Спосіб одержання ранозагоювального та антимікробного засобу

1 Спосіб одержання ранозагоювального та антимікробного засобу, що включає екстракцію листя горіха волоського спиртом етиловим, який відрізняється тим, що перед екстракцією си Винахід відноситься до медицини та ХІМІКОфармацевтичної промисловості, зокрема, до способів одержання ранозагоюючих та антимікробних засобів з рослинної сировини Відомий спосіб одержання біологічно активного препарату "Тодікамп" з волоських горіхів, який здійснюють таким чином Горіхи волоські зелені піддають грубому помелу до розміру частинок 1мм Одержану масу заливають нафтовою фракцією "Ленефр", інтенсивно перемішують перші 7 діб і витримують подальші 5 діб Одержану суміш відфільтровують з застосуванням вакууму через нутч-фільтр і відсмоктують До суспензії, що залишилась після первинної екстракції, додають нафтову фракцію "Ленефр", інтенсивно перемішують протягом 14 діб і витримують подальші 10 діб Одержану суміш відфільтровують з застосуванням вакууму через нутч-фільтр і відсмоктують Екстракти, які одержали на першій та другій стадіях, об'єднують, жом, що залишився, висушують і через нього пропускають екстракт Препарат "Тодікамп", який одержали цим способом, являє собою прозору рідину від світло-жовтого до жовтуватого кольору, має протизапальну та ранозагоювальну дію, ефективно захищає імунну систему від генотоксичного впливу протипухлинних препаратів (1) Відомий спосіб одержання настойки евкаліпта, яку застосовують як протизапальний та антисеп ровину замочують в 35-45 % спирті етиловому при співвідношенні 1 1, екстракцію проводять три рази 35-45% спиртом етиловим методом настоювання при загальному співвідношенні сировина екстрагент 1 5, об'єднаний екстракт відстоюють протягом трьох діб при 6-10°С, а потім фільтрують 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що першу екстракцію проводять при співвідношенні сировина екстрагент 1 3 протягом 24 - 48 годин, другу та третю екстракції - при співвідношенні сировина екстрагент 1 1 протягом 6-12 годин кожну 3 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що після фільтрації отриманий продукт концентрують до одержання густого або сухого екстракту тичний засіб Спосіб здійснюють таким чином Один кілограм сухого подрібненого листя евкаліпта поміщають в перколятор, заливають 90% спиртом і екстрагують 7год Через кожну годину з перколятора зливають 0,3л розчинника і його знову наливають зверху в той же перколятор Екстракцію повторюють ще три рази, використовуючи кожного разу по 2,1л 90% спирту Одержують 3,2л спиртового екстракту Сировину, що залишилась, на протязі 50хв екстрагують 2,3л води Потім ще один раз на протязі ЗОхв Одержаний спиртовий екстракт змішують з першою порцією водного екстракту і визначають в ньому вміст спирту До одержаного розчину додають другу порцію водного екстракту в такій КІЛЬКОСТІ, щоб вміст спирту в настойці був не менш 65% Потім настойку фільтрують і одержують готовий продукт (2) Відомий спосіб одержання засобу "Фітодент", що має протизапальну та ранозагоювальну дію, який здійснюють таким чином Суміш подрібненої лікарської сировини, що складається з розрахованої КІЛЬКОСТІ чистотілу, напдків, аїру, ромашки, кропиви, софори японської та шипшини, загружають в екстрактор і заливають 40% спиртом етиловим при співвідношенні сировина екстрагент 1 (8 10) Екстракцію проводять при постійному перемішуванні на протязі двох тижнів Одержаний екстракт зливають в ємність і витримують при 5-10°С О о> 44927 на протязі трьох діб, потім фільтрують, вихід одеОдержаний продукт інкубують і водний залишок ржаного продукту доводять до 1000л 40% спиртом відокремлюють 3 одержаного рідкого екстракту етиловим, після чого розливають в темні скляні вилучають екстракційну суміш упарюванням під флакони (3) вакуумом і отримують сухий екстракт, вихід якого по відношенню до сухого листя становить 5 - 3% Відомий спосіб одержання засобу з листя горі(6) ха волоського, квіток напдків лікарських і коренів жовтозілля лікарського, який здійснюють таким До недоліків прототипу та аналогів слід віднечином В апараті Сокслета на водяній бані роздісти довготривалість, складність та громіздкість льно екстрагують подрібнене до 1мм сухе листя технологічних процесів одержання цільових прогоріха волоського та сухі квітки напдків лікарських дуктів за рахунок багаторазових стадій екстракцій, Екстракцію проводять п'ятикратною КІЛЬКІСТЮ сутривалості періодів відстоювання, обробки проміміші 96% етанолу і гексану (1 10) на протязі 5 жних продуктів окладними системами розчинників, бгод до