Спосіб виявлення деяких похідних тетрациклічних антидепресантів у біологічному матеріалі

Реферат: Спосіб виявлення деяких похідних тетрациклічних антидепресантів (міасерину) у біологічному матеріалі здійснюють шляхом піддавання відповідного біологічного матеріалу рідинно-рідинній екстракції з наступним дослідженням методом хроматографії в тонких шарах сорбенту. Після нанесення на лінію старту трьох плям досліджуваного екстракту та стандартної речовини амітриптиліну, їх хроматографування проводять в відомих системах розчинників. Пластинку висушують до повного видалення запаху розчинників. Одну зону пластинки проявляють реактивом Драгендорфа по Муньє та розраховують R (відносн.), потім другу і третю плями проявляють двома модифікаціями реактиву Манделіна. Поява фіолетового забарвлення другої плями та помаранчевої третьої свідчить про наявність в екстракті міансерину. UA 107780 U (12) UA 107780 U UA 107780 U 5 10 Корисна модель належить до медицини, зокрема до визначення лікарських засобів у біологічному матеріалі. Сильнодіючі препарати антидепресивної дії представляють зацікавленість в хімікотоксикологічному відношенні. Передозування цими препаратами, вживання їх з метою суїциду як індивідуальних препаратів, так і в суміші з іншими препаратами, невпинно зростає. Одним з таких препаратів є міансерин - сполука з групи тетрациклічних антидепресантів, до якої належать також міртазапін та макротилін. Міансерин це 1, 2, 3, 4, 10, 14, в-гексагідро-2метилдибензо-[с,f]-піразіно-[1-а]азепіну гідрохлорид. Методів виявлення цієї групи антидепресантів, які б могли вирогідно виявляти їх в скринінгу, який здійснюється методом хроматографії в тонких шарах сорбенту, не існує. Реактиви візуалізатори, які застосовуються в скринінгу, не дають змоги вірогідно виявити цю групу лікарських засобів. Див. табл. 1. Таблиця 1 Забарвлення з реактивами Препарат Міасерин Міртазапін Мапротилін 15 Драгендорфа по Муньє помаранчеве помаранчеве помаранчеве 1 % розчин нінгідрину у ацетоні Маркі рожеве фіолетове буре Хроматографічна рухливість препаратів цієї групи теж не дає підстав для їх виявлення. Див. табл. 2. Таблиця 2 Препарат Міасерин Міртазапін Мапротилін 1 74 65 25 Величина hRm в системах 2 3 85 47 85 40 24 25 4 62 55 31 Системи: 1. Метанол - 25 % розчин амоніаку (100:1,5), 2. Етилацетат - метанол - 25 % розчин амоніаку (85:10:5), 3. Циклогексан - толуол - діетиламін (75:15:10), 4. Толуол - ацетон - етанол - 25 % розчин амоніаку (45:45:7,5:2,5). 20 25 30 35 Відомим є спосіб виявлення і визначення макротиліну методами газорідинної хроматографії та в тонких шарах сорбенту, де для виявлення антидепресантів використовують реактив Драгендорфа та пари йоду, що не дає змоги для їх вірогідного виявлення (П.М. Суханов, С.А. Шкляєв, В.В. Болотов. Применение тонкослойной и газожидкостной хроматографи для обнаружения и количественного определения макротилина // Фізіологічно активні речовини №2. - 2002. - С.34-37). Найбільш близьким та вибраним за прототип є спосіб проведення дослідження по розробці фізико-хімічних методів аналізу міансерину, в тому числі і методом хроматографії в тонких шарах сорбенту (Н.В. Гончарук, І.Й. Галькевич. Розробка методів міансерину // Фармацевтичний журнал №2. - 2008. - С. 58-61). Як реактиви-візуалізатори автори наводять реактиви Драгендорфа по Муньє та реактив Манделіна, який приготовлено згідно з джерелом (В.Ф. Крамаренко. Химико-токсиологичекий аналіз. Практикум. - Киев: "Вища школа", 1982. - 272 с). Недоліком цього способу є те, що виявлення стосується тільки міансерину та не беруться до уваги найближчі структурні аналоги з групи тетрациклічних антидепресантів. Крім цього, в теперішній час, реактив Манделіна може бути використано в модифікації, приведеній в джерелі (Clarke's Analysis of Drugs and Poisons in Pharmaceuticals, body fluids and postmortem material / Fourth Editions. Consulting Editions Anthony С Moffat, M. David Osselton, Brian Widdop / © Pharmaceutical Press. - 2011). Результати застосування цієї модифікації реактиву наведені в роботі (Петюнин Г.П., Чубенко А.В., Гузенко Н.В. Исследование некоторых лекарственных и наркотических препаратов - аналогов по структуре и действию методом хроматографии в тонких слоях сорбента // Теорія та практика судової експертизи і криміналістики: зб. наукових праць. - 2011. - Вип. 11. - С. 378-384). Для виявлення деяких препаратів, які наведені в таблиці 1 UA 107780 U 5 10 15 2, застосовують реактив Манделіна, в якому хроматографічну платівку перед нанесенням реактиву вносять в пари формальдегіду. В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу виявлення деяких похідних тетрациклічних антидепресантів у біологічному матеріалі, в якому за рахунок введення паралельного застосування двох модифікацій реактиву Манделіна, досягається отримання різнокольорових забарвлень міансерину та його структурних аналогів. Поставлена задача вирішується в способі виявлення деяких похідних тетрациклічних антидепресантів у біологічному матеріалі, який здійснюють шляхом піддавання відповідного біологічного матеріалу рідинно-рідинній екстракції з наступним дослідженням методом хроматографії в тонких шарах сорбенту, згідно з корисною