 5,0-15,8 Сахарный сироп 25,0-39,0 Добавка 0,2-1,5 Овощное и/или фруктовое пюре Остальное 2, Консервы по п. 1, о т л и ч а ю щ и е с я тем, что в качестве настоя лекарственных растений содержат настой мяты перечной или мелисы лимонной, или пустырника, или толокнянки, или шиповника. 3. Консервы по п. 1, о т л и ч а ю щ и е с я тем, что содержат пюре из яблок, настой ши повника, настой мяты и сахарный сироп при следующем соотношении указанных компонентов, мас.%: Пюре из яблок 45,0 Насгой шиповника 15,0 Настой мяты 15.0 Сахарный сироп 25,0 4. Консервы по п. 1 , о т л и ч а ю щ и е с я тем, что содержат пюре из яблок и моркови, настою мяты или толокнянки, настой пустырника, сахарный сироп и лимонную кислоту при следующем соотношении указанных компонентов, мас.%: Пюре из яблок 24, 8-34 ,85 Пюре из моркови 20, 0-30 .0 Сахарный сироп 35, 0 Настой мяты или толокнянки 5,0 Настой пустырника 5,0 Лимонная кислота 0,2 5. Консервы по п. 1, о т л и ч а ю щ и е с я тем, что содержат пюре из яблок и свеклы, сахарный сироп, настой мяты, пектин и лимонную кислоту при следующем соотношении указанных компонентов, мас.%: Пюре из яблок 25,0 Пюре из свеклы 25,0 Сахарный сироп 33,0 Настой мяты 15,8 Пектин 1,0 Лимонная кислота 0,2 6. Консервы поп, 1, о т л и ч а ю щ и е с я тем, что содержат пюре из вишни, сахарный сироп, настой мяты или мелисы и пектин при следующем соотношении у к а з а н н ы х компонентов, мас.%: шмиир 20521 Пюре из вишни Сахарный сироп 45,0 39.0 Настой мяты или мелисы Пектин Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к производству консервов для питания детей. Известны консервы для детского питания [Авт. св. СССР N? 976934, кл. А23 L1 /34. 1982], содержащие, мас.%: 5 Мясо (говяжье. куриное) 15-25 Овощи 12-36 Крупы 5-20 Томат-пюре 2,9-3.1 10 Масло растительное 2.9-3,1 Соль 0.4-0.6 Сахар 1,4-1.6 Витамины: 15 Вт 0,00035-0,00045 В2 • 0,00045-0,00055 Be 0,00035-0,00045 РР 0,0039-0,0041 Е 0,00045-0,00055 20 С 0,0245-0,0255 Настой почек березы 1,6-3,4 Настой плодов шиповника 1.6-3,4 25 Настой толокнянки 1,6-3.4 Вода Остальное Общим из заявляемого изобретения и данного состава является наличие овощей, 30 сахара и настоя плодов шиповника. Однако состав консервов по прототипу предназначен для употребления детям с конкретной патологией (предотвращение или уменьшение воспалительных процессов 35 почек). Наиболее близким к предлагаемому являются консервы для питания детей с нарушенным обменом веществ (железодефицитной анемией), содержащие, мас.%: 40 Пюре из тыквы 48,94 Пюре из яблок или айвы 25,0 Сахар 10,0 Пектин 1.0 45 Творог 15,0 Аскорбиновая кислота 0,05 Сульфат железа 0,01 50 14,5 1,5 [Технологическая инструкция по производству консервов для питания детей с нарушенным обменом веществ. ТУ 10-03-574-87]. Состав данных консервов выбран в качестве прототипа. Общим у прототипа и заявляемого изобретения является наличие в составе консервов следующих компонентов: фруктового пюре (пюре из яблок); овощного пюре (у прототипа пюре из тыквы, в заявляемых консервах пюре из других овощных культур), сахаросодержащего компонента; добавки (у прототипа пектин и аскорбиновая кислота). В основу изобретения поставлена задача в лечебно-профилактических консервах для детского питания за счет дополнительного содержания настоя лекарственных растений, расширения ассортимента фруктовых пюре, а также замены сахаросодержащего компонента и овощей, создать лечебно-профилактические продукты, которые обеспечивают немедикаментозную коррекцию у детей с заболеваниями гепатобилиарной системы и при хронических запорах. Поставленная задача решается в лечебно-профилактических консервах для детского питания, содержащих фруктовое пюре из яблок, овощное пюре, Сахаросодержащий компонент и добавку тем, что, в отличие от прототипа, консервы дополнительно содержат настой лекарственных растений, при этом в качестве фруктового пюре, кроме пюре из яблок, консервы содержат пюре из вишни, в качестве овощного - пюре из моркови или свеклы, в качестве сахаросодержащего компонента - сахарный сироп, а в качестве добавки, кроме пектина - лимонную кислоту, при следующем соотношении указанных компонентов, мас.