Спосіб вилучення аутопсійного матеріалу для патоморфологічної діагностики змін у макро- та мікроциркуляторному руслі оболонок мозку

Реферат: Спосіб вилучення аутопсійного матеріалу для патоморфологічної діагностики змін в макро- та мікроциркуляторному руслі оболонок мозку включає виготовлення патогістологічних препаратів та дослідження м'якої та павутинної мозкової оболонок. Здійснюють прецизійне пошарове препарування і вилучають окремі ділянки м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) та сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці, у вигляді макропрепаратів для виготовлення плівкових мікропрепаратів для подальшої фіксації, забарвлення та патогістологічного дослідження. UA 111484 U (12) UA 111484 U UA 111484 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, а саме патологічної анатомії, судової медицини, топографічної анатомії, і може бути використана для патоморфологічної діагностики гемомікроциркуляторної недостатності у мертвих новонароджених дітей, мертвонароджених плодів на основі дослідження мікроциркуляторного русла м'якої мозкової оболонки (ріа mater) головного мозку. Патологія макро- та мікроциркуляторного русла оболонок мозку та ішемія головного мозку у новонароджених є нео- та меринатологічною проблемою, яка характеризується гіпоксією (недостатнім постачанням кисню) або аноксією (повним припиненням подачі кисню) головного мозку. Ці захворювання тяжко діагностуються клінічно та морфологічно [Ярош О.А. та ін. Нервові хвороби: Пер. з рос. / О.А. Ярош, І.Ф.Криворучко, З.М. Драчова та інш. За ред. проф. О.А. Яроша. - Київ: Вища школа, 1993. - 487 c.]. Незважаючи на сучасні технології і новітні розробки в даній сфері [http://pediatrics.aappublications.org/ggi/content/full/124/1/268], нерідко цереброваскулярна патологія діагностується на аутопсії. Відомий спосіб здійснення патоморфологічної діагностики гемомікроциркуляторної недостатності, за яким через канюлю вводять в судину барвник, готують звичайні патогістологічні препарати, тобто поперечні зрізи м'якої і павутинної мозкової оболонок, що дають можливість бачити тільки фрагментарні зміни з використанням ін'єкційних методик (ін'єкція тушшю, фарбами) [Горчаков В.Н. Морфологические методы исследования сосудистого русла. - Новисибирск: Изд-во СО РАМН. - 1997. - 440 с.]. Забарвлення парафінових поперечних зрізів м'якої та павутинної мозкової оболонок здійснюють гематоксиліном та еозином, наклеюють на предметні скельця, депарафінізують, почергово занурюючи їх в дві порції клисолу (по 3 хв.). Проводять дегідратацію шляхом поетапного занурення їх в спирти знижуючої концентрації (96 %, 80 %, 60 %, 40 %), після чого - в дистильовану воду на 3-4 хв. Забарвлюють зрізи спочатку розчином ядерного (основного) барвника - гематоксиліну - впродовж 2 хв. Після цього зрізи переносять у водопровідну воду, яка має лужне середовище, для окислення гематоксиліну, потім споліскують в дистильованій воді. Забарвлюють зрізи розчином цитоплазмового (кислого) барвника - еозину - впродовж 0,5-1 хв. Надлишок барвника змивають дистильованою водою впродовж 1 хв. Забарвлені зрізи зневоднюють. Для цього їх занурюють в спирти зростаючої концентрації (40 %, 60 %, 80 %, 96 % - по 2 хв.). На зріз скляною паличкою наносять краплю розчину канадського бальзаму (полістиролу) і накривають знежиреним покривним скельцем. Недоліками способу-прототипу є його трудоємність та погана візуалізація формених елементів - останні не лише неякісно зафарбовуються, але частково або повністю замінюються фарбами, що утруднює диференціацію патологічних змін методом світлової мікроскопії, оскільки реальний стан кровоплину не можна побачити. Також за цим способом можливо візуалізувати тільки фрагментарні зміни в мікроциркуляції (локальні зміни капілярів та артеріол, а також венул і вен). Дані недоліки адекватно усуваються запропонованою корисною моделлю. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалити вилучення аутопсійного матеріалу для патоморфологічної діагностики змін в макро-мікроциркуляторному руслі оболонок мозку, щоб показати зміни мікроциркуляції по всій протяжності гемомікроциркуляторного русла в різних зонах півкуль головного мозку, а також мозочка, шляхом пошарового препарувального вилучення тканин мозкових оболонок як до фіксації в формаліні зразу після автопсії, так і після фіксації в формаліні. Поставлена задача вирішується тим, що у способі вилучення аутопсійного матеріалу для патоморфологічної діагностики змін в макро- та мікроциркуляторному руслі оболонок мозку, що включає виготовлення патогістологічних препаратів та дослідження м'якої та павутинної мозкової оболонок, згідно з корисною моделлю, здійснюють прецизійне пошарове препарування і вилучають окремі ділянки м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) та сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці, у вигляді макропрепаратів для виготовлення плівкових мікропрепаратів для подальшої фіксації, забарвлення та патогістологічного дослідження. Поставлена задача вирішується також тим, що вилучають плівкові макропрепарати оболонок мозку як зразу після автопсії, так і після фіксації у формаліні. Поставлена задача вирішується також тим, що вилучають плівкові макропрепарати окремих ділянок м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) із сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці, у вигляді фрагментів за розмірами предметного скла та виготовляють плівкові мікропрепарати діаметром 1-2 см, в яких знаходиться макро- і мікроциркуляторне русло оболонок мозку, методом світлової мікроскопії досліджують стан макро- і мікроциркуляторного русла головного мозку. 