Спосіб одержання засобу з гіпоглікемічною дією з листя чорниці звичайної

Реферат: Спосіб одержання засобу з гіпоглікемічою дією включає екстракцію рослинної сировини 50 % розчином спирту етилового, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння. Як рослинну сировину використовують листя чорниці звичайної. Екстракцію проводять трикратно у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:10. Очищення проводять шляхом відстоювання та відокремлення надосадової рідини, яку піддають стерилізації, та додають в процесі сушіння інозитол у трикратній еквімолярній кількості у відношенні до загальної суми фенольних сполук. UA 106683 U (54) СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ЗАСОБУ З ГІПОГЛІКЕМІЧНОЮ ДІЄЮ З ЛИСТЯ ЧОРНИЦІ ЗВИЧАЙНОЇ UA 106683 U UA 106683 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі фармації та медицини, а саме до способів одержання біологічно активних речовин з природної сировини, зокрема до способів одержання лікарських засобів гіпоглікемічної та гіполіпідемічної дії з листя чорниці звичайної з додаванням аргініну, що впливають на вміст глюкози, продуктів обміну ліпідів у крові при лікуванні захворювань, пов'язаних з порушенням обмінних процесів, таких як цукровий діабет. Найближчим аналогом до корисної моделі є спосіб одержання лікувально-профілактичного гіпоглікемічного засобу з листя кизилу [1]. Зазначений спосіб полягає у послідовній екстракції 50 % етанолом, а потім водою очищеною листя кизилу, подрібненого до розміру часток 1,0-2,0 мм, з додатковим очищенням водного витягу і подальшим об'єднанням екстрактів і упарюванням досуха. Одержаний спиртово-водний екстракт являє собою сухий порошок світлокоричневого кольору зі слабким специфічним запахом. Недоліками найближчого аналога є використання нефармакопейної, нестандартизованої сировини. Оскільки засіб не стерилізують, то при зберіганні та використанні можуть виникати проблеми з мікробною забрудненістю лікарського засобу. В основу корисної моделі поставлена задача розробити високоефективний спосіб одержання біологічно активної композиції з високим цукрознижуючим ефектом. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб одержання засобу з гіпоглікемічною дією включає екстракцію рослинної сировини 50 % розчином спирту етилового, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння, згідно з корисною моделлю, що як рослинну сировину використовують листя чорниці звичайної, екстракцію проводять трикратно 50 % розчином спирту етилового у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:10, очищення проводять шляхом відстоювання та відокремлення надосадової рідини, яку піддають стерилізації, після чого у процесі сушіння екстракт змішують з інозитолом у трикратній еквімолярній кількості по відношенню до загальної суми фенольних сполук. В одержаному сухому екстракті з листя чорниці звичайної міститься не менше 20 % суми фенольних сполук у перерахунку на галову кислоту, не менше 13 % гідроксикоричних кислот у перерахунку на хлорогенову кислоту та не менше 1 % флавоноїдів у перерахунку на рутин [2, 3, 4]. Вибір листя чорниці звичайної, як сировини для одержання заявленого засобу, обумовлений значним вмістом у ньому фенольних сполук (гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин). Чорниця звичайна має достатню сировинну базу, вона широко розповсюджена в лісових фітоценозах Карпат та територій Північної України. Вибір екстрагенту для одержання екстракту здійснювали експериментальним шляхом [2]. Саме 50 % етанолом забезпечується оптимальна екстракція комплексу фенольних сполук з сировини, які й відповідають за гіпоглікемічну дію. Шляхом експериментів визначили також оптимальне співвідношення сировини до екстрагентів, яке для заявленого