Засіб для лікування амілоїдозу, спосіб лікування амілоїдозу

1. Применение 4'-йод-4'-деоксидоксорубицина и его фармацевти чески приемлемых солей в качестве средства для лечения амилоидоза. 2. Способ лечения амилоидоза, отличающийся тем, что он включает введение пациенту терапевтически эффективного количества 4'-йод-4'деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что 4'йод-4'-деоксидоксорубицин вводят пациенту внутривенно при еженедельной дозировке, варьирующей от 15 мг/м 2 до 30 мг/м 2 площади тела в виде раствора, содержаще го фармацевтически приемлемые носители или разбавители, в те чение периода времени в интервале от 2 до 4 недель. (19) (21) 95058382 (22) 29.07.1994 (24) 15.11.2000 (31) MI 93 A 001800; MI 94 A 000621 (32) 06.08.1993; 31.03.1994 (33) IT; IT (85) 06.05.1995 (86) РСТ/ЕР94/02511, 29.07.1994 (46) 15.11.2000, Бюл. № 6, 2000 р. (72) Мерлiнi Джампаоло (IT), Джаннi Лука (IT) (73) ПОЛIКЛIНIКО САН МАТТЕО, IС ТIТУТО ДI РIКОВЕРО Е КУРА А КАРАТТЕРЕ ШИЕНТIФIКО ДI ДIРIТТО ПУБЛIКО (IT), IСТIТУТО НАЦIОНАЛЄ ПЕР ЛО СТУДIО Е ЛА КУРА ДЕI ТУ МОРI (IT) (56) R.A. Gambetta et al./Protein kinase C activation and lipid peroxidation by doxorubicin analogues//"Tumori", 1989, vol. 75, № 4, p. 358–361. D. Gabuzda et al./Ingibition of beta-amyloid production by activation of protein kinase C//"Journal of Neurochemistry", 1993, vol. 61, № 6, p. 2326– 2329. 29461 доз болезни Альцгеймера и синдрома Дауна и т.п. Итак, неожиданно было уста новлено, что IDX, и, в частности, его гидрохлорид, является активным в том смысле, что он вызывает разложение амилоидных фибрилл. Взаимодействие лекарственный препарат/ фибрилла является основой успешного клинического результата, наблюдаемого у пациентов, больных амилоидозом. В связи с тем, что известна структура их в ви де бета-параллельных пластов, общая для всех видов амилоидоза, 4'-йод-4'деоксидоксорубицин представляется перспективным для лечения всех видов амилоидоза и, в частности, болезни Альцгеймера. Все фибриллы, инкубированные с IDX, показали интенсивную флуо ресценцию, в то время, как соответствующие фибриллы, термостатированные с DOX, не обнаружили заметной флуоресценции. Ингибирование образования инсулиновой фибриллы "in vitro" 10 мг коммерческого бычьего инсулина, суспендированного в 1 мл (1,74 х 10-3 М) 5% уксусной кислоты, инкубировались в течение двух часов при 85оС до образования прозрачного геля. После замораживания при -80оС, нагревания до 37оС и повто рения этой процедуры 5 раз фибриллы подвергались центрифугированию в микроцентрифуге. Производилось добавление IDX и DX в различных молярных отношениях к фибриллярному белковому предшествующе му соединению (инсулину). (IDX–D X: ин сулин; 1:2, 1:4, 1:8). IDX, а не DX, полностью ингибировал образование амилоидных фибрилл при молярных соотношениях 1:1 и 1:2 и частично при молярном отноше нии 1:4. Испытания показывают, что ID X ингибирует фибриллогенез "in vitro". Экстракция гликоламиногликанов (GAGs) из амилоидных фибрилл и оценка их связывания применением IDX CAGs выделялись из амилоидных фибрилл с применением ионообменной хроматографии в присутствии 6М мочевины. Метод осуществлялся с использованием жидкостной хроматографии быстрого разрешения с колонкой Mono Q (Pharmacia). Фибриллы раство рялись в 50 мМ фосфатного буфера с рН 5, содержаще го 6М мочевины и 0,2% CHAPS. Выделение производилось при 0–5 молярном градиенте NaCl. При использовании этого метода белковые фибрилльные компоненты выделялись из гликозаминогликанов (дерматан и гепаран сульфат) без какой-либо необратимой денатурации. Выделенный белковый компонент подтверждает высокое сродство для IDX, наблюдаемое в природных фибриллах. Результа ты этих испытаний показывают, что гли козаминогликаны, хо тя и являются наиболее распространенными компонента ми амилоидных фибрилл, не являются необхо димыми для связывания с IDX. На основе полученных результатов можно сделать заключение, что IDX и его фармацевтически приемлемые соли могут успешно использоваться для лечения пациентов, страдающих от амилоидоза. Причем осуществляется паренте рально в виде соответствующи х инъецируемых водных растворов. Названные растворы могут быть получены с применением стандартного мето да в присутствии обычных носителей и/или разбавите лей (см., например, публикацию L. Guanni