Спосіб лікування передчасної недостатності яєчників в експерименті

Реферат: UA 115706 U UA 115706 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до області медицини, а саме до акушерства і гінекології, онкогінекології, і може бути використана для лікування хворих з синдромом передчасної недостатності яєчників (ПНЯ) після прийому хіміотерапії. ПНЯ - багатофакторний синдром, що характеризується вторинною аменореєю, високим рівнем гонадотропінів та низькою концентрацією естрогенів в сироватці крові у жінок віком до 40 років (Возможности восстановления фертильности у пациенток с преждевременной недостаточностью яичников (обзор литературы) /Н.А. Жахур, Л.А. Марченко, Л.Б. Бутарева, М.А. Шахова //Проблемы репродукции. - 2010. - № 1. - С. 40-48). Значне порушення функції яєчників відзначається після використання при лікуванні злоякісних новоутворень алкілуючих речовин або прокарбазину, при цьому, чим молодша пацієнтка під час хіміотерапії, тим вище ймовірність "виживання" окремих фолікулів [Committee opinion no. 605 /A New Approach to Primary Ovarian Insufficiency //Obstetrics & Gynecology, July 2014-Volume 124-Issue 1-p 193-197]. Цитостатична терапія, пригнічуючи функцію яєчників, істотно впливає і на характер менструального циклу. Так, у жінок молодше 25 років, які отримували в якості первинного лікування стандартну поліхіміотерапію з включенням алкілуючих препаратів, аменорея виникає в 28 % випадків, у жінок старше 25 років - в 86 % і у пацієнток старше 40 років - майже в 100 % спостережень. Подібні закономірності відзначені і при застосуванні променевої терапії: опромінення пахово-клубових областей в дозі більше 40-50 Гр викликає стійку аменорею у 40 % жінок до 20 років і у 90-95 % жінок у віці старше 35 років. Яєчникова недостатність триває від декількох місяців до 3 років у молодих жінок або стає незворотною у більшості пацієнток старше 35 років (Е.Б. Троик, Л.Э. Кокаева, И.В. Сергеева, Т.В. Шнейдер /Репродуктивное здоровье и беременность у больных с лимфомами Ходжкина //Детская медицина Северо-Запада. - 2012. Т. 3 № 3. - С. 46-48). Частота ПНЯ у жінок, які отримували в дитинстві лікування з приводу раку - 8 % жінок. У групі дівчаток, які отримали алкілуючі препарати і променеву терапію на область малого тазу, частка пацієнток з ПНЯ збільшується до 30 % (Нечушкина И.В. /Репродуктивное здоровье женщин, излеченных в детстве от злокачественных опухолей //Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, т. 22, № 4, 2011). Незважаючи на значні досягнення у вивченні основних причин передчасного виснаження оваріального резерву, найбільш складною задачею залишається пошук методів відновлення оваріального циклу. Відомий спосіб лікування ПНЯ з використанням препаратів естрогену [Menopause: Full Guideline. National Collaborating Centre for Women's and Children's Health London: National Institute for Health and Care Excellence (UK); 2015. - P. 11-12]. Недоліками цього способу є замісна направленість терапії, ефект якої закінчується після припинення лікування, та неможливість відновлення фертильності. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб лікування ПНЯ у онкологічних пацієнток шляхом аутотрансплантації кріоконсервованої оваріальної тканини в підшкірну клітковину передпліччя або в черевну стінку (патент RU № 2350290). При цьому попередньо формують зони васкуляризації поза полем опромінення шляхом виконання хірургічного розрізу шкіри довжиною 1,5 см з накладенням швів на четверо діб. Потім, грануляційну тканину, що розвинулася, і сформовану зону васкуляризації трансплантують фрагменти оваріальної тканини, орієнтовані кортикальним шаром до поверхні шкіри. Недоліки способу полягають у необхідності формування зони посиленої васкуляризації (область підшкірної клітковини передпліччя або черевної стінки), в яку трансплантують фрагменти оваріальної тканини. Спосіб застосовують до пацієнтів, які не мають власної яєчникової тканини. Він не розглядає трансплантацію тканин в збережені яєчники і вимагає проведення трансдермальної гормональної стимуляції після проведення аутотрансплантації. Також недоліком способу є необхідність виконання двох оперативних втручань, застосування обладнання для довгострокового зберігання яєчників та не прогнозована відповідь їх після трансплантації. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалення способу лікування передчасної недостатності яєчників, в якому за рахунок зміни матеріалу для трансплантації та характеру його введення, досягається можливість довгострокового відновлення та збереження функціональної активності яєчників у жінок, що приймали хіміотерапію. Поставлена задача вирішується в способі лікування передчасної недостатності яєчників в експерименті, який здійснюють шляхом трансплантації аутологічного біологічного матеріалу, згідно з корисною моделлю, внутрішньобрюшинно ін'єкційно, одноразово в терапевтично 1 UA 115706 U 5 10 15 20 25 30 ефективній дозі вводять 100000 мезенхімальні стовбурові клітини (МСК), виділених із жирової тканини. Таким чином, спосіб відновлює функціональну активність яєчників без використання складних технологій, і необхідності оперативного втручання. При системному введенні МСК вибірково репопулюють осередки тканинного пошкодження незалежно від типу тканини. Для використання МСК з метою аутотрансплантації необхідна попередня оцінка їх диференціювального потенціалу. Очевидно, що ефективність такого лікування багато в чому визначається збереженням їх диференційовочного потенціалу, який, в свою чергу, залежить від багатьох факторів (вік, генетичні особливості хворого, характер і поширеність патологічного процесу, медикаментозне передлікування, джерело отримання та особливості виділення та експансії МСК in vitro і т.д.). (Спивак И.В., Сухих Г.Т., Богданова И.М. и соавт. Генно-инженерные технологии и стволовые клетки //Физиолог. Журн. 2008, Т. 54, № 3. С. 99-100). Крім цього в фундаментальних дослідженнях показані альтернативні механізми дії клітинної терапії: імуномодулюючий і стимулюючий, зумовлені дією продуктів клітинного розпаду ([Uссelli А. Т., Moretta L., Pistoia V. 2008. Mesenchymal cells in health and disease. Nat. Rev. Immunol. 8: 726-736), паракринним (Яргин С.В. Стволовые клетки и клеточная терапия: на подступах к научному подходу //Цитология, 2010, Том 52, № 11. - С. 918-920). Спосіб, що заявляється, здійснюють таким чином. Внутрішньобрюшинно ін'єкційно вводять 100000 мезенхімальних стовбурових клітин (МСК), виділених із жирової тканини. Ефективність способу досліджували на експериментальних тваринах. В експерименті застосовували 40 мишей лінії BALB/c з масою 20,1±1,1 г, віком 3 місяці, з регулярним естральним циклом, яких поділяли на 3 групи по 10 тварин: І - контрольна група, II група з моделлю ПНЯ без лікування, III - група з моделлю ПНЯ і лікуванням препаратом "Кріоцелл" (по 0,01 г внутрішньом'язово 1 раз на добу протягом 5-ти діб), IV - група з моделлю ПНЯ і лікуванням МСК ЖТ(100000 клітин внутрішньобрюшинно). ПНЯ моделювали шляхом введення хіміопрепаратів бісульфату та циклофосфоміду (Amniotic fluid stem cells prevent follicle atresia and rescue fertility of mice with premature ovarian failure induced by chemotherapy /G. Y. Xiao, I.H. Liu, С.С. Cheng [et al.], //PLOS ONE. - 2014. - Vol. 9. N 9. - DOI: 10.1371/journal.pone.0106538.). Лікування починали через 3 тижні після хіміотерапії, коли у всіх мишей спостерігалася відсутність естрального циклу. Досліджували вагу тварин і характеристики естрального циклу за даними кольпоцитограми. Результати наведені в Табл. 1, 2. Таблиця 1 Вага тварин Група I (контроль) II (ПНЯ) III (ПНЯ, "Кріоцелл") IV (ПНЯ, МСК ЖТ) Час після лікування, тиждень 1 2 3 4 5 20,2±0,7 21,3±1,2 21,2±1,3 22,3±0,9 22,5±0,2 17,3±0,8* 17,0±0,6* 19,2±0,9* 20,2±0,7* 20,1±0,3* 17,1±0,6* 18,2±0,9* 21,0±0,8 22,3±0,5 22,1±0,8 18,1±0,6* 19,1±0,9* 22,3±0,8 22,1±0,5 22,4±0,8 6 22,5±0,6 22,4±0,8 22,9±0,9 22,6±0,9 7 22,0±1,2 23,2±0,9 22,5±0,8 22,7±0,8 Примітка:*Р