повного вичерпання сировини Одержані а також недостатньо високий вихід та порівняно екстракти охолоджують, фільтрують і упарюють вузький спектр специфічної активності цільових під вакуумом до повного вилучення розчинників і продуктів отримання цільових продуктів смолоподібної конВ основу винаходу поставлене завдання ствосистенції Грубо подрібнені корені жовтозілля лірення способу одержання ранозагоювального та карського заздалегідь замочують на протязі 5 антимікробного засобу шляхом підбору технологібгод в суміші 10% розчину аміаку і 95% етанолу чних стадій у такій ПОСЛІДОВНОСТІ та взаємозв'язку і (1 1) Потім суміш переносять до екстрактора апаз такими режимами та параметрами, які б забезрату Сокслета і екстрагують етилацетатом при печили спрощення технології та скорочення терміспіввідношенні сировина екстрагент 1 5 при 80 ну проведення процесу, підвищення виходу та 90°С на протязі 5 - бгод до повного вичерпання розширення спектра специфічної активності цільосировини До одержаного екстракту при перемішувого продукту ванні додають безводний сульфат натрію, суміш Поставлене завдання вирішується тим, що в фільтрують, розчинники відганяють під вакуумом способі одержання ранозагоювального антимікропри 70 - 80°С до 1/3 об'єму До згущеного екстракбного засобу, що включає екстракцію листя горіха ту додають свіжоприготовлену льняну олію і розволоського спиртом етиловим, згідно з винаходом чинники випарюють у вакуумі при 70 - 80°С до їх перед екстракцією сировину замочують в 35 - 45% повного вилучення Одержані екстракти листя госпирті етиловому при співвідношенні 1 1, екстракріха грецького, квіток напдків лікарських та корецію проводять три рази 35 - 45% спиртом етилоней жовтозілля лікарського змішують, доводять вим методом настоювання при загальному співсвіжоприготовленою льняною олією до необхідновідношенні сировина і екстрагент 1 5, об'єднаний го об'єму, після чого при перемішуванні та нагріекстракт відстоюють протягом трьох діб при 6 ванні до 40 - 50°С екстракти повністю розчиняють 10°С, а потім фільтрують, причому першу екстракв льняній олії Одержаний олійний розчин екстракцію проводять при співвідношенні сировина ексттів фільтрують через нутч-фільтр і фасують в рагент 1 3 протягом 24 - 48 годин, другу та третю щільно закупорені банки темного скла (4) екстракції - при співвідношенні сировина екстрагент 1 1 протягом 6 - 1 2 годин кожну, а після фільВідомий спосіб одержання засобу, що має ратрації отриманий продукт концентрують до одернозагоювальну антимікробну дію, який здійснюють жання густого або сухого екстракту таким чином Сухе листя горіха грецького подрібнюють на вальцах і заливають хлороформом (1 5) Розчинник міняють через 12год шість разів до повного обезбарвлення хлороформу Знежирену сировину просушують при кімнатній температурі до повного вилучення запаху хлороформу і заливають 70 - 75% спиртом етиловим при співвідношенні сировина екстрагент 1 (6 - 8) Через 24 год заміняють екстрагент і проводять аналогічно другу екстракцію Одержані спиртові екстракти об'єднують і під вакуумом на водяній бані відганяють спирт Водну фракцію, що залишилась, висушують під вакуумом до одержання сухого залишку (5) Найбільш близьким до заявляемого є спосіб одержання засобу, що має ранозагоювальну та антимікробну дію, який здійснюють таким чином Сухе листя горіха вольського (15кг) заливають 70 80°С спиртом етиловим (30кг) з кожнодобовою зміною розчинника Повноту екстракції визначають візуально до повного знебарвлення екстрагента (приблизно 10 діб) 3 одержаного екстракту вилучають спирт етиловий відгоном під вакуумом Одержаний водний залишок очищають хлороформом (1 1) Потім ВОДНИЙ залишок обробляють сумішшю 96% спирту етилового з етилацетатом (8 2) при співвідношенні водний залишок суміш 1 1 Технічний результат, який отримують в результаті здійснення винаходу, полягає у спрощенні технологічного процесу, скороченні терміну його проведення, у підвищенні виходу та розширенні спектра специфічної активності цільового продукту Заявляємий спосіб здійснюють таким чином Сухе листя горіха грецького завантажують в екстрактор, заливають 35 - 45% спиртом етиловим при співвідношенні сировина екстрагент 1 1 і настоюють на протязі 2год Набухлу сировину заливають 35 - 45% спиртом етиловим при співвідношенні сировина екстрагент 1 2 і настоюють на протязі 24 - 48год Одержаний екстракт зливають, сировину заливають 35 - 45% спиртом етиловим при співвідношенні сировина екстрагент 1 1 і настоюють на протязі 6-12 год Одержаний екстракт зливають, сировину заливають 35 - 45% спиртом етиловим (1 1) і настоюють на протязі 6 - 12год Третій екстракт зливають, сировину віджимають, одержану рідку фракцію об'єднують з раніше одержаними екстрактами, відстоюють протягом 3 діб при 6 - 10°С, потім фільтрують і, при необхідності, концентрують будь-яким відомим способом до густого або до сухого екстракту 44927 Вихід ПО сухому залишку становить 6 -10% від маси сировини Одержаний цільовий продукт можна використовувати у формі рідких екстрактів, густих екстрактів, сухих екстрактів, таблеток, капсул, мазей, кремів, супозиторієв, гелів Наводимо конкретні приклади здійснення винаходу Приклад 1 В екстракторі 200кг сухого листя горіха грецького замочують в 200л 35% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 2год Набухлу сировину заливають 400л 35% спирту етилового (1 2) і екстрагують методом настоювання на протязі 48год , після чого одержаний спиртовий екстракт зливають до збірника Сировину знову заливають 200л 35% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 12год Одержаний екстракт зливають до збірника Сировину в третій раз заливають 200л 35% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 12год Одержаний екстракт зливають до збірника, а сировину віджимають Об'єднані екстракти відстоюють протягом 3 діб при 6°С, потім фільтрують Одержаний рідкий екстракт розливають у флакони і упаковують При одержанні густого або сухого екстрактів відфільтрований продукт концентрують будь-яким відомим способом, розфасовують в тару і упаковують Вихід ЦІЛЬОВОГО продукту по сухому залишку складає 10% від маси сировини Приклад 2 В екстракторі 200кг сухого листя горіха грецького замочують в 200л 40% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 2год Набухлу сировину заливають 400л 40% спирту етилового (1 2) і екстрагують методом настоювання на протязі ЗОгод, після чого одержаний спиртовий екстракт зливають до збірники Сировину знову заливають 200л 40% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 8год Одержаний екстракт зливають до збірника Сировину в третій раз заливають 200л 40% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 8год Одержаний екстракт зливають до збірника, а сировину віджимають Об'єднані екстракти відстоюють протягом 3 діб при 8°С, потім фільтрують Одержаний рідкий екстракт розливають у флакони і упаковують При одержанні густого або сухого екстрактів відфільтрований продукт концентрують будь-яким відомим способом, розфасовують в тару і упаковують Вихід ЦІЛЬОВОГО продукту по сухому залишку складає 8% від маси сировини Приклад З В екстракторі 200кг сухого листя горіха грецького замочують в 200л 45% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі 2год Набухлу сировину заливають 400л 45% спирту етилового (1 2) і екстрагують методом настоювання на протязі 24год, після чого одержаний спиртовий екстракт зливають до збірника Сировину знову заливають 200л 45% спирту етилового (1 1) і настоюють на протязі бгод Одержаний екстракт зливають до збірника Сировину в третій раз заливають 200л 45% спирту етилового (1 1) І настоюють на протязі бгод Одержаний екстракт зливають до збірника, а сировину віджимають Об'єднані екстракти відстоюють протягом 2 діб при 10°С, потім фільтрують Одержаний рідкий екстракт розливають у флакони і упаковують При одержанні густо го або сухого екстрактів відфільтрований продукт концентрують будь-яким відомим способом, розфасовують в тару і упаковують Вихід ЦІЛЬОВОГО продукту по сухому залишку складає б£ від маси сировини Взаємозв'язок та ПОСЛІДОВНІСТЬ технологічних операцій заявляемого способу, підбір режимів та параметрів забезпечують виконання поставленого у винаході завдання Стадія замочування сухого листя горіха волоського в 35 - 45% спирті етиловому перед екстракцією для набухання сировини забезпечує інтенсивність та повноту здійснення процесу екстракції біологічно активних речовин Співвідношення сировини та агента, яким и замочують (1 1), визначено экспериментально і є оптимальним для виконання процесу набухання сировини Застосування більшої КІЛЬКОСТІ водноспиртового розчину для замочування сировини є недоцільним, а при меншій його КІЛЬКОСТІ не досягається повнота контакту всієї сировини зі змочувальним агентом Концентрація спирту (35 - 45%) також визначена експериментальне і є обгрунтованою для успішного виконання процесу набухання сировини При меншій концентрації спирту надлишок води призводить до збільшення терміну, необхідного для результативного набухання гідрофобного листя горіха При більшій концентрації спирту знижується ефективність подальшого процесу екстракції Автори припускають, що