Спосіб виявлення кетаміну та сильнодіючих лікарських засобів в біологічному матеріалі

Спосіб визначення кетаміну та сильнодіючих лікарських засобів в сечі людини (або рідині) шляхом їх екстракції та визначення шляхом застосування хроматографії, який відрізняється тим, що 3 его метаболитов и аналогов в биологических жидкостях //Судебно-медицинская экспертиза. - № 2. 1999. - С. 20-25]. Недоліком цього способу є те, що в разі присутності в одній пробі суміші контрольованої речовини (кетаміну) та лікарського засобу (наприклад, 64698 4 клофеліну) неможливо вірогідно встановити присутність в екстрактах, здобутих з сечі людини, останнього, так як його забарвлення з реактивом проявником та хроматографічна рухливість співпадає з вищенаведеними препаратами (табл. 2). Таблиця 2 Результати хроматографічного розподілу заборонених наркотиків та деяких лікарських засобів Речовина Кетамін Клофелін Димедрол Донорміл Трамадол Забарвлення Р-в Драгендорфа Розчин йодплатинату Помаранчеве Коричневе Помаранчеве Коричневе Помаранчеве Коричневе Помаранчеве Коричневе Помаранчеве Коричневе Система 1 - метанол, 25 % аміак (100:15). Система 2 - етилацетат, етанол, 25 % аміак (85:10:0,5). Недоліком цього способу є те, що в рекомендованих системах розчинників 1,2 не можливо підвищити ефективність розподілу для речовин, які підлягають аналізу. Найбільш близьким та вибраним за прототип є спосіб ідентифікації кетаміну та фенциклідину методом хроматографії в тонких шарах сорбенту, де ці препарати проявляються реактивами Драгендорфа та кислого розчину йодплатинату. Після застосування наведених реактивів-проявників неможливо однозначно зробити висновок про виявлення контрольованих похідних фенілциклогексиламіну (кетамін, трамадол) або лікарських засобів. [Г.П. Петюнін, Н.В. Гузенко. Визначення кетаміну методом хроматографії в тонких шарах сорбенту // Вісник фармації. - № 3 (51). - 2007. С.21-23.]. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу виявлення кетаміну та сильнодіючих лікарських засобів в біологічному матеріалі, в якому за рахунок введення нової міцелярної системи розчинників, досягається низька кореляції між хроматографічною рухливістю кетаміну та інших сильнодіючих лікарських засобів. Поставлена задача вирішується в способі визначення кетаміну шляхом їх екстракції та визначення шляхом застосування хроматографії та сильнодіючих лікарських засобів в біологічному матеріалі, згідно з корисною моделлю, визначення hRf в системах 1 67 66 70 67 68 2 88 81 78 69 86 здійснюють шляхом міцелярної тонкошарової хроматографії, при якій використовують систему розчинників - водний розчин Твін-80, до складу якого входять насичений розчин амонію ацетату та 25 % водного розчину аміаку у певному співвідношенні, в якому паралельно хроматографують речовину, що досліджується, та речовину-стандарт, і після проявлення хроматограм реактивом Драгендорфа по Муньє та розчином бромтимолового синього і отримання специфічного забарвлення, вираховують параметри хроматографічної рухливості, по яких здійснюють ідентифікацію. Визначення контрольованого наркотика - кетаміну, так і сильнодіючих лікарських засобів, здійснюють в сечі людини (або речовому доказі - алкогольних та безалкогольних напоях). Вибір розчинників здійснювали методом оптимізації рухомих фаз [С.Н. Штиков, Е.Г. Сумина, Н.В. Тюрина Мицеллярная тонкослойная хроматография: особенности и аналитические возможности // Рос. Хим. Журнал (Ж. Рос. Хим. Об-ва им. Д.И. Менделеева). - 2003. - т.XLVII. - №1. - C.199126). як елюент досліджували розчин неіонного (Твін-80) в воді, при концентраціях вище та нижче критичної концентрації міцелоутворення. Умови розподілу додатково варіювалися зміненням основності елюенту, введенням добавок пентанолу та різних електролітів. Усі хроматографічні вимірювання дублювались, відтворюваність знаходилась в межах 2 %. Склад опрацьованих систем наведено в таблиці 3. Таблиця 3 № системи -5 3 Водний розчин ТВІН-80 (510 моль/л) 4 5 6 7 8 Склад систем + 0,3 % 1-пентанолу (v|v) + 1,0 г оксалату амонію + 1,0 г нітрату амонію + 0,04 мл 25 % NH4OH + 0,04 мл нас.