Рідке середовище для діагностики трихомоніазу “скм-1-у”

Реферат: Рідке середовище для діагностики трихомоніазу містить рідке тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець, дріжджовий аутолізат, панангін, 15 % розчин гліцину, 15 % розчин тіосечовини, дефібринізовану плазму донорської людської крові, стрептоміцин, 4 % розчин гентаміцину та розчин Рінгера. Середовище додатково містить 15 % розчин глюкози, 7,5 % розчин харчового желатину та лідазу. UA 103506 U (12) UA 103506 U UA 103506 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 Корисна модель належить до медицини, а саме лабораторної клінічної діагностики, мікробіології і дерматовенерології, і може бути використаною при проведенні бактеріологічної культуральної діагностики трихомоніазу і амебіазу, які у останній час у зв'язку з масовим застосуванням антибактеріальних і протистоцидних препаратів мають асимптоматичний клінічний перебіг. Клінічна діагностика найпростіших останній час утруднена через те, що найпростіші набувають атипових форм, і, як результат, зростає необхідність покращення діагностичних середовищ для виділення таких збудників і покращення диференціальної діагностики захворювань. На сьогодні відомий ряд різних комерційних діагностичних середовищ, що використовуються з вищезазначеною метою, але зазвичай вони є дорогими. Відомі стандартні середовища (СКДС та ін.) поступаються якістю комерційним та мають ряд недоліків; компоненти, що входять до складу таких середовищ, є застарілими. Найбільш близьким за технічною суттю та результатом, що досягається, є середовище, яке містить розчин Рінгера, дефібринізовану плазму донорської людської крові, дріжджовий аутолізат, рідке тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець, панангін, 15 % розчин фруктози, 15 % розчин гліцину, 15 % розчин тіосечовини, стрептоміцин та 4 % розчин гентаміцину при такому співвідношенні компонентів: рідке тіогліколеве середовище 100 мл бульйон з бичачих сердець 100 мл дріжджовий аутолізат 15 мл панангін 10 мл 15 % розчин фруктози 10 мл 15 % розчин гліцину 10 мл 15 % розчин тіосечовини 7 мл дефібринізована плазма донорської людської крові 70 мл стрептоміцин 100 000 МО; 4 % розчин гентаміцину 20 мл розчин Рінгера 158 мл. [Патент України № 13850, MПК:C12N 1/20(2006.01), С12Q 1/04(2006.01). Рідке середовище для діагностики трихомоніазу "СКМ-1". Опубл. 17.04.2006, бюл. № 4/2006]. Вважаємо його за прототип. Спільними суттєвими ознаками прототипу та корисної моделі, що заявляється, є наявність у складі обох середовищ наступних компонентів: - рідке тіогліколеве середовище, - бульйон з бичачих сердець, - дріжджовий аутолізат, - панангін, - 15 % розчин гліцину, - 15 % розчин тіосечовини, - дефібринізована плазма донорської людської крові, - стрептоміцин, - 4 % розчин гентаміцину, - розчин Рінгера. Одним з недоліків середовища-прототипу є те, що рідке середовище при зберіганні більш ніж 10-12 діб в термостаті при температурі 37-38 градусів може втрачати вологу в результаті випаровування, це сприяє підвищенню в ній концентрації поживних компонентів, при цьому підвищується онкотична та осмотична щільність середовища. Підвищення щільності негативно впливає на зростання найпростіших та їх розмноження в такому субстраті, іноді в такому середовищі випадає пластівчастий осад, в якому при мікроскопії видно згустки біологічного матеріалу (слиз, епітеліальні клітини тощо), що утруднює виявлення найпростіших і знижує якість діагностики. