Спосіб одержання лікарського засобу з гіпоглікемічною та гіполіпідемічною дією з листя брусниці звичайної

Реферат: Спосіб одержання засобу з гіпоглікемічною та гіполідемічною дією включає екстракцію рослинної сировини, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння. Як рослинну сировину використовують листя брусниці звичайної, екстракцію проводять трикратно 40-60 % розчином спирту етилового у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:6-1:10, очищення проводять шляхом відстоювання та відокремлення надосадової рідини, яку піддають стерилізації, та додають в процесі сушіння аргінін 2-4-кратною еквімолярною кількістю відносно до загальної суми фенольних сполук. UA 103358 U (12) UA 103358 U UA 103358 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до хіміко-фармацевтичної галузі, а саме до одержання з листя чорниці звичайної біологічно активних засобів рослинного походження з гіпоглікемічною дією. Цукровий діабет - глобальна медико-соціальна проблема. У розвинутих країнах світу цукровим діабетом хворіє від 5 до 12 % населення і за прогнозами рівень цього захворювання може збільшитися до 30-35 %. Крім гострих проявів цукрового діабету - гіперглікемії та кетонемії, тяжкими ускладненнями є ангіопатії, нефропатії, ретинопатії, нейропатії та синдром діабетичної стопи. У народній та науковій медицині в терапії цукрового діабету використовують природні джерела інуліну: бульби топінамбуру, жоржини, корені цикорію, оману, кульбаби тощо. Як цукрознижуючі засоби використовують лушпиння квасолі, пагони та листя чорниці, галегу тощо. Ці лікарські рослини зустрічаються у різних комбінаціях лікарських зборів, дієтичних та харчових добавках. Достатньо низька токсичність більшості таких лікарських зборів дозволяє призначати їх тривалими курсами та у деяких випадках сприяти зменшенню дози гіпоглікемічних препаратів. Але недоліком лікарських зборів рослинного походження є незручність при використанні збору хворими, що пов'язана з приготуванням відвару, відсутність стандартизації кінцевої лікарської форми тощо. Сьогодні є нагальна потреба у розробці високоефективного способу одержання біологічно активної композиції з більш високим цукрознижуючим ефектом зі стандартизованої сировини та з подальшою стандартизацією кінцевої лікарської форми. Найближчим за схожістю суттєвих ознак та результатом, що досягається при їх використанні, є спосіб одержання лікувально-профілактичного гіпоглікемічного засобу з листя кизилу [1]. Зазначений спосіб полягає у послідовній екстракції 50 % етанолом, а потім водою очищеного листя кизилу, подрібненого до розміру часток 1,0-2,0 мм, з додатковим очищенням водного витягу і подальшим об'єднанням екстрактів і упарюванням досуха. Одержаний спиртово-водний екстракт являє собою сухий порошок світло-коричневого кольору зі слабким специфічним запахом. Недоліками цього способу є використання не фармакопейної, не стандартизованої сировини. Оскільки засіб не стерилізують, то при зберіганні та використанні можуть виникати проблеми з мікробною забрудненістю лікарського засобу. Задача корисної моделі полягає у розробці високоефективного способу одержання біологічно активної композиції з високим цукрознижуючим ефектом. Поставлена задача вирішується таким чином, що спосіб одержання засобу з гіпоглікемічною дією включає екстракцію рослинної сировини 50 % розчином спирту етилового, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння. Згідно з корисною моделлю як рослинну сировину використовують листя чорниці звичайної, екстракцію проводять трикратно 50 % розчином спирту етилового у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:10, очищення проводять шляхом відстоювання та відокремлення надосадової рідини, яку піддають стерилізації, після чого у процесі сушіння екстракт змішують з інозитолом трикратною еквімолярною кількістю відносно до загальної суми фенольних сполук. В одержаному сухому екстракті з листя чорниці звичайної міститься не менше 20 % суми фенольних сполук у перерахунку на галову кислоту, не менше 13 % гідроксикоричних кислот у перерахунку на хлорогенову кислоту та не менше 1 % флавоноїдів у перерахунку на рутин [2, З, 4]. Вибір листя чорниці звичайної, як сировини для одержання