и др. "Активность и токсичность 4'-йод-4'-деоксидокорубицина у пациентов с прогрессирующим раком грудной железы" Annals of Oncology 2: 719–725, 1991). Экспериментальные данные, относящиеся к соединению IDX с амилоидными фибриллами различных биохимических композиций Предварительно определенное количество амилоидных фибрил (1 мг/мл) термостатировалось с различными концентрациями гидрохлорида IDX. Инкубирова ние осуществлялось в фи зиологическом растворе в течение 2 часов, при этом система подвергалась постоянному спокойному перемеши ванию. Затем фибриллы центрифугировались при 5000 об/мин и проводилось определение оптической плотности всплывшей части при 478 нм. Процедура промывания повторялась три раза. После окончательного эта па центрифугирования осуществлялся количественный и качественный анализ связи с фибриллами с использованием таблетирования. Количественный анализ: Таблетка суспендировалась в фосфатном буферном растворе (ФБР) и затем термостатировалась в течение ночи с фер ментом протеазы. Такая обработка вызывает полный гидролиз белков. Количество связанного фибриллами IDX может быть измерено в всплывшем слое жидкости спектрофото метрированием при 478 нм. Испытания показали связанные 4 ± 2 г IDX на 1 мг фибрилл. Приведенные данные были получены при исследовании амилоидных фибрилл двух пациентов (ND и CAT), страдающих амилоидозом. Качественный анализ: Качественный анализ, прове денный с использованием иммунофлюоресцентного микроскопа, был осуществлен с применением спектрофлюориметрических свойств IDX. Был определен состав из следующих фибрилл: легкие иммуноглобулиновые цепочки (AL) амилоид A (AA) b 2 – микроглобулин (ABz M) b – протеин (AB) трансти ретин (Вар. Met. 30) (ATTR). Фибриллы инкубировались с 10-7 М ID X и с DOX в 0,15 М-ом растворе NaCl в течение 1 часа и экстенсивно промывались 0,15 М раствором NaCl. Характерная антрациклиновая флуоресценция оценивалась возбуждением при 484 нм и отсчетом при 610 нм. 2 29461 Дозы могут вар ьироваться от 5 до 150 мг/м 2 площади тела в неделю при внутривенном введении. Предпочтительными вариантами дозировок являются от 15 мг/м 2 до 30 мг/м 2 площади тела в неделю при внутривенном введении в течение двух-че тырех недель. Ниже даются основные клинические данные, касающиеся 5 пациентов. Пациент № 1. Этот случай относится к пациенту мужского пола ((DEP) 45 лет, страдающе му множественной миеломой (IgAl) и амилоидозом AL с ши роко распространенным кожным и мышечным разложением. В июле 1991 г. он перенес аутогенную пересадку костного мозга. Ему была назначена внутривенная дозировка IDX в 190 мг в течение 4 часов. Уже на следующее утро у пациента наблюдалось значительное улучшение кожи и подвижности конечностей. В течение следующих дней наблюдалось большое количество выделяемых с мочой амилоидозных белковых фрагментов наряду со значительным снижением амилоидных отложений в коже и отложений на уровне межжелудочковой сердечной перегородки (с 13 до 10 мм). Ячеистое улучшение в подвижности конечностей и в амилоидных отложениях сохранялись в течение следующи х шести месяцев без дальнейшего лечения. Пациент № 2. Этот случай касается пациента мужского пола (MAN) 57 лет, страдающего от амилоидоза AL (Ig Al) с обширным поражением желудочно-кишечного тракта (8–10 диарейных опорожнений в день), подвергшемуся значительной потере веса в 15 кг за шесть месяцев (вес 64 кг) и с признаками нефротического симпто мокомплекса (протеинурия 7 г/день). Он подвергался лечению шестью циклами мельфа лана и преднизона, закончившемуся в январе 1991 г. без какого-либо результа та. В феврале 1992 г. его пролечили двумя дозами (80 и 100 мг/м 2) IDX. Непосредственно после лечения наблюдались ячеичное ухудшение диареи, частично регулируемое соматости тином (зарегистрированный товарный знак), и протеинурии (41 г/день), однако в течение последующи х месяцев состояние внутренних органов брюшной полости постепенно улучшалось с ячеистым снижением в кишечных опорожнениях (3–4 раза/день). Пациент вновь восстановил вес (68 кг) и протеинурия восстановилась приблизительно до 4 г/день. Общее состояние пациента значительно улучши лось до такой степени, что он имел возможность вернуться к работе. Пациент №3 Это случай относится к пациенту женского пола (GAB), страдающе му от амилоидоза (IgAl), главным