%: Настой лекарственных растений 5,0-15,8 Сахарный сироп 25,0-39,0 Добавка 0,2-1,5 Овощное и/или фруктовое пюре Остальное В качестве настоя лекарственных растений консервы содержат настой мяты перечной и/или мелисы л и м о н н о й , и/или 20521 пустырника, и/или толокнянки, и/или шиНами подобрано сочетание пюре овоповника, щей, фруктов и настоев лекарственных расКонсервы содержат пюре из яблок, натений, в состав которых входят стой шиповника, настой мяты и сахарный биологически активные вещества, эфирные сироп, при следующем соотношении указан- 5 масла, гикозиды, сапонины, полифенолы, ных компонентов, мас.%: витамины, которое обеспечивает укреплеПюре из яблок 45,0 ние ослабленного организма за счет повыНастой шиповника 15,0 шения активности иммунной системы, Настой мяты 15,0 позволяет повысить устойчивость к различСахарный сироп 25,0 10 ным инфекциям и воздействию отрицательКонсервы содержат пюре из яблок и морных факторов окружающей среды. кови, настой мяты или толокнянки, настой пуКоличество лимонной кислоты опредестырника, лимонную кислоту при следующем ляется необходимостью создания рН в готосоотношении указанных компонентов, мас.%: вой продукции, равной - 3,7. Именно эти Пюре из яблок 24,8-34,85 15 условия позволяют проводить пастеризаПюре из моркови 20,0-30,0 цию при 100°С. Сахарный сироп 35,0 Уменьшение сахарного сиропа (меньше Настой мяты или 25 мае %) приводит к тому, что продукт сотолокнянки 5,0 держит большое количество мякоти. Такие Настой пустырника 5,0 20 консервы не отвечают требованиям, котоЛимонная кислота 0,2 рые предъявляются к напиткам для питания Консервы содержат пюре из яблок и детей 6-месячного возраста. свеклы, сахарный сироп, настой мяты, пекЛечебно-профилактические консервы тин и лимонную кислоту при следующем содля детского питания готовят следующим отношении указанных компонентов, мас.%1 25 образом. Пюре из яблок 25,0 Сырье сортируют по качеству на ленточПюре из свеклы 25.0 ном или роликовом конвейере. Плоды моют, Сахарный сироп 33,0 у вишни отделяют плодоножки. Затем сырье Настой мяты 15.8 сортируют и ополаскивают под душем и гоПектин 1,0 30 товят пюре Лимонная кислота 0,2 Для этого яблоки измельчают на дробилКонсервы содержат пюре из вишни, саке на кусочки размером 3-5 мм и разваривахарный сироп, настой мяты, или мелисы лиют. У вишни вначале отделяют косточки без монной и пектин при следующем нагрева, а затем косточки с остатками мякосоотношении указанных компонентов, мае. %: 35 ти нагревают до 65 ± 5°С и пропускают чеПюре из вишни 45,0 рез протирочную машину. Отделенную Сахарный сироп 39,0 мякоть разваривают и пропускают через Настой мяты или сдвоенную протирочную машину. Морковь и мелисы лимонной 14,5 свеклу подготавливают на установке А9Пектин 1,5 40 КПМ-2 При отсутствии указанной установНовым в заявляемом изобретении являки, морковь и свеклу очищают от примесей, ется то, что консервы дополнительно содерсортируют на ленточном конвейере, моют, жат настой из лекарственных трав, а также концы обрезают. Очищенные корнеплоды ассортимент лекарственных растений и коополаскивают под-душем и измельчают на личественные значения настоя. 45 кусочки размером 3-5 мм, а затем развариНовым также является то, что в качестве вают и протирают. фруктового пюре, кроме пюре из яблок, конЕсли есть в наличии пюре-полуфабрикасервы содержат пюре из вишни. ты, то тару открывают, извлекают пюре и Кроме того, новизна состоит в том, что подогревают его до 60±2°С. Подогретое консервы содержат пюре из моркови и свек- 50 пюре пропускают через протирочную машилы, а также в том, что в качестве сахаросону с диаметром сита 0,7-0,8 мм. держащего компонента консервы содержат Настой шиповника готовят следующим сахарный сироп. образом: плоды измельчают и заливают воВ качестве добавки кроме пектина кондой с температурой 96 ± 2°С. Соотношение сервы содержат лимонную кислоту. 