заявленого засобу, обумовлений значним вмістом у ньому фенольних сполук (гідроксикоричних кислот, флавоноїдів, дубильних речовин). Чорниця звичайна має достатню сировинну базу, вона широко розповсюджена в лісових фітоценозах Карпат та територій Північної України. Вибір екстрагенту для одержання екстракту здійснювали експериментальним шляхом [2]. Саме 50 % етанолом забезпечується оптимальна екстракція комплексу фенольних сполук з сировини, які й відповідають за гіпоглікемічну дію. Шляхом експериментів визначили також оптимальне співвідношення сировини до екстрагентів, яке для заявленого засобу становить 1:10 (із урахуванням коефіцієнта поглинання екстрагенту). Дане співвідношення є необхідним і достатнім для одержання засобу з гіпоглікемічною дією. Наведене співвідношення є оптимальним і у технологічному плані з точки зору одержання заявленого засобу у промислових умовах та раціонального використання спирту. Оскільки одержаний екстракт є досить гігроскопічним, то додавання інозитолу покращує технологічні характеристики екстракту. При цьому на відміну від інших цукрів він не підвищує рівень глюкози у крові при застосуванні екстрактів з його додаванням. Корисна модель пояснюється прикладами. 60 1 UA 103358 U 5 10 15 20 25 30 Приклад 1. 500 г листя чорниці звичайної, подрібненого до розміру часток 1-2 мм, поміщали в колбу, заливали трьома літрами 50 % етанолу, екстрагували протягом доби при кімнатній температурі. Екстракцію повторювали тричі з новими порціями екстрагенту (1,0 л). Одержані витяги об'єднували, відстоювали протягом доби, відфільтровували та стерилізували. Фільтрат упарювали за допомогою ротаційного вакуум-випарного апарата до сухого екстракту з додаванням інозитолу трикратною еквімолярною кількістю відносно до загальної суми фенольних сполук у перерахунку на галову кислоту. Вихід сухого екстракту становить – 17 %. Приклад 2. Гіпоглікемічну активність сухого екстракту з листя чорниці звичайної вивчали на 18-місячних самцях щурів лінії Wistar. Інсулінорезистентність моделювали утриманням тварин на дієті, збагаченою фруктозою (60,3 % фруктози, 18,3 % білка, 5,2 % жирів) [5, 6]. Піддослідні тварини були розділені на п'ять груп: 1) інтактні тварини, які утримувалися на стандартному раціоні віварію НФаУ; 2) тварини, які утримувалися шість тижнів на фруктозній дієті; 3) тварини, які утримувалися чотири тижні на фруктозній дієті та додатково два тижні на даній дієті з щоденним введенням сухого екстракту з листя чорниці дозою 2,5 мг на 100 г маси тіла; 4) тварини, які утримувалися чотири тижні на фруктозній дієті та додатково два тижні на даній дієті з щоденним введенням сухого екстракту з листя чорниці з додаванням інозитолу дозою 2,5 мг на 100 г маси тіла. Тварин декапітовували під хлоразоло-уретановим наркозом. Об'єктом дослідження була сироватка крові. При виконанні експериментів дотримувалися "Загальних етичних принципів експериментів на тваринах" (Україна, 2001), гармонізованих з "Європейською конвенцією про захист хребетних тварин, що використовуються для експериментальних та інших наукових цілей" (Страсбург, 1985). Вміст глюкози, інсуліну і триацилгліцеролів (ТАГ) визначали з використанням стандартних наборів фірми "Фелісит-Діагностика" (Україна) та фірми "Lachema" (Чехія). Концентрації αхолестеролу (α-ХС) і β-холестеролу (β-XC) визначали за допомогою стандартних ферментативних холестеролоксидазних наборів фірми Boehringer Mannheim GmbH Diagnostica (Німеччина), попередньо розділивши фракції ліпопротеїнів турбідиметричним методом [7]. Вміст аргініну та цитруліну визначали фотометричними методами з використанням стандартних наборів реактивів. Для оцінки рівня ендогенного монооксиду нітрогену (NO) визначали вміст нітритів і нітратів спектрофотометрично за допомогою реактиву Грісса. Результати представлені в таблиці. Таблиця Гіпоглікемічна активність досліджуваних екстрактів на тлі високофруктозної дієти (М ± m, n=6) 1 Глюкоза, ммоль/л Інсулін, пг/мл ТАГ, ммоль/л α-XC, ммоль/л β-XC, ммоль/л Інтакт 4,6±0,1 1265±28 0,87±0,04 1,25±0,03 2,63±0,05 Дієта 13,6±0,2* 2875±46* 2,36±0,07* 0,72±0,04* 3,64±0,07 Дієта+чорниця Дієта+чорниця+інозитол 9,3±0,3*# 8,2±0,1*# 2335±38*# 2124±27*# 1,98±0,10*# 1,73±0,06*# 0,99±0,08*# 