образом, почечного расположения [нефроти ческий симптомокомплекс с протеинурией (7 г/день)] и с селезеночным расположением, диагности рованным в 1991 г. С декабря 1991 г. по май 1992 г. пациент подвергался лечению алкилирующи ми агентами без какого-либо улучшения. В июне пациенту было сделано сцинтиграфи ческое исследование на амилоидные отложения с применением 131I–SAP, которое подтвердило их почечное и селезеночное расположение. В июле 1992 г. пациент подвергся лечению IDX при внутривенной дозе 30 мг/м 2 в неделю в течение двух недель и 15 и 20 мг/м 2 в последующие два приема. После первоначального повышения протеинурия снизилась до 6 г/день и эта величина сохранялась в те чение последующих шести месяцев. Пациент № 4. Этот случай относится к пациенту мужского пола (GRO) в возрасте 70 лет, страдающе му плазмацитомой и амилоидозом AL (IgGK). Диагноз был поставлен в июле 1991 г., когда пациент начал жаловаться на интенсивную боль в крестцовой области, распространяющуюся на левую нижнюю конечность, такую, что создавалась трудность при хождении. Инструментальное исследование показало присутствие твердой массы диаметром около 10 см, определяющей разрушение одной стороны крестца и левой подвздошной области, обладающей распространяющимся действием в тазовой полости, проникающей в позвоночный канал и пропитывающей ягодичные мышцы. Исследование биопсии показало наличие амилоидомы. Между октябрем 1991 и январем 1992 г. пациент подвергался лечению кобальтом в количестве 75 сеансов с общим облучением 50 Грей, а в марте 1992 г. был начат цикл химиотерапевтического лечения циклофосфамидом при 500 мг/день в течение 5 дней в месяц с общим количеством в 6 циклов, однако без какого-нибудь радиографически очевидного снижения размера амилоидомы или уменьшения болевой симптоматологии. В ноябре 1992 г. было проведено сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений с применением 131 I–SAP, которое подтвердило нахождение радиоизотопа в крестцовом отделе. Затем пациент был подвергнут ле чению с использованием IDX при внутривенной дозировке 30 мг/м 2 в течение двух недель и 20 мг/м 2 в течение следующи х двух недель, что привело к почти немедленному снижению в болевой симптоматологии, так, что это побудило его к отказу от приема анальгетиков. Ультразвуковое диагностическое исследование, проведенное в январе 1993 г., показало снижение массы ягодичного инфильтрата (с 12 см до 5 см), в то время как магнитный резонанс тазовой области показал снижение диаметра амилоидомы приблизительно с 10 см до 8 см. Улучшение в болевой симптоматологии сохранялось в течение 14 месяцев после лечения IDX. Сцинтиграфи ческое исследование амилоидных отложений, проведенное с использованием 131I–SAP че рез месяц после лечения IDX и спустя 14 месяцев после него, показало постепенное, но полное рассасывание амилоидных отложений. Пациент № 5. Этот случай относится к пациенту мужского пола (LUS) в возрасте 48 лет, страдающему ами 3 29461 лоидозом AL (CLLl), размещенным, в основном, в почечной и селезеночной области. Нарушения начались в сентябре 1992 г. с появления опускающихся отеков. Биологическое исследование анализа тканевой жидкости показало присутствие большой протеинурии (12,6 г/день), дислипемии и электрофоретические серопротеиновые симптомы, совместимые с нефротическим синдромом. В те чение сентября пациент подвергся исследованию с применением ультразвуковой почечной биопсии, которая показала присутствие амилоидных скоплений на уровне клубочковых и интерстициальных сосудов. Было начато лечение корти косте роидными препаратами, но вскоре оно было прервано из-за неэффективности. В ян варе 1993 г. пациент подвергся сцинтиграфи ческому обследованию на амилоидные отложения с применением 131I–SAP, которое выявило значительное скопление радиоизотопа на селезеночном и почечном уровнях. В течение февраля пациент подвергся лечению IDX посредством внутривенных вли ваний при дозировке в 30 мг/м 2 при общем назначении 4-х приемов. К марту 1993 г. спускающиеся отеки явно уменьшились, измерения ежедневной протеинурии составили приблизительно 6 г/день, а ультразвуковой контроль показал, что размеры селезенки снизились с 12,3 см (продольный диаметр) до 11,3 см. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 – 72 – 89 (03122) 2 – 57 – 03 4 29461 5