Спосіб оцінки функціонального стану мембран клітин крові у ліквідаторів наслідків аварії на чаес

Спосіб оцінки функціонального стану мембран клітин крові у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС, що передбачає забір крові та визначення пошкоджених мембран клітин крові у сольовому роз чині, який відрізняється тим, що в суспензію клітин крові Тромбоцитів/ додають двомолярний акриламід різної концентрації, перемішують отриману суміш протягом 5-10 хвилин, переносять її в кварцову кювету, реєструють інтенсивність флюоресценцм тромбоцитів на довжині хвилі Я,фа =330нм, при довжині збудження Винахід відноситься до медицини, а саме до лабораторної діагностики і біохімічної фармакологи і може бути використаним в ОЦІНЦІ пошкодження мембран клітин крові у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС Аналіз опублікованих даних про медикобюлопчні наслідки аварії на ЧАЕС свідчить про пошкодження клітинних мембран живих структур в умовах опромінення малими дозами радіації Морфологічні і функціональні порушення мембран іонізуючим випромшенням, виявляються практично відразу після опромінення і при дуже малих дозах При цьому спостерігається порушення бар'єрної функції мембран, яка забезпечує Спосіб полягає в фотоколориметричному визначенні гемоглобіну, який виділяють еритроцити, поміщені у сольовий розчин Недоліками способу прототипу є - залежність отриманих результатів від якості приготування ГІПОТОНІЧНИХ розчинів NaCI, - помилка в дотримуванні строгого співвідношення ГІПОТОНІЧНОГО розчину і еритроцитів, - коливання розмірів еритроцитів в залежності від їх віку, - порушення умов інкубації еритроцитів в гіпотонічному розчині, - відсутність характеристик білково-ліпідного контакту мембран клітин крові, які змінюються в умовах іонізуючого опромінення малими дозами Завдання, яке вирішується в даному винаході, полягає в ОЦІНЦІ стану структури білкових молекул, крихкість та ЩІЛЬНІСТЬ їх упаковки в мембранах клітин крові ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС і здатності їх до дифузії нейтральних молекул - гасителів білкової флюоресценцм Технічний результат, який досягається, полягає в підвищенні точності діагностики, а саме, ранньої діагностики пошкодження мембран тромбоцитів Поставлена задача вирішується завдяки тому, що у відомому способі оцінки крихкості еритроцитів, що передбачає забір крові та визначення ПОСТІЙНІСТЬ і розподіл в КЛІТИНІ її компонентів Проникність клітин епідермісу змінюється вже через 1 секунду після опромінення, в результаті безпосереднього ушкодження плазматичних мембран Зміни мембран в тимоцитах спостерігали вже через 1 хвилину після опромінення в дозах 0,2-0,4Гр Найбільш близьким до запропонованого способу, обраним нами в якості прототипу є спосіб оцінки крихкості еритроцитів колориметричним методом з обчисленням гемолітичного наростання, що включає вивчення властивостей мембран клітин крові в гіпотонічному розчині [1] Я,3б = 286 нм, розраховують константу ШтернаФольмера, оцінюють функціональний стан мембран клітин крові у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС ю (О 62752 пошкоджених мембран клітин крові у сольовому розчині, згідно винаходу в суспензію клітин крові (тромбоцитів) додають двохмолярний акриламід різної концентрації, перемішують отриману суміш на протязі 5-10 хвилин, переносять м в кварцову кювету, реєструють інтенсивність флюоресценцм тромбоцитів на довжині хвилі ЛфЛ =330нм, при довжині збудження Л з б =286нм, розраховують константу Штерна-Фольмера, оцінюють функціональний стан мембран клітин крові (тромбоцитів) у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС ВІДМІННОЮ особливістю способу оцінки функціонального стану мембран клітин крові (тромбоцитів) у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС є те, що визначають константу Штерна-Фольмера По даним літератури такий спосіб оцінки функціонального стану мембран тромбоцитів у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС не відомий Спосіб здійснюється наступним чином в отриманій суспензії тромбоцитів визначають вміст білка по методу Лаурі для оцінки концентрації їх в досліджуваній суспензії Потім 4мл суспензії тромбоцитів і фізрозчин з концентрацією по білку 2мг/мл поміщають в кварцеву кювету з довжиною оптичного шляху 1см і реєструють інтенсивність флюоресценцм тромбоцитів на довжині хвилі ЛфЛ =330нм, при довжині збудження Л з б =286нм Досліджуваний розчин переносять в скляну ємкість з магнітним помішувачем і при помішуванні суспензії тромбоцитів, додають 20мкл двухмолярного акриламіду Після помішування отриманої суміші на протязі 5-10 хвилин, переносять вказану суміш суспензії тромбоцитів з акриламідом в кварцову кювету і реєструють інтенсивність м флюоресценцм Для визначення достовірного значення константи Штерна-Фольмера проводять серію вимірів інтенсивності флюоресценцм для сумішей суспензій тромбоцитів (концентрація по білку 2мг/мл) з добавкою акриламіду в концентраціях 20мкл, 40мкл, бОмкл ВІДПОВІДНО Отримані значення ряду інтенсивності флюоресценцм при вказаних концентраціях акриламіду використовують для розрахунку констант гашення флюоресценцм Штерна-Фольмера по формулі Ksv = (Fo/Fn-1) / [Q], де Fo і Fn - інтенсивність флюоресценцм суспензії Т до і після введення розчину акриламіду, ВІДПОВІДНО, [Q] - концентрація добавленого гасителя - акриламіду Принцип способу полягає в наступному В умовах патології доступ дифузійного гасителя акриламіда до флюорофор - триптофанілам, глубинних або поверхневих мембран тромбоцитів, змінюється в результаті ущільнення або розрихлення білкових структур мембран При цьому інтенсивність флюоресценцм зменшується (при ущільненні білкових структур) або збільшується (при розрихленні білкових структур) в порівнянні з нормальним станом бюмембран (Ksv = 28,0+1,0 моль 1 ) По запропонованому способу було обстежено 65 ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС з ранніми термінами участі в аварії Спосіб був випробуваний на базі госпіталю В МУ СБ України і ІФТ АМН України, що дає право рекомендувати його для оцінки стану мембран тромбоцитів з метою ранньої діагностики їх пошкодження у ліквідаторів наслідків аварії на ЧАЕС КЛІНІЧНІ приклади Результати визначення величини констант гашення Штерна-Фольмера (Ksv) для тромбоцитів крові ЛНА на ЧАЕС Ksvi моль 1 KSV2 моль 1 Ksv3 моль 1 233 277 212 4,4 4,7 5,0 14,8 11,5 15,7 16,6 Контроль 27 10 28 85 29 № зразка Ksv М ± m моль 1 4,7+0,3 15,7+0,9 10,0+1,5 28,0+1,0 Література 1 Руководство по КЛІНІЧНИМ лабораторним дослідженням під ред Предтеч енського В Е , 1961 - С 963 Комп'ютерна верстка Н Кураєва Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119