розчину ацетату амонію 5 64698 6 Продовження таблиці 3 № системи Склад систем 11 10 + 0,04 мл нас.розчину ацетату амонію + + 0,04 мл 25 % NH4OH + 0,04 мл нас.розчину ацетату амонію + + 0,25 мл 25 % NH4OH + 0,04 мл нас.розчину ацетату амонію + + 0,5 мл 25 % NH4OH 9 Введення в склад базової системи 3 модифікаторів (пентанолу, електролітів та водного розчину 25 % аміаку) дозволило зупинитися на системі 11. Результати хроматографічного розподілу наведено в таблиці 4. Таблиця 4 Результати хроматографічного розподілу контрольованих наркотиків та сильнодіючих лікарських засобів Речовина Кетамін Клофелін Димедрол Донорміл Трамадол 3 7 7 1 1 0 4 8 8 12 3 2 5 13 14 13 11 14 Візуалізація речовин проводилась за допомогою реактиву Драгендорфа по Мун'є. Спосіб, що заявляється проводиться таким чином. 20 мл сечі пацієнта (речового доказу - алкогольного або безалкогольного напою) підкислюють хлороводневою кислотою до рН=1-2 і проводять екстракцію 20 мл діетилового ефіру. Верхній ефірний шар відокремлюють і використовують для визначення речовин кислої природи. Водну фазу підлужують 25 % розчином аміаку до рН=9-10 і екстрагують двічі з 20 мл суміші хлороформ-2пропанол (9:1). Отриманий екстракт випарюють на повітрі і сухий залишок розчиняють у 0,5 мл хлороформу, 50 мкл наносять на лінію старту хроматографічної пластинки "Сорбфіл". Після закінчення хроматографування в системі 1 або 2 пластинку проявляють реактивом Драгендорфа по Муньє та визначають величину hRf (відношення відстані, яка пройдена центром плями речовини, до відста Величина hRfB системах 6 7 8 10 35 14 13 38 20 10 13 11 11 14 13 10 10 14 9 26 26 11 12 14 10 56 60 14 15 25 11 64 75 11 10 23 ні, яка пройдена системою розчинників та помножена на 100). При співпаданні величини hRf речовин, що досліджуються з табличними, а також відповідного забарвлення (див. табл. 1) роблять попередній висновок про наявність контрольованого наркотику або сильнодіючого лікарського засобу. Для остаточної ідентифікації 50 мкл розчину екстракту та стандартні розчини контрольованого наркотику (наприклад, кетаміну), лікарського засобу (наприклад, клофеліну) наносять на лінію старту двох хроматографічних пластинок "Сорбфіл". Після закінчення хроматографування в системі розчинників 11, пластини витягають, висушують та пластинку І проявляють реактивом Драгендорфа по Муньє, фіксуючи забарвлення та величини hRf. В подальшому при наявності плям в межах hRf 6080 пластинку II візуалізують розчином бромтимолового синього. Забарвлення, які утворюються, наведені в таблиці 5. Таблиця 5 Речовина Кетамін Клофелін Димедрол Донорміл Трамадол Забарвлення з бромтимоловим синім* Нема забарвлення Синє Синьо-фіолетове Нема забарвлення Сіро-синє * - реактив готується відповідно до Державної фармакопеї СРСР X, стор. 820 Приклад 1. Хворий X; 1978 р.н., токсикоман приймає за немедичним призначенням лікарський засіб "Кетамін". Проведення аналізу дало можливість виявити присутність кетаміну у сечі по зна ченнях hRf та забарвленню з реактивом Драгендорфа по Муньє і відсутністю забарвлення з розчином бромтимолового синього. 7 Приклад 2. Хворий У; історія хвороби №, 1969 р.н., звернувся до лікарні з підозрою на отруєння газованим напоєм, в якому можливо знаходився клофелін. Проведення аналізу сечі та речового доказу (газований напій) дало можливість виявити присутність клофеліну у сечі та речовому доказі по значеннях hRf та забарвленню з реактивом Драгендорфа по Муньє і синім забарвленням з розчином бромтимолового синього. Приклад 3. Як речовий доказ на дослідження представлена спирто-водна рідина з підозрою на Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 64698 8 присутність в ній димедролу. Проведення аналізу дало можливість виявити димедрол у рідині по значеннях hRf доказу та забарвленню з реактивом Драгендорфа по Муньє і синім забарвленням з розчином бромтимолового синього. Таким чином, запропонований спосіб визначення похідних фенілциклогексиламіну та сильнодіючих лікарських засобів дозволяє їх надійно ідентифікувати. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601