Спосіб діагностики структурно-функціонального стану цитоплазматичних мембран

Спосіб діагностики структурнофункціонального стану цитоплазматичних 3 28193 4 радикальних процесів в організмі. У той же час, він тканях// Сверхслабые свечения в биологии. -М.: не дає змоги визначити ушкодження Медицина. - 1972. - №39. - С.17-31.]. цитоплазматичної мембрани у разі відсутності у Деякі хімічні сполуки мають мембранотропні зразку біоматерфіалу неспарених електронів. властивості та здатні індукувати вільнорадикальні Загальним для способу, що пропонується, процеси, пригнічувати адаптаційні властивості методу електронної мікроскопії та ЕПР є організму та негативно впливати на гомеостаз біоматеріал, який досліджується (кров, гомогенати [Жуков В.И., Зайцева О.В., Пивень В.И. та зрізи тканин), у той же час, біофізичні методи, Молекулярные структурно-метаболические за якими оцінювали стан цитоплазматичних механизмы формирования радиомиметических мембран, дозволяють досліджувати сироватку та эффектов при действии на организм детергентов// сечу контингенту, який контактує із шкідливими Региональные проблемы охраны здоровья речовинами, робити комплексні висновки відносно населения Центрального Черноземья. - Белгород, ушкоджень як ліпідних, так і білкових мембранних 2000. - С.169-175.]. Все це у повній мірі структур та оцінювати їх конформаційні зміни, що відноситься до великої групи складних органічних віддзеркалюють функціональну активність клітини. сумішей на основі поліолів, тривалий вплив яких у Спосіб, що пропонується, є значно простішим субтоксичних дозах на цитоплазматичні мембрани порівняно з електронною мікроскопією та ЕПР та вивчали у експерименті. дозволяє комплексно оцінити як ушкодження Стан ліпідного бішару вивчали, визначаючи структури, так і функції біомембран контингенту, біохемілюмінесценцію мембран (БХЛ), яка що зазнає впливу ксенобіотиків. обумовлена вільнорадикальним окисленням В основу корисної моделі поставлено задачу ліпідних компонентів клітинних мембран. Здатність удосконалення способу діагностики структурнодо найбільш вираженого світіння належить функціонального стану цитоплазматичних ліпідам, при цьому для кожного органа або мембран, в якому за рахунок зміни характеру тканини є свої специфічні рівні люмінесценції, що дослідження досягається можливість комплексної змінюються під впливом різноманітних патогенів оцінки білково-ліпідних сполучень плазматичної або у разі виникнення структурно-метаболічних мембрани, що дає змогу оцінити її структуру та порушень. Хемілюмінесценція гомогенатів тканин функцію. або рідин з високою точністю віддзеркалює стан Поставлена задача вирішується в способі ліпідного шару клітинної мембрани, що забезпечує діагностики структурно-функціонального стану його гідрофобні властивості та щільність. цитоплазматичних мембран шляхом дослідження У той же час, відомо, що різноманітні функції біологічного матеріалу та визначення його біомембран обумовлені білками, що входять до їх структури, згідно з корисною моделлю, проводять складу. Мембранні білки розташовані або на біохемілюмінесцентні та фосфоресцентні поверхні цитоплазматичної мембрани, або у товщі дослідження, на основі змін співвідношення її гідрофобного шару. Однією з особливостей інтенсивності спалаху світіння та кінетики реакції мембранних білків є підвищений вміст оцінюють наявність та ступінь пошкодження гідрофобних кінцівок амінокислот у порівнянні з ліпідно-білкового шару цитоплазматичних гідрофільними [Дубинина Е.Е., Бурмистрова P.O., мембран. Хадиев Д.А., Поротов И.Г. Окислительная В основі виникнення багатьох патологічних модификация белка. Методы ее определения// станів лежать порушення мембрани та зміни Вопросы мед. химии. - 1996. - Т.41, Вып.1. - С.24внутрішньоклітинного метаболізму. Плазматичні 26]. Для кількісної характеристики фізичних мембрани відповідають не тільки за регуляцію властивостей біомембран (поверхневий заряд, транспорту речовин, а також і за підтримку трансмембранний потенціал, в’язкість, міжклітинних контактів шляхом активації конформаційне розташування білків, вміст води) рецепторів та специфічних ділянок ідентифікації. найчастіше використовують флуоресцентні мітки