моделлю, після нанесення на лінію старту трьох плям досліджуваного екстракту та стандартної речовини амітриптиліну, їх хроматографування проводять в відомих системах розчинників, пластинку висушують до повного видалення запаху розчинників, одну зону пластинки проявляють реактивом Драгендорфа по Муньє та розраховують R (відносн.), потім другу і третю плями проявляють двома модифікаціями реактиву Манделіна, поява фіолетового забарвлення другої плями та помаранчевої третьої, свідчить про наявність в екстракті міансерину. Крім цього, проведені дослідження по візуалізації вищенаведених препаратів з концентрованою сірчаною кислотою. Див табл. 3. Таблиця 3 Препарат Манделіна варіант 1 фіолетове помаранчеве зелено-синє Міасерин Міртазапін Мапротилін Забарвлення з реактивами Манделіна варіант 2 Конц. сірчана кислота помаранчеве фіолетове помаранчеве буре зелено-синє 20 З метою підвищення селективності виявлення міансерину були приведені відносні параметри хроматографічної рухливості з використанням зовнішнього стандарту амітриптиліну, вони розраховувалися як частка R (відносн.) діленого hRf (х) на дільник hRf (з.стандарт). Результати наведені в таблиці 4. 25 Таблиця 4 Препарат Амітриптилін Міасерин Міртазапін Мапротилін 1 51 74 65 25 Величина hRm та R(відносн.) в системах 2 3 0 91 0 88 0 670 1,45 85 0,93 47 0,53 62 1,27 85 0,93 40 0,45 55 0,49 24 0,26 25 0,28 31 4 0 0,92 0,52 0,46 Системи: 1. Метанол - 25 % амонію гідроксид (100:1,5), 2. Етилацетат - метанол - 25 % амонію гідроксид (85:10:5), 3. Циклогексан - толуол - діетиламін (75:15:10), 4. Толуол - ацетон - етанол - 25 % амонію гідроксид (45:45:7,5:2,5). 30 35 40 Спосіб, що заявляється, проводиться таким чином. 20 мл сечі пацієнта підкислюють хлороводневою кислотою до рН=1-2 і проводять екстракцію 20 мл діетилового ефіру. Верхній ефірний шар відокремлюють і використовують для визначення речовин кислої природи. Водну фазу підлужують 25 % розчином амоніаку до рН=910 і екстрагують двічі з 20 мл суміші хлороформ - 2-пропанол (9:1). Отриманий екстракт випарюють на повітрі і сухий залишок розчиняють у 0,5 мл хлороформу, 50 мкл наносять на лінію старту хроматографічної платівки "Сорбфіл". Після закінчення хроматографування в одній з систем 1-4 платівку проявляють реактивом Драгендорфа по Муньє та визначають величину hRf (відношення відстані, яка пройдена центром плями речовини до відстані, яка пройдена системою розчинників та помножена на 100). Якщо величини hRf речовин які досліджуються співпадають з табличними, а також відповідного забарвлення з реактивом (див. табл. 2) роблять попередній висновок про наявність лікарського засобу. Далі 50 мкл розчину екстракту та розчин внутрішнього стандарту амітриптиліну наносять на лінію старту 2 хроматографічних пластинок "Сорбфіл". Після закінчення хроматографування в 2 UA 107780 U 5 10 15 20 25 30 одній з систем розчинників 1-4, пластинку витягають, висушують та проявляють 1 пластинку реактивом Манделіна, фіксуючи забарвлення та величини hRf. Другу пластинку після висушування розміщують в парах формальдегіду в герметично зачиненій камері протягом 15 хвилин. В подальшому проявляють реактивом Манделіна. Отримані результати візуалізації порівнюють з кольором плями на першій платівці. Розраховують R(відносн.) для плями невідної речовини та внутрішнього стандарту, по яких здійснюють виявлення. Результати хроматографічної рухливості речовини, яку виявляють, та стандартної речовини повинні співпадати в межах 2 %. Приклад 1. Хворий X; 1986 р.н., токсикоман приймає за немедичним призначенням лікарські засоби різних фармакологічних груп. Проведення аналізу сечі дало можливість виявити присутність міансерину та макротиліну по значеннях R(відносн.) та забарвленню з реактивом Манделіна в двох модифікаціях та реакцією з 1 % розчином нінгідрину у ацетоні. Приклад 2. Хворий Z; 1964 р.н., помер вдома від прийому невідомого антидепресанту. Дослідження сечі трупу дозволило ідентифікувати макротилін по значеннях R (відносн.) та забарвленню з реактивом Манделіна в двох модифікаціях та реакцією з 1 % розчином нінгідрину у ацетоні. Таким чином, запропонований спосіб визначення міансерину дозволяє його надійно ідентифікувати серед інших тетрациклічних антидепресантів та невідомих лікарських сполук. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб виявлення деяких похідних тетрациклічних антидепресантів (міасерину) у біологічному матеріалі, який здійснюють шляхом піддавання відповідного біологічного матеріалу рідиннорідинній екстракції з наступним дослідженням методом хроматографії в тонких шарах сорбенту, який відрізняється тим, що після нанесення на лінію старту трьох плям досліджуваного екстракту та стандартної речовини амітриптиліну, їх хроматографування проводять в відомих системах розчинників, пластинку висушують до повного видалення запаху розчинників, одну зону пластинки проявляють реактивом Драгендорфа по Муньє та розраховують R (відносн.), потім другу і третю плями проявляють двома модифікаціями реактиву Манделіна, поява фіолетового забарвлення другої плями та помаранчевої третьої свідчить про наявність в екстракті міансерину. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3