засобу становить 1:10 (із урахуванням коефіцієнта поглинання екстрагенту). Дане співвідношення є необхідним і достатнім для одержання засобу з гіпоглікемічною дією. Наведене співвідношення є оптимальним і у технологічному плані з точки зору одержання заявленого засобу у промислових умовах та раціонального використання спирту. Оскільки одержаний екстракт є досить гігроскопічним, то додавання інозитолу покращує технологічні характеристики екстракту. При цьому на відміну від інших цукрів він не підвищує рівень глюкози у крові при застосуванні екстрактів з його додаванням. Корисна модель пояснюється прикладами. Приклад 1. 500 г листя чорниці звичайної, подрібненого до розміру часток 1-2 мм, поміщали в колбу, заливали трьома літрами 50 % етанолу, екстрагували протягом доби при кімнатній температурі. Екстракцію повторювали тричі з новими порціями екстрагенту (1,0 л). Одержані витяги об'єднували, відстоювали протягом доби, відфільтровували та стерилізували. Фільтрат упарювали за допомогою ротаційного вакуум-випарного апарата до сухого екстракту з додаванням інозитолу у трикратній еквімолярній кількості по відношенню до загальної суми фенольних сполук у перерахунку на галову кислоту. Вихід сухого екстракту становить - 17 %. Приклад 2. Гіпоглікемічну активність сухого екстракту з листя чорниці звичайної вивчали на 18 – місячних самцях щурів лінії Wistar. Інсулінорезистентність моделювали утриманням тварин на дієті, збагаченою фруктозою (60,3 % фруктози, 18,3 % білка, 5,2 % жирів) [3]. Піддослідні тварини були розділені на три групи: 1) інтактні тварини, які утримувалися на стандартному раціоні віварію НФаУ; 2) тварини, які утримувалися шість тижнів на фруктозній дієті; 3) тварини, які утримувалися чотири тижні на фруктозній дієті та додатково два тижні на даній дієті зі 1 UA 106683 U 5 10 щоденним введенням сухого екстракту з листя чорниці з додаванням аргініну в дозі 2,5 мг на 100 г маси тіла. Тварин декапітовували під хлоразоло-уретановим наркозом. Об'єктом дослідження була сироватка крові. При виконанні експериментів дотримувалися "Загальних етичних принципів експериментів на тваринах" (Україна, 2001), гармонізованих з "Європейською конвенцією про захист хребетних тварин, що використовуються для експериментальних та інших наукових цілей" (Страсбург, 1985). Вміст глюкози, інсуліну, вільних жирних кислот (ВЖК) і триацилгліцеролів (ТАГ) визначали з використанням стандартних наборів фірми "Фелісіт-Діагностика" (Україна) та фірми "Lachema" (Чехія). Концентрації α-холестеролу (α-ХС) і β-холестеролу (β-ХС) визначали за допомогою стандартних ферментативних холестеролоксидазних наборів фірми Boehringer Mannheim GmbH Diagnostica (Німеччина), попередньо розділивши фракції ліпопротеїнів турбідиметричним методом [4]. Результати представлені в таблиці. 15 Таблиця Гіпоглікемічна активність досліджуваних екстрактів на тлі високофруктозної дієти (М±m, n=6) Показник Глюкоза, ммоль/л Інсулін, пг/мл ВЖК, ммоль/л ТАГ, ммоль/л α-ХС, ммоль/л β-ХС, ммоль/л Інтакт 4,7±0,1 1290±34 0,40±0,05 0,84±0,06 1,36±0,04 2,53±0,05 Дієта 14,5±0,2* 2920±41* 0,69±0,04* 2,59±0,11* 0,82±0,04* 3,73±0,07* Дієта + екстракт чорниці + аргінін 8,2±0,4*# 1987±45*# 0,54±0,03*# 1,65±0,08*# 1,14±0,06*# 3,16±0,06*# * - відхилення достовірно відносно інтакту (р  0,05), # - відхилення достовірно відносно "Дієти" (р  0,05) 20 25 30 35 40 45 Аналіз наведених в таблиці результатів досліду свідчить, що утримання щурів на збагаченій фруктозою дієті викликає більш ніж трьохкратне збільшення рівня глюкози в сироватці крові. В цей же час спостерігається гіперінсулінемія, що при одночасній гіперглікемії свідчить про нечутливість клітин до інсуліну, тобто про розвиток інсулінорезистентності. Зростання концентрації