Визначення порушень структури клітинної та зонди [Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. мембрани є важливим прогностичним Флуоресцентные зонды в исследовании компонентом, що набуває особливої актуальності биологических мембран// - М.: Наука. -1989. - 320с. в умовах постійно зростаючого антропогенного Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я. Физиконавантаження, особливо при тривалому впливі химические основы фотобиологических субтоксичних доз ксенобіотиків. Взаємодія між процессов// - К.: Вища школа, 1989. - 196с]. ксенобіотиком та організмом починається з реакції Текучість та полярність мембран, визначали хімічного агента і рецепторів цитоплазматичної за ступенем занурення спинової мітки (1,8-АНС) і мембрани, які є білками або глікопротеідами, та кількості фотонів, що випромінює біоматеріал, за стає максимальною, коли усі рецептори зайняті допомогою рідинного сцинтиляційного лічильника. хімічною речовиною. Цей процес відбувається при Якщо текучість цитоплазматичної мембрани наявності конкурентних властивостей та зростає внаслідок окислювальної модифікації спорідненості до рецепторів (здатності білків та зниження щільності клітинної мембрани, ксенобіотика зв’язуватися з білками). В залежності кількість занурених спинових міток підвищується. від фізико-хімічних властивостей речовини вплив її Таким чином, показники текучості мембрани на рецептори опосередковує структурнореєструються по рівнях фотонів, кількість яких функціональні зміни клітини та її метаболізму зменшується співвідносно з ступенем [Журавлев А.И. Субстраты и механизмы пошкодження білкового шару цитоплазматичної эндогенной химической генерации возбужденных мембрани. За цим же принципом пропонується электронных состояний и сверхслабого свечения в визначати полярність мембран. Гідрофобні 5 28193 6 кінцівки амінокислот мембранних білків мають секунд. На основі змін співвідношення заряд (неполярні), на відміну від полярних інтенсивності спалаху світіння та кінетики реакції гідрофільних. У разі порушення білкового оцінювали наявність та ступінь пошкодження гідрофобного шару клітинної мембрани ліпідного шару цитоплазматичних мембран відбувається гасіння флуоресцентних імпульсів за (таблиця 1). рахунок підвищення у білково-ліпідному шарі мембрани кількості молекул води. Своєчасне визначення структурнофункціональних порушень біомембран дозволяє Динаміка БХЛ сироватки крові та гомогена попередити розвиток передпатологічних та щурів, що одержували органічні речовини у 1/100 патологічних станів у контингенту, що зазнав дії шкідливих речовин. Р Спосіб, що заявляється, здійснюють таким Вид БХЛ Контроль Л-303 чином. Сир Забір венозної крові контингенту, що контактує ВХЛ 123,5±7,2 242,5±17,0* із шкідливими речовинами, проводять вранці ІХЛ (Н2О2) 129,5±14,9 1338,4±23,5 натще, після чого отримують сироватку крові та ІХЛ (FeCL3) 653,6±11,9 1427,5±28,6 проводять дослідження біоматеріалу, який Люмінол-залежна ІХЛ (Н2О2) 1791,2±17,3 3564,7±44,2 термостатують у темновій камері при 37°С, після Люмінол-залежна ІХЛ (FeCL3) 1618,4±23,7 3946,3±45,5 чого вимірюють власну інтенсивність світіння Гомогенати печінки сироватки крові та індуковану перекисом водню у ВХЛ 143,2±7,9 253,6±9,8* автоматичному режимі за допомогою ІХЛ (Н2О2) 798,9±12,1 1336,5±15,7 автоматичного хемілюмінометра БХЛМЦ 10-1, ІХЛ (FeCL3) 795,5±14,9 1425,4±21,5 реєструють спалахи світіння та кінетику реакції Люмінол-залежна ІХЛ (Н2О2) 1823,6±16,8 3817,5±22,4 протягом 1,5-3 хвилин. При перевищенні Люмінол-залежна ІХЛ (FeCL3) 1746,8±20,5 3745,9±25,8 контрольних показників визначають наявність Гомогенати нирок активації перекісного окислення ліпідів (ПОЛ) ВХЛ 148,9±6,9 294,3±20,2* цитоплазматичних мембран. ІХЛ (Н2О2) 858,7±10,94 1465,7±18,8 Для підтвердження пошкодження мембрани ІХЛ (FeCL3) 809,6±9,8 1428,5±19,3 були проведені дослідження на щурах, що Люмінол-залежна ІХЛ (Н2О2) 1868,7±21,5 4178,9±62,3 отримували органічні речовини із встановленими Люмінол-залєжна ІХЛ (FeCL3) 1757,8±29,6 3951,4±54,6 мембранотропними властивостями (3, 6). Дослідження 1. - Показники структурнофункціонального стану цитоплазматичних Примітка: різниця показників вірогідна, (р