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення рідкого середовища для діагностики трихомоніазу шляхом зміни його складу, що забезпечить покращення діагностичних властивостей середовища. Поставлена задача вирішується тим, що у середовищі, яке містить рідке тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець, дріжджовий аутолізат, панангін, 15 % розчин гліцину, 15 % розчин тіосечовини, дефібринізовану плазму донорської людської крові, стрептоміцин, 4 % розчин гентаміцину та розчин Рінгера новим є те, що середовище додатково містить 15 % 1 UA 103506 U 5 10 15 20 25 30 35 40 розчин глюкози, 7,5 % розчин харчового желатину та лідазу при такому співвідношенні компонентів: рідке тіогліколеве середовище 100 мл бульйон з бичачих сердець 100 мл дріжджовий аутолізат 15 мл панангін 10 мл 15 % розчин глюкози 10 мл 15 % розчин гліцину 10 мл 15 % розчин тіосечовини 7 мл 7,5 % розчин харчового желатину 7 мл лідаза 128 ОД (МО) дефібринізована плазма донорської людської крові 70 мл стрептоміцин 100 000 МО 4 % розчин гентаміцину 20 мл розчин Рінгера 158 мл. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у такому. Введення до складу середовища желатину сприяє покращенню трофічнихвластивостей самого середовища, що приводить до кращого зростання і ділення найпростіших внаслідок наявності в желатині гідролізатів кістково-хрящової тканини тварин, яка багата на колаген та амінокислоти. Заміна фруктози глюкозою забезпечує наявність таких вуглеводів, які необхідні для обмінних процесів і покращення рухомості найпростіших. Крім того, в такому середовищі знижується бурхливе зростання дріжджових грибів. Ведення до складу середовища протеолітичного ферменту лідази сприяє кращому розчиненню слизових і клітинних пластівців, згустків і нитей в досліджуваному матеріалі, що отриманий від хворого. В таких згустках і пластівцях слизу можуть бути глибоко заховані найпростіші або їх цистоїдні форми, а наявність лідази у складі середовища дозволить покращити розчинення біоматеріалу, виділення та ріст найпростіших. Також пропонований склад дозволить підтримувати сприятливу кислотність середовища у бік лужного показника в період росту і розмноження найпростіших. рН пропонованого середовища складає 4,0±1,0. В цілому, склад середовища, що пропонується, дозволяє у найкоротші терміни досягти росту найпростіших при роботі з рідкими і щільними біологічними матеріалами, отриманими зі статевих шляхів, а також при аналізі слини, зубного нальоту, гнійних та некротичних мас. Середовище готують таким чином. У стерильний флакон ємністю 500 мл додають 100 мл бульйону з бичачих сердець, при помішуванні додають 100 мл тіогліколевого середовища, потім при перемішуванні додають 15 мл дріжджового аутолізату, 70 мл плазми, отриманої методом дефібринізування донорської крові людини. До отриманої суміші додають по 10 мл 15 % розчину глюкози та гліцину, у суміш додається 7 мл 7,5 % розчину харчового желатину. Далі додають 10 мл препарату панангін (виробник - Гедеон Ріхтер, Угорщина), суміш ретельно перемішують і наприкінці додають 100 000 МО стрептоміцину і 20 мл 4 % розчину гентаміцину і 2 ампули по 64 МО лідази (128 МО). Об'єм приготованої рідини доводиться розчином Рінгера до 500 мл, після чого приготовану суміш розливають у стерильні пробірки по 2-5 мл. Зверху на рідке середовище обережно нашаровують стерильне вазелінове масло 0,2-0,5 мм, зверху пробірку закривають ватномарлевою пробкою. Бульйон з бичачих сердець готують таким чином. Свіжі яловичі серця очищують від жиру, плівок та сухожилків. Пропускають через м'ясорубку, складають отриману масу у емальовану каструлю та заливають водою у співвідношенні 1:1. Залишають на 12 годин при кімнатній температурі, потім кладуть до автоклаву з температурою 100 °C, тиск 0,2-0,5 атмосфер на годину. Автоклавована маса після відстоювання фільтрується через мілке сито, отриманий бульйон розливають до стерильних флаконів по 400 мл, які потім стерилізуються в автоклаві протягом 45 хвилин при тиску 1 атмосфера. Флакони можна зберігати у холодильнику протягом року. Тіогліколеве середовище готують за загальноприйнятою методикою. 