Засіб для лікування аутоімунних захворювань і спосіб їх лікування

1. Применение трофобластического бета-1-гликопротеина в качестве средства для лечения аутоиммунных заболеваний с иммуннодефицитом супрессоров. 2. Способ лечения аутоиммунных заболеваний, включающий введение иммунокорригирующего препарата, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что предварительно исследуют иммунный статус и при выявлении дефицита супрессоров вводят трофобластический бета-1-гликопротеин в дозах от 3 до 120 мкг. 3. Способ по п. 2, отличающ и й с я тем, что трофобластический бета-1-гликопротеин вводят парентерально. 4. Способ по п. 2, отличающ и й с я тем, что трофобластический бета-1-гликопротеин инкубируют в концентрации 60 мкг/мл с аутомононуклеарными клетками, выделенными из периферической крови, и вводят внутривенно. о* NO ы NO Изобретение относится к области медицины, а более точно касается применения иммунокорригирующих средств при лечении аутоиммунных заболеваний. Изобретение может применяться как средство для диагностики супрессорного звена иммунного статуса человека и определения возможности лечения аутоиммунных заболеваний, в частности рассеянного склероза, ревматоидного артрита и ДР. Известен препарат бета-1-гликопротеин плацентарного происхождения, являющийся аналогом трофобластического бета-1-гликопротеина (ТБГ), который применяют в качестве стимулятора роста и пролиферации гемотопоэтических кроветворных клеток (Патент США № 5169825, кл. А 61 К 35/50, 1989). Однако известный препарат не используют как средство для лечения аутоиммунных заболеваний. Известно применение ТБГ в диагностике и прогнозе течения беременности [1J. Однако в этой работе не раскрыты возможности использования ТБГ для диагностики супрессорного звена и лечения аутоиммунных заболеваний. о 26939 Известен способ лечения пустулезного псориаза путем введения лекарственного препарата плацентарного происхождения (Авторское свидетельство ССР № 1061818, кл. А 61 К 35/50 от 19.07.82). 5 Однако использование лечебного препарата в этом способе из-за наличия примесей не исключает возможности возникновения побочных реакций. Известен способ лечения аутоиммун- 10 ных заболеваний, заключающийся во введении дозы иммуннокорригирующего препарата плацентарного происхождения [2]. Однако реализация этого способа связана с использованием препарата, нали- 15 чие примесей в котором может привести к развитию аллергических реакций, а применение этого препарата эффективно лишь в послеоперационный период и ограничено лишь аутоиммунным орхитом. 20 В основу изобретения положена задача эффективного лечения аутоиммунных заболеваний путем использования препарата, обладающего иммуннокорригирующими свойствами и не вызывающего аллер- 25 гических реакций, а также расширение области лечения аутоиммунных заболеваний. Эта задача решается тем, что в качестве средства для лечения аутоиммунных заболеваний впервые применяют тро- 30 фобластический бета-1-гликопротеин (ТБГ),. а в способе лечения аутоиммунных заболеваний, включающем введение иммунокорригирующего препарата, согласно изобретению, предварительно исследуют им- 35 мунный статус и при выявлении дефицита супрессоров в качестве иммуннокорригирующего препарата используют трофобластический бета-1-гликопротеин (ТБГ). Исследование иммунного статуса мо- 40 жет включать сбор периферической крови, получение мононуклеарных клеток (МНК), деление их на две равные части, культивирование первой из них без ТБГ, а второй - с ТБГ, отмывание МНК от среды 45 культивирования, блокировку пролиферации, добавление в каждую из частей МНК свежевыделенных МНК здорового донора, стимулированных фитогемагглютинином в равных соотношениях для полу- 50 чения тест-культур, культивирование их, последующую оценку пролиферации тесткультур и определение величины супрессии по соотношению уровней пролифера- ' ции в тест-культурах. 55 Экспериментальным и клиническим путем установлены новые свойства ТБГ как иммуннокорригирующего препарата, пригодного для лечения различных аутоиммунных заболеваний. Оценка показателей иммунного статуса 154 больных при аутоиммунных заболеваниях (рассеянного склероза, ревматоидного артрита и др.) выявила наличие дефицита Т-супрессоров, который является пусковым механизмом аутоиммуннизации, то есть утраты аутотолерантности. Лечебный эффект ТБГ заключается в том, что он обладает способностью индуцировать супрессорную активность лимфоцитов больных рассеянным склерозом, ревматоидным артритом и др. Клинико-иммунологические обследования больных вышеуказанных аутоиммунных заболеваний и группысравнения (105 доноров) включали определение функциональной активности Т-супрессоров, Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли центрифугированием из периферической крови в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-уротраст (Boyum 1968 г.). Установлено, что для больных рассеянным склерозом относительное количество Т-клеток в стадии обострения (41,3±2%) было в 1,5 раза ниже нормы (63,2±2%). На основании предварительных тестовых данных можно судить о возможности использования ТБГ в стадии обострения у всех больных, в стадии ремиссии у 40% больных, а у 60% остальных больных применение ТБГ временно противопоказано. Препарат для введения может быть приготовлен в сочетании с любыми фармацевтически приемлемыми растворителями в виде инъекций. Дозы и режим введения зависят от характера и тяжести заболевания. Интервал доз содержания ТБГ может быть от 3 до 120 мкг на мл крови больного. Препарат ТБГ высокоэффективен и результат достигается даже