Глутамат етилового ефіру амбену, який має противірусну активність по відношенню до вірусів грипу серотипів а і в

Изобретение относится к органической химии, а именно, к синтезу глутамата этилового эфира амбена: HOOC CH NH2 CH2 CH2 + COO .H3NCH2 C 6H 4 COOC2H5 , (1) обладающему противовирусным действием, что предполагает его применение в медицинской практике. Заявляемое соединение в литературе не описано. Глутамат амбена обладает антифибринолитическим, противовоспалительным и антимикробным действием [1], глутаминовая кислота и ее соли используются в медицине при заболеваниях центральной нервной системы [2]. В литературе описаны синтезы солей глутаминовой кислоты C некоторыми алифатическими, ароматическими гетероциклическими аминами [3]. Известен глутамат гидразида амбена, обладающий противовирусной активностью [4]. Наиболее близким к заявляемому соединению является глутамат гидразида амбена, обладающий противовирусной активностью. В качестве базового объекта сравнения взят антивирусный препарат ремантадин, который обладает противовирусной активностью только в отношении вирусов гриппа серотипа А. Цель изобретения - синтез нового производного амбена, обладающего более эффективным антивирусным действием. Поставленная задача достигается синтезом глутамата этилового эфира амбена, формулы I, обладающего противовирусной активностью в отношении вирусов группа серотипов А и В. Соединение получают взаимодействием этилового эфира амбена с глутаминовой кислотой в водной среде. Изобретение иллюстрируется Следующими примерами: Пример 1. Получение глутамата этилового эфира амбена. Смесь из 17,9 г (0,1 моль) этилового эфира амбена, 14,7 г (0,1 моль) глутаминовой кислоты и 100 мл воды кипятят 0,5 ч. К горячей реакционной массе добавляют 5 г активированного угля, раствор фильтруют горячим и охлаждают льдом. Выпавший осадок соединения 1 отфильтровывают, промывают охлажденной водой, сушат. Получают 32 г (98 %) белого кристаллического глутамата этилового эфира амбена с температурой плавления 179-181°С. Найдено, %: С54.99; Н 6,49; N 8,26. С15Н22N2 O6. Вычислено, %: С 55,21; Н6,74; N 8,59. В ИК спектре глутамата этилового эфира амбена имеется полоса поглощения валентных колебаний группы H3N 3070 см -3 и поглощение аминокислотной полосы 11 1530 cм -1. В УФ спектрах (в спирте) имеется максимум поглощения при l 231 ± 2 нм (lg e 2 .71), характерный для производных n-аминометилбензойной кислоты. Пример 2. Противовирусная активность глутамата этилового эфира амбена в отношении вируса гриппа серотипа А. Исследование проведено на эталонном штамме вируса гриппа А (Гон-конг/1/68(Н3N2), который вызвал пандемию гриппа в 1968-1969 гг. и является родоначальником штаммов с антигенной формулой H3N2, актуальных и в настоящее время. При определении у препарата противовирусного действия его в стерильных условиях растворяли в поддерживающей среде состава; NaCI - 8,0 г; КСl - 0,6 г; СаСІ2 - 0,8 г; МgСІ2 – 0,05 г; глюкоза - 0,3 г; желатин -2.0 г; левомицитин - 0,1 г; фенол-рот - 25 мл 0,01 %-ного раствора на 1 л дистиллированной воды. рН – 7,0 (среду стерилизуют при 115°С в течение 30 мин). На среде, содержащей препарат (опыт) и не содержащей его (контроль) разводили аллантоисный вирус А/Гонконг/1/68 (H3N2) до концентрации вируса порядка 100 ЭИД50 мл и 10 контрольных, и 10 опытных проб инкубировали 24 ч при 36°С с фрагментами хорионаллантоисных оболочек (ХАО) 12-14-дневных куриных эмбрионов. Затем культуральную жидкость из опытных и отдельно контрольных проб объединяли и концентрацию инфекционного вируса в них определяли титрованием десятикратных разведении на новой культуре ХАО. Концентрацию инфекционного вируса рассчитывали методом Кербера в модификации И.П.Ашмарина и выражали в ТИД50 . Поскольку во всех экспериментах каждому опыту соответствовал свой контроль, т.е. имел место случай связанных выборок, то о статистической достоверности воздействия судили по непараметрическому критерию знаков (КЗ), что диктовало необходимость проведения не менее 5 опытов в серии. Одновременно исследовали прямое вирулицидное воздействие препарата на внеклеточный вирус и их влияние на чувствительность культуры к заражению после предварительной в течение 1 суток обработки ее с удалением препарата перед инфицированием клеток. Результаты изучения противовирусного действия глутамата этилового эфира амбена на вирус гриппа А представлены в таблице 1. Как следует из таблицы 1 глутамат этилового эфира амбена проявляет антивирусную активность в отношении вируса гриппа А в концентрации 100 мкг/мл при репродукции вируса в его присутствии. При предварительной обработке ткани препаратом, а также изучении вирулицидного его действия в указанной выше концентрации статистически достоверного эффекта не обнаружено. Следовательно, противовирусное действие глутамата этилового эфира амбена в отношении возбудителя гриппа А связано с непосредственным его вмешательством в процесс вирусной репродукции. В меньшей дозе противовирусное действие препарата не проявлялось. Глутамат гидразида амбена, выбранный в качестве референспрепарата, поскольку он близок по структуре и также обладает противогриппозным действием, тормозит репродукцию вируса гриппа А в дозе 3 мг/мл [4], т.