1 UA 111484 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 Цей спосіб дає можливості досліджувати стан макро- і мікроциркуляторного русла головного мозку з мінімальною травматизацією, тобто ближче до стану прижиттєвої гемомікроциркуляції [Mustafa Anjari, Association оf Lung Disease With Cerebral White Matter Abnormalities in Preterm Infants Mustafa Anjari, Serena J. Counsell, Latha Srinivasan, Joanna M. Allsop. Joseph V. Hajnal, Mary A. Rutherford, A. David Edwards // Pediatrics. - 2009. - Vol. 124. - № 1. - P. 268-276]. Таких пластинок може бути декілька, вилучених з різних часток мозку і мозочка. В процесі мікроскопічного дослідження судин виявляють значні розбіжності в структурі капілярів і судин, в різних зонах головного мозку [Miles Tsuji. Cerebral Intravascular Oxygenation Correlates with Mean Arterial Pressure in Critically I11 Premature Infants / Miles Tsuji, J. Philip Saul. Adre du Plessis, Eric Eichenwald, Jamil Sobh, Robert Crocker, Joseph J. Volpe // http://pediatrics, aappublications]. Важливо підкреслити, що нашим способом можна взяти оболонки мозку як до фіксації в формаліні, тобто зразу після автопсії, так і після фіксації в формаліні. Спосіб вилучення аутопсійного матеріалу для патоморфологічної діагностики змін в макромікроциркуляторному руслі оболонок мозку здійснюють таким чином. У процесі автопсії померлої дитини перших днів та місяців життя одразу після розтину черепа і вилучення мозку відпрепаровують окремі ділянки м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) у вигляді фрагментів із сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці. Ці фрагменти (розміром, приблизно, 2×2 см; 2×4 см) укладають на стандартне предметне скло, розправляють пензликом, який застосовується для акварельної фарби, покривають шаром вати, змоченої 10 % формаліном, і укладають у чашки Петрі. Пластинку опускають в 10 % нейтральний формалін для фіксації. З наступного дня протягом 1-2 діб проводять дегідратацію пластинки у спиртах наростаючої міцності зростаючої концентрації від 50 до 96°. Після добової фіксації при температурі не нижче 20 °C препарат переносять із чашки Петрі на скло, м'яко висушують фільтрувальним папером і проводять його дегідратацію у спиртах зростаючої концентрації від 50 % до 96 % (1-2 доби). Надалі висушують фільтрувальним папером та проводять просвітлення в ортоксилолі для покриття полістеролом і покривним скельцем. Потім вона висушується фільтрувальним папером на предметному склі, розправляється і просвітлюється ортоксилолом та закріплюється в полістирол. Пошарове препарування для виготовлення плівкових макро- і мікропрепаратів оболонок головного мозку можна застосовувати для дослідження пластинок м'якої і павутинної оболонок також після фіксації мозку у формаліні. Нами досліджено з застосуванням запропонованого способу зміни у макро- та мікроциркуляторному руслі головного мозку у 34 плодів, мертвонароджених та померлих новонароджених дітей (23 - чоловічої та 11 - жіночої статі) одразу після розтину черепа (у процесі автопсії померлої дитини перших днів та місяців життя) і вилучення мозку. Препарування м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) із сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці було здійснено без технічних труднощів. Виділені фрагменти (розміром 2×2 см та 2×4 см) укладали на стандартне предметне скло, розправляли пензликом, який застосовується для акварельної фарби, покривали шаром вати, змоченої 10 % формаліном, і укладали у чашки Петрі з 10 % нейтральним формаліном для фіксації. Цей спосіб дозволяє пофарбувати оболонки мозку із судинами, а потім досліджувати зміни в крові на всій протяжності мікроциркуляторного русла. Після виготовлення мікропрепаратів останні досліджували методом світлової мікроскопії, візуалізуючи та констатуючи патоморфологічні зміни мікроциркуляторного русла. Виявляли патоморфологічні зміни в капілярах, малих артеріях, венулах; описували всі можливі варіанти змін крові, до яких належать: стаз крові, початок мікротромбоутворення, мікротромби. Застосування запропонованого нами способу дозволяє покращити візуалізацію та диференціацію змін у макро- та мікроциркуляторному руслі оболонок мозку, що сприяє кращій діагностиці та диференційній діагностиці гемоваскулярних розладів. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 55 60 1. Спосіб вилучення аутопсійного матеріалу для патоморфологічної діагностики змін в макро- та мікроциркуляторному руслі оболонок мозку, що включає виготовлення патогістологічних препаратів та дослідження м'якої та павутинної мозкової оболонок, який відрізняється тим, що здійснюють прецизійне пошарове препарування і вилучають окремі ділянки м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) та сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці, у вигляді макропрепаратів для виготовлення плівкових мікропрепаратів для подальшої фіксації, забарвлення та патогістологічного дослідження. 2 UA 111484 U 5 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що вилучають плівкові макропрепарати оболонок мозку як після автопсії, так і після фіксації у формаліні. 3. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що вилучають плівкові макропрепарати окремих ділянок м'якої мозкової оболонки (ріа mater) разом із павутинною оболонкою (tunica arachnoidea) із сіткою судин, які знаходяться в самій м'якій оболонці, у вигляді фрагментів за розмірами предметного скла та виготовляють плівкові мікропрепарати діаметром 1-2 см, в яких знаходиться макро- та мікроциркуляторне русло оболонок мозку, і методом світлової мікроскопії досліджують стан макро- і мікроциркуляторного русла головного мозку. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3