при одноразовом введении в минимальной дозе. Введение ТБГ предпочтительно выполнять парентерально или после предварительной инкубации ТБГ в концентрации 60 мкг/мл с ауто-МНК из периферической крови внутривенно. На чертеже изображены стимуляторная (контрасупрессорная) и супрессорная активность в % ТБГ - индуцированных лимфоцитов периферической крови больных рассеянным склерозом в период обострения - 1, начала ремиссии - 2 и ремиссии - 3. Предпочтительный вариант осуществления изобретения. Предварительное исследование иммунного статуса осуществляют путем тестирования на чувствительность к ТБГ моно 26939 На следующем этапе в каждую из нуклеарных клеток (МНК) в следующей частей контрольных и стимулированных последовательности. ТБГ лимфоцитов добавляют свежевыдеПериферическую кровь берут у диагленные лимфоциты здорового донора, ностируемого больного путем венопункции, помещают в пробирки с раствором 5 стимулированных фитогемагглютинином (ФГА), которые служат отвечающими тестгепарина, получают суспензию мононукклетками в равных соотношениях для по леарных клеток (МНК) методом седименлучения тест-культур. Культивирование их тации клеток в одноступенчатом градиенпроводят в течение 72 ч. После этого с те фиколл-уротраст, делят их на две равные части. Культивируют в течение 48 ч 10 помощью Н3~тимидина оценивают пролипервую из частей без активатора супресферацию тест-культур и о величине супсоров - ТБГ, а вторую с ТБГ. Далее отрессии судят по степени снижения промывают МНК от среды культивирования и лиферации в них. осуществляют блокировку пролиферации Индекс супрессии определяют по форпутем обработки МНК митомицином С. 15 муле: ИГ = м число имп/мин в тест-культуре с ТБГ \ ' " число имп/мин в тест-культуре без ТБГ Индекс супрессии характеризует супрессорное звено иммунного статуса человека. В зависимости от полученных данных тестирования иммунного статуса человека определяют конкретные действия для лечения аутоиммунного заболевания. П р и м е р 1. Больной С , 29 лет. Диагноз - рассеянный склероз, цереброспинальная форма, с длительным ремиттирующим течением, неоднократно лечившегося кортикостероидными препаратами, на фоне ремиссии при иммуннологическом исследовании выявляется стимуляторная (контрасупрессорная) активность Тлимфоцитов в периферической крови 28%. В данный период применение ТБГ этому больному противопоказано. П р и м е р 2. Больной В., 28 лет, с диагнозом - рассеянный склероз, церебро-спинальная форма, ремиттирующее течение, стадия обострения процесса. Длительность заболевания - 3 года. В неврологическом статусе: горизонтальный нистагм при взгляде вправо, сухожильные рефлексы живые, на ногах D > S. Брюшные рефлексы - верхние низкие, средние и нижние отсутствуют. Симптом Бабинского с 2-х сторон. Клонусы стоп грубее справа. Парезов конечностей нет, мышечный тонус не изменен. Походка атактическая. В позе Ромберга - неустойчив. Атаксия при выполнении пяточно-коленной пробы, задержка мочеиспускания. Спинно-мозговая жидкость: белок 0,76%. Реакция Ланге - 66644322. Осмотр окулиста: побледнение височных половин дисков зрительных нервов. Активность Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ - 17%. 25 30 35 40 45 50 100% В стерильных условиях у больного была взята из локтевой вены однократно кровь в объеме 110 мл. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли стандартным методом в-градиенте плотности фиколл-уротраст. Выделенные МНК инкубировали с ТБГ в концентрации 60 мкг/мл. Отмытые центрифугированием клетки ввели внутривенно. На 5-й день наступили признаки ремиссии. Нормализовалась походка, мочеиспускание.В позе Ромберга - устойчив. Пяточно-коленную пробу выполняет четко. Повторная оценка иммунного статуса выявила повышение функциональной активности Т-супрессоров периферической крови при индукции ТБГ - 38%, у больного в реакции Оухтерлони на 7, 14 и 28 дни антитела против ТБГ не обнаружены. П р и м е р 3. Больной X., 42 года, поступил в клинику с диагнозом ревматоидный артрит - полиартрит, серопозитивный, А - П (стадия 2) недостаточность функции суставов (НФС). Активность Тсупрессоров периферической крови при индукции ТБГ составила 22%. Больному ввели ТБГ парентерально в паталогически измененные суставы по 0,5 мл в концентрации 60 гйкг/мл. На четвертые сутки наступили признаки ремиссии. Болевой синдром уменьшился. Регрессировала НФС. При повторном анализе выявили повышение функциональной актив : нЪсти Т-супрессоров периферической кро* ви при индукции ТБГ - 47%. У больного в реакции Оухтерлони на 7, 14 и 28 дни антитела против ТБГ не выявлены. При исследовании 105 доноров и 154 больных с различными аутоиммунными заболеваниями выявлено, что при использо 8 26939 средства для лечения аутоиммунных завании дозы ТБГ менее 3 мкг/мл крови болеваний. Предложенный способ лечеэффект слабо выражен, а использование ния аутоиммунных заболеваний позволяет дозы более 120 мкг/мл крови нецелебез побочных реакций обеспечить эффексообразно. тивное лечение различных аутоиммунных Норма супрессорной активности заболеваний. 63,4%±4,7, при обострении - 20,5%±9,8, Изобретение может найти широкое при ремиссии - 47 J%±2,8, в начале реприменение как средство для лечения шимиссии стимуляторная активность - 66,6%± рокого спектра аутоиммунных заболева±16,1. Таким образом, доказана высокая 10 ний и диагностики супрессорного звена иммунного статуса человека. эффективность препарата ТБГ в качестве 70 юрма. м I ю 4 s \ I 70 Упорядник Техред М. Келемеш Коректор М.Куль Замовлення 540 Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101