е. в 30 раз больше, чем эффективная концентрация испытуемого глутамата этилового эфира амбена. Заявляемое соединение проявляет антивирусное действие в отношении вируса гриппа серотипа А в 100 раз меньшей дозе, чем глутамат п-аминометил-бензойной кислоты, обладающий антифибринолитической. противовоспалительной и антимикробной активностью [1]. Однако, данные литературы свидетельствуют, что известный противогриппозный препарат ремантадин проявляет антивирусное действие в культуре ткани в отношении вирусов гриппа серотипа А при его концентрации 25-50 мкг/мл. Таким образом, глутамат этилового эфира амбена в отношении вирусов гриппа серотипа А проявляет более выраженное антивирусное действие, чем глутамат гидразида амбена и глутамат амбена, но менее выраженное, чем ремантадин. Пример 3. Противовирусная активность этилового эфира амбена в отношении вируса гриппасеротипа В. Исследование проведено на штамме В (Ленинград) 17/86, выделенном в г. Ленинграде в 1986 г. При определении антивирусного действия глутамата этилового эфира амбена, его предварительно растворяли в спецсреде описанного в примере 2 состава. Затем определяли снижение инфекционной активности вируса В при титровании ее на фрагментах ХАО в присутствии препарата (опыт) по сравнению с инфекционной активностью вируса, определенной в отсутствие препарата (контроль). Одновременно исследовали прямое вирулицидное действие препарата на внеклеточный вирус и их влияние на чувствительность культуры к заражению после предварительной в течение 1 суток обработки ее с удалением препарата перед инфицированием клеток. Инкубация вируса гриппа В при заражении им фрагментов ХАО во всех вариантах опытов продолжалась 72 часа при 34°С. Расчет ТИД50 и статистическая обработка проводились, как в примере 2. Результаты изучения противовирусного действия глутамата этилового эфира амбена на вирус гриппа В представлены в таблице 2. Как следует из таблицы 2, глутамат этилового эфира амбена проявляет антивирусную активность в отношении вируса гриппа В в концентрации 400 мкг/мл при репродукции вируса в его присутствии. При предварительной обработке ткани препаратом, а также изучении вирулицидного его действия статистически достоверного эффекта не обнаружено. Следовательно, противовирусное действие глутамата этилового эфира амбена в отношении возбудителя гриппа В связано с непосредственным его вмешательством в процессе вирусной репродукции. Референс-препарат - глутамат гидразида амбена проявляет противовирусное действие в отношении вируса гриппа В в дозе 5 мг/мл, т.е. в дозе в 7,5 раз большей, чем эффективная концентрация испытуемого глутамата этилового эфира амбена. Глутамат этилового эфира амбена проявляет антивирусное действие в отношении вируса гриппа серстипа В в 25 раз меньшей дозе, чем глутамат амбена [1]. По литературным данным известный противогриппозный препарат ремантадин проявляет антивирусное действие только в отношении штаммов вируса гриппа серотипа А, но не В. Пример 4. Токсичность глутамата этилового эфира амбена проверена на половозрелых белых мышах (масса. 19-21 г), согласно общепринятой методике. При внутримышечном введении результаты опытов показали, что соединение I-, согласно ГОСТ 12.1.007-76 "Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности" относится к малотоксичным веществам. Его ЛД50=3080 (2970-3190) мг на 1 кг массы тела животного. При пероральном введении ЛД50=6490 (6350-6630) мг на 1 кг массы тела животного. Как видно из таблиц 1 и 2 глутамат этилового эфира амбена обладает противовирусной активностью не только в отношении вирусов гриппа серотипа А, но, в отличие от ремантадина, и в отношении вирусов гриппасеротипа В, причем это воздействие проявляется в отношении вируса гриппа А в 30, а в отношении вируса гриппа В в 7,5 раз меньшей дозе, чем у глутамата гидразида амбена, соответственно, в 100 и 25 раз меньшей дозе, чем у глутамата амбена. Этим определяется его преимущество как перед ремантадином, так и глутаматами амбена и гидразида амбена. Кроме того, заявляемое соединение в 10 раз менее токсично, чем ремантадин.