31 грам живильного середовища для контролю стерильності (тіогліколеве середовище) розчиняють в 1 літрі 2 UA 103506 U 5 10 15 20 25 30 35 дистильованої води. Готовий розчин кип'ятять протягом 2 хвилин, потім фільтрують через паперовий фільтр і розливають по флаконах. Флакони стерилізують автоклавуванням при температурі 121 °C протягом 15 хвилин при тиску 1 атмосфера. Суміш, яка простигла, доводять до рН 7±0,2. Флакони зберігаються у холодильнику протягом 1 року. Дріжджовий аутолізат готують за відомою методикою. 2,00 кг пекарських дріжджів нарізають мілкими шматочками і закладають в 10-літровий бутель. Залишають на двоє діб в термостаті при температурі 60 °C. Кінець автолізу визначається повним роздрідженням дріжджів. По закінченні автолізу у бутель додають потрійну (по вихідній вазі) кількість теплої водопровідної води (на 2 кг дріжджів додають 6 л води) і аутолізат ставлять до автоклаву для стерилізації при тиску 1-1,3 атмосфери, температурі 120-123 °C на 30 хвилин, потім відстоюють 5-7 днів. Відстій зливають, додають поварену сіль, доводять рН до 7,4. (Методичний лист, затверджений МОЗ СРСР, від 28.03.69 № 10-83/14-34). Дослідження за допомогою середовища, що пропонується, проводять шляхом засівання біологічного матеріалу зі статевих органів (піхва, уретра) або секреторних рідин (сеча, секрет передміхурової залози, слина, гній) у рідке середовище під вазелінову пробку, намагаючись не порушувати її, тим самим зменшуючи доступ кисню. Пробірки з середовищем відразу після висівання кладуть до термостату при температурі 37 °C. Перегляд середовища на наявність найпростіших рекомендується через 48-72 години після посіву, при негативному результаті - ще через 7-10 днів. Найбільш інтенсивно трихомонади розмножуються у нижньому шарі середовища, тому при контролі посівів треба брати матеріал за допомогою пастеровської петлі з дна пробірки. На предметному склі готують препарат "розчавлена капля". Препарати продивляються у затіненому полі мікроскопа при збільшенні в 280-600 разів. Умови зберігання та транспортування: пробірки зберігаються в холодильнику при 4 °C. Готовий розчин чи розлитий по стерильних пробірках зберігають при температурі 7±3 °C. Термін зберігання готового розчину в пробірках не більш 25-30 днів. Пробірки транспортують в звичайних умовах в штативі у вертикальному положенні, запобігаючи струшуванню, сильному нагріванню або заморожуванню середовища. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Рідке середовище для діагностики трихомоніазу, в середовищі, яке містить рідке тіогліколеве середовище, бульйон з бичачих сердець, дріжджовий аутолізат, панангін, 15 % розчин гліцину, 15 % розчин тіосечовини, дефібринізовану плазму донорської людської крові, стрептоміцин, 4 % розчин гентаміцину та розчин Рінгера, яке відрізняється тим, що середовище додатково містить 15 % розчин глюкози, 7,5 % розчин харчового желатину та лідазу при такому співвідношенні компонентів: рідке тіогліколеве середовище 100 мл бульйон з бичачих сердець 100 мл дріжджовий аутолізат 15 мл панангін 10 мл 15 % розчин глюкози 10 мл 15 % розчин гліцину 10 мл 15 % розчин тіосечовини 7 мл 7,5 % розчин харчового желатину 7 мл лідаза 128 ОД (МО) дефібринізована плазма донорської людської крові 70 мл стрептоміцин 100 000 МО 4 % розчин гентаміцину 20 мл розчин Рінгера 158 мл. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3