Спосіб визначення порушень процесів перекисного окиснення ліпідів і системи антиоксидантного захисту в бронхах у патогенезі експериментальної бронхіальної астми та їх корекції тіотриазоліном

Реферат: Спосіб визначення порушень процесів перекисного окиснення ліпідів і системи антиоксидантного захисту в бронхах та їх корекції включає відтворення бронхіальної астми та використання антиоксидантного засобу. У патогенезі експериментальної бронхіальної астми експериментальним тваринам з 23 доби вводять протягом 10 днів тіотриазолін з розрахунку 100 мг/кг внутрішньом'язово. UA 115792 U (12) UA 115792 U UA 115792 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до пульмонології, і може бути використана для корекції (захисту, лікування) захворювань органів дихання (БА). В усіх країнах світу, незалежно від рівня їх розвитку, бронхіальна астма продовжує залишатися серйозною соціальною та медичною проблемою. Це зумовлено підвищенням захворюваності серед дитячого і дорослого населення, ризиком інвалідизації та смертності, раннім початком хвороби, пізньою постановкою діагнозу, багатофакторністю захворювання. Згідно з літературними даними, бронхіальною астмою страждають у різних країнах світу від 1 до 10 % жителів, серед дитячого населення - 5-10 %, а помирають щорічно до 250 тис. осіб [Бронхіальна астма / Регеда М.С., Регеда М.М., Фурдичко Л.О., Колішецька М.А.; вид. п'яте, доп. та переробл. - Львів 2012. - 147 с.]. На сьогодні до кінця не з'ясований патогенез бронхіальної астми. Зокрема не до кінця вивченим залишається питання, яке стосується ролі і змін функціонального стану прооксидантної і антиоксидантної систем (АОС) у механізмах формування бронхіальної астми. Активність вільнорадикального окиснення (ВРО) займає суттєве місце в ґенезі і перебігу багатьох захворювань, в тому числі і бронхіальної астми. Відомий як найближчий аналог спосіб експериментальної терапії при бронхіальній астмі шляхом використання фулеренів - представників алотропних форм вуглецю як засобу патогенетичної терапії та оцінки кількісних показників вільнорадикального окислення ліпідів [Патент України на корисну модель № 72984, МПК А61С 17/00; опубл. 10.09.2012; Бюл. № 17]. Однак у способі-найближчому аналогу не визначені показники процесів перекисного окиснення ліпідів (ПОЛ) і системи антиоксидантного захисту в бронхах, що зумовлює недостатній антиоксидантний вплив застосовуваних засобів лікування, які до того ж є дороговартісними для широкого використання в експериментальній терапії. В основу корисної моделі поставлено задачу створити спосіб визначення порушень процесів перекисного окиснення ліпідів і системи антиоксидантного захисту в бронхах у патогенезі експериментальної бронхіальної астми із застосуванням препарату, що виявляє високі антиоксидантні, мембраностабілізуючі та протизапальні властивості. Поставлена задача вирішується тим, що у способі визначення порушень процесів перекисного окиснення ліпідів і системи антиоксидантного захисту в бронхах та їх корекції, що включає відтворення бронхіальної астми та використання антиоксидантного засобу, згідно з корисною моделлю, у патогенезі експериментальної бронхіальної астми експериментальним тваринам з 23 доби вводять протягом 10 днів тіотриазолін з розрахунку 100 мг/кг внутрішньом'язово. Патогенетичний потенціал активованих нейтрофілів і деяких інших клітин запалення в значній мірі визначається надмірною кількістю високоагресивних протеаз і вільних кисневих радикалів. ВРО, основним ініціатором якого є активні форми кисню, відіграє одну із ключових ролей в молекулярних механізмах бронхіальної астми. Актуальність досліджень реакції ПОЛ обумовлена важливою патогенетичною роллю ВРО як потужного фактора мембранодеструкції, а значить, більшості патологічних процесів. У запропонованій корисній моделі у динаміці формування експериментальної бронхіальної астми досліджено стан прооксидантної і антиоксидантної системи, протеїназо-інгібіторної системи, показники системи оксиду азоту в легенях та бронхах та встановлено антиоксидантний та імунокоригуючий вплив препарату тіотриазоліну на порушені метаболічні та імунологічні процеси. За умов формування різних патологічних процесів в організмі для корекції цих порушень перспективним є застосування антиоксидантів, серед яких особливе місце займає тіотриазолін. Антиоксидантна дія тіотриазоліну полягає в тому, що препарат активує антиоксидантні ферменти супероксиддисмутазу, каталазу, глутатіонпероксидазу, сприяє більш економній витраті ендогенного антиоксиданту - а-токоферолу, гальмує утворення проміжних та кінцевих продуктів ПОЛ - дієнових кон'югатів, трієнкетонів і малонового діальдегіду.