55 массы шиповника и воды равно 1:10, время Причинно-следственная связь между настаивания - 30 мин. совокупностью заявленных признаков и доПектин смешивают в сухом виде с сахастигаемым эффектом объясняется следуюром в соотношении 1:(3-5). Смесь пектина с щим. сахаром высыпают в воду с температурой 20521 8 45~50°С при интенсивном перемешивании Пюре из яблок 45,0 до образования гомогенной массы. СоотноНастой шиповника 15,0 шение пектин:вода равно 1:20. Количество Настой мяты 15,0 сахара, забранного на смешивание с пектиСахарный сироп 25,0 ном, учитывая в дальнейшем при приготов- 5 П р и м е р 2. Для выработки 100„кг лении сахарного сиропа, консервов "Напиток морковно-яблочный* берут следующее количество компонентов, Для получения настоя лекарственных кг/100 кг готового продукта: трав сухие листья и цветы мяты перечной Пюре из моркови 30,0 или мелисы лимонной, или пустырника, или толокнянки, или тмина измельчают и залива- 10 Пюре из яблок 24,8 Сахарный сироп 35,0 ют горячей водой при температуре 96 ± 2°С Настой мяты или при соотношении сухая трава:вода равном толокнянки , 5,0 1; 10 и настаивают в течение 10 минут. Настой пустырника 5,0 Настои трав фильтруют на фильтре с диЛимонная кислота 0,2 аметром сит 0,7-0,8 мм и доводят водой до 15 заданного объема. П р и м е р з . Для выработки 100 кг консервов "Напиток яблочно-морковный" Приготовление сахарного сиропа. берут следующее количество компонентов, Вначале сахар очищают от примесей пукг/100 кг готового продукта: тем просеивания в присутствии магнитного улавливателя. В варочный котел заливают 20 Пюре из яблок 34,85 Пюре из моркови 20,0 воду в объеме, превышающем на 1,5% расСахарный сироп 35,0 четное количество, необходимое для получеНастой мяты или ния сиропа, нагревают до кипения и толокнянки 5,0 добавляют сахар-песок, доводя до необхоНастой пустырника 5,0 димого количества в соотношении с рецеп- 25 Лимонная кислота 0,15 турой. Полученный раствор повторно П р и м е р 4. Для выработки 100 кг доводят до кипения, кипятят в течение консервов "Нектар свекольно-яблочный" 10 мин и фильтруют, берут следующее количество компонентов, Затем смешивают предварительно полученное пюре из свеклы или моркови и пю- 30 кг/100 кг готового продукта: Пюре из яблок 25,0 ре из яблок или вишни (или Пюре из свеклы 25,0 пюре-полуфабрикаты) с сахарным сиропом Сахарный сироп 33,0 и пектином в емкости, снабженной тепловой Настой мяты 15,8 рубашкой (подогревом) и мешалкой. К полуПектин 1,0 ченной смеси добавляют насгой одной или 35 Лимонная кислота 0,2 нескольких лекарственных растений (в соотЛ р и м е р 5. Для выработки 100 кг ветствии с рецептурой) и лимонную кислоту. консервов "Нектар вишневый" берут следуВеличина рН должна быть не более 3,6. ющее количество компонентов, кг/100 кг гоПолученную смесь гомогенизируют в гомогенизаторе при повышенном давлении на 40 тового продукта: Пюре из вишни 45,0 менее 10 КПа. Сахарный сироп 39,0 Готовый продукт дезаэрируют при 45Настой мяты или 50°С и остаточном давлении 10-17 КПа в мелисы 14,5 течение 8-10 мин, подогревают до темпераПектин 1,5 туры на 5-8°С превышающей температуру 45 Консервы заявляемого состава на опытфасования; фасуют в стерильную тару и укуном производстве Научно-исследовательпоривают. ского проектно-конструкторского института Укупоренную тару с консервами стери"Консервпромкомплекс" в количестве 1000 15-15-20 лизуют в режиме en банок 0,25 дм 3 . 5 0 100°С Клиническая пробзция консервов осуПолученные консервы пригодны для ществлялась в Институте педиатрии, акуупотребления в течение 1 года. шерства и гинекологии АМН Украины. Примеры 1-5 иллюстрируют получение Результаты апробации подтвердили леконсервов для детского питания различного чебно-профилактическое свойство заявляекачественного и количественного состава. ^5 мых консервов. Они рекомендованы для П р и м е р 1. Для выработки 100 кг питания детей с заболеваниями гепаго-биконсервов "Напиток яблочно-шиповниколиарной системы и при хронических заповый" берут следующее количество компорах. нентов, кг/100 кг готового продукта: 20521 Упорядник Замовлення 4389 Техред М.Келемеш Коректор t м. Самборська Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул.Гагаріна, 101