0,92±0,08*# 3,48±0,04*# 3,29±0,04*# * - відхилення достовірно відносно інтакту (р0,05), # - відхилення достовірно відносно "Дієти" (р0,05) 35 40 45 Аналіз наведених в таблиці результатів досліду свідчить, що утримання щурів на збагаченій фруктозою дієті викликає майже трикратне збільшення рівня глюкози в сироватці крові. В цей же час спостерігається гіперінсулінемія, що при одночасній гіперглікемії свідчить про нечутливість клітин до інсуліну, тобто про розвиток інсулінорезистентності. Зростання концентрації ТАГ, що спостерігається через шість тижнів експерименту, є наслідком мобілізації жиру з жирової тканини і посилення ендогенного синтезу ТАГ і ліпопротеїнів дуже низької щільності печінкою через ослаблення інгібуючої дії інсуліну на ліполіз. Встановлено, що введення сухого екстракту з листя чорниці звичайної, а також комплексу сухого екстракту з інозитолом проявляє нормалізуючу дію на метаболічні порушення на тлі високофруктозної дієти. Таким чином, заявлено новий спосіб одержання засобу з гіпоглікемічною активністю з листя чорниці звичайної з інозитолом, який відзначається рядом переваг: 2 UA 103358 U 5 10 15 20 25 30 35 1) простота виконання та можливість здійснення на стандартному обладнанні в промислових умовах України; 2) використання як екстрагент розчину етанолу, тобто спосіб доступний, екологічно безпечний, дешевий, такий що не вимагає роботи з отруйними та шкідливими для здоров'я людини реактивами; 3) використання як сировини листя брусниці звичайної, яка культивується та має достатню сировинну базу на території України; 4) наявність вираженої гіпоглікемічної активності екстракту з листя брусниці звичайної, одержаного за заявленим способом; 5) наявність вираженої гіполіпідемічної активності екстракту з листя брусниці звичайної, одержаного за заявленим способом; 6) перспективність використання одержаного екстракту як лікарської субстанції для одержання різних лікарських форм та тривалий термін зберігання засобу, одержаного заявленим способом. 7) нетоксичність екстракту, одержаного за заявленим способом, дозволяє використовувати його довгостроково при лікуванні за рекомендацією лікаря. Джерела інформації: 1. Пат. на корисну модель № 89735 Україна, МПК А61К 36/40, А61К 3/10. Лікувальнопрофілактичний засіб із гіпоглікемічною дією з листя кизилу / В.А. Рибак, Л.М. Малоштан, О.В. Криворучко, В.А., В.М. Ковальов. - № u 2013 14662; Заявл. 16.12.2013; Опубл. 25.04.2014, Бюл. № 8. -4 с. 2. Количев І. О. Вибір оптимального екстрагенту для створення нового лікарського засобу з листя чорниці звичайної /1. О. Количев, Т. О. Краснікова, О. М. Кошовий // Збірник наукових праць співробітників НМАПО ім. П. Л.Шупика. - 552014. -№ 4. -С. 287-291. 3. Дослідження фенольних сполук листя евкаліпта / О.М. Кошовий, A.M. Комісаренко, A.M. Ковальова, Л.М. Малоштан, І.М. Мудрик // Фармаком. - 2005. - № 2/3. - С 151-161. 4. Флавоноиды: Биохимия, биофизика, медицина / Ю. С. Тараховский, Ю. А. Ким, Б. С. Абдрасилов, Е. Н. Музафаров. - Пущино. -2013. - 310 с. 5. Endothelial dysfunction in high fructose containing diet fed rats: increased nitric oxide and decreased endothelin-1 levels in liver tissue / M. Altas, A. Var, K. Ozbilgin et al. // Dicle University Med School. - 2010. - V. 37, № 3. - P. 193-198. 6. Загайко А. Л. Метаболічний синдром: механізми розвитку та перспективи антиоксидантної терапії: Монографія / А. Л. Загайко, Л. М. Вороніна, К. В. Стрельченко. - X.: Вид-во НФаУ: Золоті сторінки, 2007. - 216 с 7. Кейтс М. Техника липидологии. - 1975. - М.: Мир. - 322 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 40 45 Спосіб одержання засобу з гіпоглікемічною та гіполідемічною дією, що включає екстракцію рослинної сировини, фільтрацію, упарювання, очищення та сушіння, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя брусниці звичайної, екстракцію проводять трикратно 40-60 % розчином спирту етилового у співвідношенні сировини до екстрагенту 1:61:10, очищення проводять шляхом відстоювання та відокремлення надосадової рідини, яку піддають стерилізації, та додають в процесі сушіння аргінін 2-4-кратною еквімолярною кількістю відносно до загальної суми фенольних сполук. Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3