Спосіб деривативної тшх-очистки витягів із крові та сечі, що містять доксиламін

Реферат: UA 106265 U UA 106265 U 5 10 15 20 25 30 Корисна модель належить до аналітичної хімії, а саме до ізолювання із біологічних рідин та аналізу снодійного лікарського препарату доксиламіну, і може знайти застосування у хімікотоксикологічному аналізі для виявлення та кількісного визначення зазначеної лікарської речовини. Відомий спосіб ТШХ-очистки витягів із крові та сечі, що містять доксиламін, шляхом їх нанесення на лінію старту хроматографічної пластини (паралельно на пластину наносять "свідок"), проведення елюювання хроматографічної пластини з використанням рухомих фаз: 1) хлороформ; 2) хлороформ - метанол (9:1), проявлення плями "свідка" реактивом Драгендорфа та елюювання доксиламіну 0,1 моль/л розчином кислоти хлористоводневої з зони хроматографічної пластини, що відповідає плямі "свідка" [Болотов, В.В. Хіміко-токсикологічний аналіз біологічного матеріалу на донорміл: метод, рекомендації / В.В. Болотов, І.М. Іванчук, Л.Ю. Клименко. - К., 2009. - 20 с.]. Недоліком описаного способу є низький ступінь елюювання доксиламіну з хроматографічної пластини та відносно велика кількість співекстрактивних речовин в отриманих елюатах. Задача корисної моделі полягає у створенні способу ТШХ-очистки витягів із біологічних рідин, що містять доксиламін, який би дозволяв збільшити ступінь елюювання доксиламіну з хроматографічної пластини та зменшити кількість співекстрактивних речовин в отриманих елюатах. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі деривативної ТШХ-очистки витягів із біологічних рідин, що містять доксиламін, проводять їх нанесення на лінію старту хроматографічної пластини (паралельно на пластину наносять "свідок"), елюювання хроматографічної пластини послідовно з використанням двох рухомих фаз та елюювання доксиламіну 0,1 моль/л розчином кислоти хлористоводневої з зони хроматографічної пластини, що відповідає плямі "свідка", корисною моделлю передбачено отримання четвертинної Nхлорамонієвої основи доксиламіну шляхом обробки досліджуваної проби та проби "свідка" на лінії старту хроматографічної пластини надлишком розчину натрію гіпохлориту в розчині натрію гідрокарбонату після елюювання пластини в хлороформі, використання суміші гександіетиловий етер (2:1) як другої рухомої фази та проявлення плями "свідка" 1 % розчином nамінодіетиланілінсульфату. Заявлений спосіб ґрунтується на отриманні четвертинної N-хлорамонієвої основи доксиламіну при обробці проби розчином натрію гіпохлориту в розчині натрію гідрокарбонату за схемою: + NaClO + NaHCO3 OH + Na 2CO3 35 40 45 Очистка витягів із крові та сечі, що містять доксиламін, проводиться з використанням методу реакційної (деривативної) хроматографії у тонкому шарі сорбенту, який передбачає отримання деривату досліджуваної речовини та встановлення його Rf після елюювання у відповідній системі розчинників та проявлення відповідним проявником. Експериментальним шляхом встановлено, що надлишок розчину натрію гіпохлориту (0,5 г/л активного хлору) в 6 % розчині натрію гідрокарбонату в умовах проведення заявленого способу не заважає проведенню очистки витягів із крові та сечі, що містять доксиламін, та проявленню плям "свідка", оскільки 1 % розчином n-амінодіетиланілінсульфату він проявляється на пластинах повільно (протягом 10 хвилин), має блідо-фіолетове забарвлення (на відміну від яскраво-рожевого для цільової речовини) та після елюювання його плями завжди знаходяться на лінії старту хроматографічної пластини. Заявлений спосіб здійснюють таким чином: необхідну кількість отриманого органічного витягу випаровують на водяній бані за температури 80 °C до повного видалення органічного 1 UA 106265 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 шару; сухий залишок розчиняють в ~0,5 мл хлороформу і кількісно наносять на лінію старту хроматографічної пластини "Sorbfil" ПТСХ-ПВ смугою шириною 2 см. Поряд наносять розчин "свідка" в точку. Пластину двічі елююють в хлороформі. Після висушування лінію старту хроматографічної пластини обробляють розчином натрію гіпохлориту (0,5 г/л активного хлору) в 6 % розчині натрію гідрокарбонату. Після висушування пластину елююють з використанням рухомої фази гексан-діетиловий етер (2:1), висушують, проявляють смугу "свідка" 1 % розчином n-амінодіетиланілінсульфату і спостерігають пляму яскраво-рожевого кольору в зоні Rf=0,3-0,4. За допомогою скальпеля навпроти плями "свідка" з пластини ретельно знімають сорбент з площі 3 см × 1 см в скляний флакон. У флакон додають 10,00 мл 0,1 моль/л розчину кислоти хлористоводневої і струшують протягом 5 хв., після чого фільтрують до мірної колби місткістю 10,0 мл і доводять об'єм розчину через фільтр елюентом до позначки. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. Експериментальним шляхом визначено ефективність елюювання доксиламіну з хроматографічної пластини та фонове поглинання blank-зразків крові та сечі в способі за прототипом. Для проведення експерименту було отримано по 5 органічних витягів (50,0 мл) для blankзразкiв крові та сечі, в кожний з яких було додано по 100 мкг доксиламіну сукцинату. Відміряли піпеткою 25,00 мл органічного витягу та випаровували на водяній бані за температури 80 °C до повного видалення органічного шару; сухий залишок розчиняли в ~0,5 мл хлороформу і кількісно наносили на лінію старту хроматографічної пластини "Sorbfil" ПТСХ-ПВ смугою шириною 2 см. Поряд наносили 10 мкл стандартного розчину "свідка" (концентрація 1 мг/мл) в точку. Пластину двічі елюювали в хлороформі. Після висушування пластину елюювали з використанням рухомої фази хлороформ - метанол (9:1), висушували, проявляли смугу "свідка" реактивом Драгендорфа і спостерігали пляму коричневого кольору у зоні Rf=0,5-0,7. За допомогою скальпеля навпроти плями "свідка" з пластини ретельно знімали сорбент з площі 3 см × 1 см в скляний флакон. У флакон відміряли піпеткою 10,00 мл 0,1 моль/л розчину кислоти хлористоводневої і струшували протягом 5 хв., після чого фільтрували до мірної колби місткістю 10,0 мл і доводили об'єм розчину через фільтр ("червона стрічка") елюентом до позначки (елюат). Хроматографування проводили в камері об'ємом 500 мл, в яку вносили 10 мл рухомої фази. Камеру насичували впродовж 30 хв. Довжина шляху пробігу рухомої фази становила 8 см. Середнє значення ступеня елюювання доксиламіну з хроматографічної пластини становить 90±3 %. Фонове поглинання blank-зразка крові та сечі становить 0,012 та 0,011 відповідно. Приклад 2. Експериментальним шляхом визначено ефективність елюювання доксиламіну з хроматографічної пластини та фонове поглинання blank-зразків крові та сечі в заявленому способі. Для проведення експерименту було отримано по 5 органічних витягів (50,0 мл) для blankзразків крові та сечі, в кожний з яких було додано по 100 мкг доксиламіну сукцинату. Відміряли піпеткою 25,00 мл органічного витягу та випаровували на водяній бані за температури 80 °C до повного видалення органічного шару; сухий залишок розчиняли в ~0,5 мл хлороформу і кількісно наносили на лінію старту хроматографічної пластини "Sorbfil" ПТСХ-ПВ смугою шириною 2 см. Поряд наносили 10 мкл стандартного розчину "свідка" (концентрація 1 мг/мл) в точку. Пластину двічі елюювали в хлороформі. Після висушування лінію старту хроматографічної пластини обробляли розчином натрію гіпохлориту (0,5 г/л активного хлору) в 6 % розчині натрію гідрокарбонату. Після висушування пластину елюювали з використанням рухомої фази гексан-діетиловий етер (2:1), висушували, проявляли смугу "свідка" 1 % розчином n-амінодіетиланілінсульфату і спостерігали пляму яскраво-рожевого кольору в зоні Rf=0,3-0,4. За допомогою скальпеля навпроти плями "свідка" з пластини ретельно знімали сорбент з площі 3 см × 1 см в скляний флакон. У флакон відміряли піпеткою 10,00 мл 0,1 моль/л розчину кислоти хлористоводневої і струшували протягом 5 хв., після чого фільтрували до мірної колби місткістю 10,0 мл і доводили об'єм розчину через фільтр ("червона стрічка") елюентом до позначки (елюат). Хроматографування проводили в камері об'ємом 500 мл, в яку вносили 10 мл рухомої фази. Камеру насичували впродовж 30 хв. Довжина шляху пробігу рухомої фази становила 8 см. Середнє значення ступеня елюювання доксиламіну з хроматографічної пластини становить 98±2 %. Фонове поглинання blank-зразка крові та сечі становить 0,003. Таким чином, заявлений спосіб деривативної ТШХ-очистки витягів із крові та сечі, що містять доксиламін є ефективним та специфічним по відношенню до компонентів blank-проби та 2 UA 106265 U може знайти застосування у хіміко-токсикологічному аналізі для виявлення та кількісного визначення зазначеної лікарської речовини. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 15 Спосіб деривативної ТШХ-очистки витягів із крові та сечі, що містять доксиламін, що включає їх нанесення на лінію старту хроматографічної пластини (паралельно на пластину наносять "свідок"), елюювання хроматографічної пластини послідовно з використанням двох рухомих фаз та елюювання доксиламіну 0,1 моль/л розчином кислоти хлористоводневої з зони хроматографічної пластини, що відповідає плямі "свідка", який відрізняється тим, що отримують четвертинну N-хлорамонієву основу доксиламіну шляхом обробки досліджуваної проби та проби "свідка" на лінії старту хроматографічної пластини надлишком розчину натрію гіпохлориту в розчині натрію гідрокарбонату після елюювання пластини в хлороформі, використовують суміш гексан-діетиловий етер (2:1) як другу рухому фазу та проявляють пляму "свідка" 1 % розчином n-амінодіетиланілінсульфату. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3