Притаманні тіотриазоліну антиоксидантні властивості проявляються як протидією до зростання рівня ДК та МДА, так і посиленням антиоксидантного захисту. Цей препарат має також мембраностабілізуючі властивості, є імунокоректором, зумовлює протизапальний ефект [Вплив тіотриазоліну на стан про- та антиоксидантного балансу у м'яких тканинах пародонта за умов хронічного стресу/ Г.В. Опанасенко, О.О. Гончар, С.Б. Французова [та ін.] // Таврический медико-биологический вестник. - 2012. - Т. 15, № 3. - Ч. 1(59). - С. 246-249]. Спосіб здійснюють таким чином. Експериментальну бронхіальну астму відтворюють за методикою В.І. Бабича [Бронхіальна астма / [Регеда М.С., Регеда М.М., Фурдичко Л.О., Колішецька М.А.]. - Вид. п'яте, доп. та переробл. - Львів 2012. - 147 с.]. Попередньо тварин одноразово сенсибілізують нормальною кінською сироваткою (0,1 мл внутрішньочеревинно). Потім три дні підряд вводять підшкірно 0,1 мл нормальної кінської сироватки (НКС) з вбитою в 1 UA 115792 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 автоклаві БЦЖ (на 1 мг БЦЖ 1,0 мл НКС). Наступні 14 днів щоденно тварин протягом 30 хв в щільно закритій камері за допомогою розпилювача піддають інгаляції НКС по 1,0 мл сироватки на кожну морську свинку. Після закінчення цього терміну кожні 7 днів морським свинкам проводять інгаляції НКС. Для корекції порушень тваринам вводять препарат тіотриазолін з розрахунку 100 мг/кг внутрішньом'язово з 23 доби експерименту впродовж 10 днів. Експериментальні дослідження проводились на 90 морських свинках (самцях) масою 180220 г, поділених на 6 груп по 15 тварин у кожній. До 1 групи (контроль) відносили інтактні морські свинки, до II - морські свинки з експериментальною бронхіальною астмою (5-а доба), до III - морські свинки на 19-у добу модельного процесу, до IV - морські свинки з експериментальною бронхіальною астмою (26-а доба), до V - морські свинки на 33-ю добу експерименту (до лікування тіотриазоліном) та до VI - морські свинки з експериментальною бронхіальною астмою після застосування тіотриазоліну. З метою більш детального аналізу досліджуваних показників умовно виділяли два періоди розвитку експериментальної бронхіальної астми: ранній і пізній. Ранній період включав групу тварин із бронхіальною астмою на 5-у та 19-у доби експерименту, пізній - морські свинки на 26-у та 33-ю доби бронхіальної астми. Експериментальну модель бронхіальної астми відтворювали на морських свинках за методом В.І. Бабича (1979). Усіх експериментальних тварин утримували в стандартних умовах віварію Львівського національного медичного університету імені Данила Галицького. Евтаназію тварин проводили шляхом декапітації з дотриманням Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для експериментальних та інших наукових цілей (Страсбург, 1985). Стан вільнорадикального окиснення ліпідів у бронхах визначали за вмістом дієнових кон'югатів (ДК) за методом В.Г. Гаврилова, М.І. Мишкорудної [Спектрофотометрическое определение содержания гидроперекисей липидов в плазме крови / В.Б. Гаврилов, М.И. Мишкуродная // Лабораторная диагностика ишемической болезни сердца. К.: Здоровье, 1989. - С. 170-171] і малонового діальдегіду (МДА) за методом Е.Н. Коробейникова [Коробейникова Є.Н. Модификация определения продуктов ПОЛ в реакции с тиобарбитуратовой кислотой / С.Н. Коробейникова // Лаб. дело. - 1989. - № 7. - С. 8-10]. Ступінь активності АОС оцінювали за вмістом ферментів - супероксиддисмутази (СОД) за методом R. Fried [Fried R. Enzymatic and non-enzymaticassay of superoxide ifilii / R. Fried // Biochemie. - 1975. Vol. 57, № 5. - P. 657-660], каталази (КТ) за методом R. Holmes, C. Masters [Holmes R. Epigenetic interconversions of the multiple forms of mouse liver catalase / R. Holmes // FEBS Lett. - 1970. - Vol. 11, № 1. - P. 45-48] та глутатіонпероксидази (ГПО) за методом Архиповой О.Г. [Определение активности пероксидазы в крови. Методы исследования в профпатологии под. ред. О.Г. Архиповой. - М. Медицина, 1988. - С. 153]. Статистичне опрацювання одержаних даних здійснювали за методом Ст'юдента. Під час експериментальних досліджень спостерігали зміну активності системи антиоксидантного захисту та перекисного окиснення ліпідів у динаміці розвитку експериментальної бронхіальної астми. Вміст дієнових кон'югатів та малонового діальдегіду визначали для оцінки інтенсивності ПОЛ. ДК є первинними продуктами ПОЛ, МДА-кінцевим продуктом, і його частка складає 40 % усіх продуктів окиснення ліпідів. Результати проведених досліджень показали активізацію процесів ПОЛ у ранній період експериментальної моделі бронхіальної астми. Так, було зафіксовано підвищення вмісту дієнових кон'югатів у бронхах на 5-у і 19-у доби бронхіальної астми відповідно на 42,0 % (р