Спосіб стимулювання репродукції вірусу парагрипа

Изобретение относится к в и р у с о л о г и и и модет быть использовано при п р о и з в о д с т в е вирусных п р е п а р а т о в и д и а г н о с т и к е вирусных з а б о л е в а н и й . Изобретение относится к в и р у с о л о гии и может быть использовано при п р о и з в о д с т в е вирусных препаратов и д и а г н о с т и к е вирусных з а б о л е в а н и и . Целью изобретения я в л я е т с я повышение с к о р о с т и репродукции вирусов и упрощение с п о с о б а . Способ осуществляют следующим о б разом. П р и м е р . Берут культуру клеток Нер2 на 3 сутки после посева с х о р о шо сформированным монослоем, без в и димых морфологических изменений. Клетки снимают с поверхности с т е к л а смесью в е р с е н а с трипсином, р е с у с пендируют D ростовой среде ( с р е д а игла 90%+сыворотка крупного р о г а т о г о с к о т а 10%), доводя концентрацию до 1 '10 к л / м л . К полученной суспензии добавляют равный объем 20% ДИСО, п р и г о т о в л е н н о г о на ростовой с р е д е . Суспензию разливают в ампулы д л я р а з м о 32-89 Цель и з о б р е т е н и я - повышение с к о р о с т и репродукции вирусов в к у л ь т у р е к л е т о к її упрощение с п о с о б а . Клетки хорошо сформированного монослоя снимают с поверхности с т е к л а и р е с у с пендирутот в ростовой с р е д е , д о б а в л я ют к р и о п р о т е к т о р и подвергают п о с т а дийному замораживанию до температуры - 1 9 6 ° С . Размороженную суспензию отмывают от к р и о п р о т е к т о р а , добавляют ростовую среду и культивируют до о б р а з о в а н и я монослоя с последующим е г о заражением. Способ п о з в о л я е т з н а ч и т е л ь н о с о к р а т и т ь время выращивания вируса парагриппа. 1 т а б л . іражквания. После 10 мин э к с п о з и ц и и клеток с раствором к р и о п р о т е к т о р а •при комнатной температуре ампулы замораживают со скоростью 3 0 40 град/мин до - 2 8 ° С , з а т е м после 15 мин о с т а н о в к и при - 2 8 С погружают в в жидкий а з о т ( - 1 9 6 С ) . Отогрев п р о О водят на водяной бане при 41 С. Размороженную суспензию клеток отмывают от криопротектора, добавляя двойной объем ростовой среды и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 7 мин. Супернатант удаляют с заменой на ростовую среду. Клетки высеивают в пробирки. После образования монослоя; ростовую среду удаляют. Монослой дважды промывают раствором Хенкса, после чего вносят по 0,1 мл жидкости, содержащей вирус парагриппа 3 и 0,9 мл среды игла. Рабочий титр вируса парагриппа 3 серотипа 0,4 ед. ТЦД 50/0,1 мл. ^П,ля определения урожая г 1505020 вируса ПГ-3 проводят титрование вируКроме этого способ исключает рабосу. В таблице представлены результаты ту с вредными веществами, в связи с экспериментов в сравнении с прототичем он является безопасным для перпом. сонала. Развитие вируса ПГ-3 (п - 5 ) . Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Из таблицы видно, что при стимуСпособ стимуляции репродукции ляции репродукции вируса замораживавируса парагриппа путем воздействия нием его выявление происходит на 1 t на культуру клеток стимулирующим o сутки раньше, развитие протекает инагентом, о т л и ч а ю щ и й с я тенсивнее, урожайность вируса при тем, ч т о , с целью повышения скорости этом не ниже, чем в прототипе. репродукции вирусов и упрощения споНа осуществление предлагаемого с о б а , культуру клеток перед заражеспособа затрачивается на 4-5 ч мень- 15 нием подвергают замораживанию в жидше, чем на прототип. ,ком а з о т е . Способ Сутки Стимуляция эаморажив анисм Прим Редактор Л.Павлова ГА 5 Стимуляция липидным экстрактом ЦПД + ++ +++ 0 0 22,6+0,93 75,0+1,79 Сплошная 1 2 3 4 5 + ++ +++ +++ 0 24,2±0,86 89,2+3,14 Сплошная Сплошная 1 2 3 е ч а н и е: Титр вируса, ед. ТЦЦ 50/0,1 мл 5,33 5,4*0,2 * - отсутствие ППД, умеренные изменения, сильно выраженные изменения, резко выраженные изменения. Составитель 0.Жакетов Техред М.Ходанич Корректор М.Шароши Заказ 1615/ДСП Тираж 367 Подписное В И П Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР Н ИИ 113035, Москва, Ж-35, Раушская н а б . , д . 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101