ТАГ, що спостерігається через шість тижнів експерименту, є наслідком мобілізації жиру з жирової тканини і посилення ендогенного синтезу ТАГ і ліпопротеїнів дуже низької щільності печінкою через ослаблення інгібуючої дії інсуліну на ліполіз. Значне падіння рівня αхолестеролу і підвищення вмісту β-холестеролу у даній групі щурів пов'язане з посиленням перенесення естерів холестеролу від ЛПВЩ до атерогенних апоВ-ліпопротеїнів і обумовлено накопиченням ТАГ. В результаті зазначених змін розвивається атерогенна дисліпідемія, характерна для метаболічного синдрому [5]. При цьому у тварин третьої групи, які приймали сухий екстракт з листя чорниці звичайної спостерігається достовірне зниження рівня глюкози на 43 % та інсуліну на 32 % у порівнянні з групою тварин, які мали високофруктозну дієту, що свідчить про гіпоглікемічну активність екстракту. Встановлено, що введення сухого екстракту з листя чорниці звичайної в комплексі з аргініном, проявляє нормалізуючи дію на метаболічні порушення на тлі високофруктозної дієти. Так значно знижуються концентрації α-холестеролу, β-холестеролу та триацилгліцеролів, що свідчить про гіполіпідемічну активність екстракту. Таким чином, корисна модель відзначається рядом переваг: 1) використання як екстрагента 50 % розчину етанолу, тобто спосіб доступний, екологічно безпечний, дешевий, такий що не вимагає роботи з отруйними та шкідливими для здоров'я людини реактивами; 2) використання як сировини листя чорниці, яка має достатню сировинну базу і широко розповсюджена на території України; 3) наявність вираженої гіпоглікемічної активності екстракту з листя чорниці звичайної з ізотинолом, одержаного за заявленим способом; 4) перспективність використання одержаного екстракту як лікарської субстанції для одержання різних лікарських форм; 2 UA 106683 U 5 10 15 20 25 5) нетоксичність екстракту, одержаного за заявленим способом, дозволяє використовувати його довгостроково при лікуванні за рекомендацією лікаря; 6) тривалий термін зберігання засобу, одержаного за заявленим способом. Джерело інформації: 1. Пат. на корисну модель № 89735 Україна, МПК А61К 36/40, А61К 3/10. Лікувальнопрофілактичний засіб із гіпоглікемічною дією з листя кизилу / В.А. Рибак, Л.М. Малоштан, О.В. Криворучко, В.А., В.М. Ковальов. - №u2013 14662; Заявл. 16.12.2013; Опубл. 25.04.2014, Бюл. № 8. - 4 с. 2. Дослідження фенольних сполук спиртового екстракту з листя брусниці звичайної / М.А. Комісаренко, А.С. Гейдеріх, А.М. Ковальова, О.М. Кошовий // Український журнал клінічної та лабораторної медицини. - 2012. - № 2. - С 24-26. 3. Endothelial dysfunction in high fructose containing diet fed rats: increased nitric oxide and decreased endothelin-1 levels in liver tissue / M. Altas, A. Var, K. Ozbilgin et al. // Dicle University Med School. - 2010. - V. 37, № 3. - P. 193-198. 4. Кейтс M. Техника липидологии. - 1975. - M.: Мир. - 322 с. 5. Загайко А.Л. Метаболічний синдром: механізми розвитку та перспективи антиоксидантної терапії: Монографія / А.Л. Загайко, Л.М. Вороніна, К.В. Стрельченко. - X.: Вид-во НФаУ: Золоті сторінки, 2007. - 216 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб одержання засобу з гіпоглікемічою дією, що включає екстракцію рослинної сировини 50 % розчином спирту етилового, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя чорниці звичайної, екстракцію проводять трикратно у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:10, очищення проводять шляхом відстоювання та відокремлення надосадової рідини, яку піддають стерилізації, та додають в процесі сушіння інозитол у трикратній еквімолярній кількості у відношенні до загальної суми фенольних сполук. Комп’ютерна верстка О. Рябко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3