це відбувається за рахунок виникнення явища деструкції клітин поверхні листя, що, можливо, призводить до передчасного і занадто інтенсивного здобування нестійких біологічне активних сполук Застосування як екстрагента водного розчину спирту етилового є традиційним і найбільш "лояльним" при здобуванні комплексу біологічно активних речовин з рослинної сировини Концентрація екстрагента (35 - 45%) визначена експериментально і забезпечує повне та комплексне здобування біологічно активних сполук різної природи, які забезпечують необхідний рівень та спектр специфічної активності цільового продукту, його якість Так, при концентрації екстрагента менше заявляємих значень (35%) спостерігається порушення балансу дубильних речовин та флавоноїдів здобувається максимум дубильних речовин і мінімум флавоноїдів При концентрації екстрагента більше заявляємих значень (45%) здобувається мінімум дубильних речовин і максимум флавоноїдів Все це, зрештою, призводить до зниження рівня та звуження спектра специфічної активності цільового продукту, до погіршення його якості Триразова екстракція сировини 35 - 45% спиртом етиловим є необхідною і достатньою для досягнення повного здобування біологічно активних сполук, комплекс яких забезпечує необхідний рівень та спектр специфічної активності цільового продукту При меншій КІЛЬКОСТІ екстракцій не забезпечується повнота вичерпування сировини Здійснення більшої КІЛЬКОСТІ екстракцій в заявляемому способі, на відміну від прототипу, недоцільно і призводить до перевитрат екстрагента Відстоювання об'єднаного екстракту протягом трьох діб при температурі 6 - 10°С є необхідною і 44927 достатньою умовою для випадання в осадок високомолекулярних речовин білкової природи, присутність яких в цільовому продукті небажана, тому що призводить до погіршення його якості та виникнення токсичних ефектів при його уживанні Застосування інших методів здобування високомолекулярних речовин, наприклад, ультрафільтрації, з одного боку, недоцільно, тому що ускладнює та здорожує проведення технологічного процесу З іншого боку, може призвести до порушення структурно-механічних характеристик інших біологічно активних сполук Процес фільтрації необхідний для відділення механічних домішок і одержання прозорого цільового продукту, який відповідає фармакопейним вимогам Процес концентрування здійснюють у випадку необхідності одержання густого або сухого екстрактів, які використовують у виробництві Інших лікарських форм продукту, одержаного з листя горіха грецького по заявляемому способу Проведені фармакологічні дослідження специфічної активності настойки листя горіха волоського, одержаної по заявляемому способу, свідчать про наявність виразних протизапальних, ранозагоюючих, антиоксидантних та антимікробних властивостей засобу Протизапальну активність рідкого екстракту листя горіха грецького вивчали на кількох моделях запалення у порівнянні з ортофеном Рідкий екстракт заздалегідь випарювали, звільняючи від спирту, і вводили пероральна у вигляді водного розчину Результати досліджень показали, що по цьому виду активності рідкий екстракт виявляє ефект, який рівняється ефекту ортофена, а на деяких моделях перевершує його При цьому необхідно враховувати відсутність у засобу, який одержують заявляємим способом, негативних побічних ефектів на відміну від ортофена, який має протипоказання при виразці шлунку та дванадцятипалої кишки, при вагітності, не рекомендується особам, що страждають від шлунково-кишкових захворювань, уражень печінки та нирок Окрім того, при тривалому застосуванні ортофена необхідно контролювати картину крові Ранозагоювальну репаративну активність рідкого екстракту листя горіха волоського досліджували у порівнянні з ефективним протизапальним та ранозагоювальним засобом олією обліпихи Результати ДОСЛІДІВ цього виду активності показали, що засіб, одержаний по заявляемому способу, перевершує препарат порівняння Так, на 21 добу в групі тварин, яких лікували рідким екстрактом листя горіха грецького, репаративна активність була виявлена на 52,3%, а олією обліпихи - на 38% При цьому процес загоєння в дослідних групах тварин відбувався значно швидше, ніж в контрольних групах Результати досліджень антимікробної активності рідкого екстракту листя горіха волоського свідчать, що він виявляє високий рівень по відношенню до широкого кола тест-штамів, в тому числі грампозитивних та грамнегативних мікроорганізмів, спороутворюючої культури (В subtilus), культури гриба Candida, культури Р aerugmosaTa ІНШІ Вивчення противиразкової дії рідкого екстрак 8 ту листя горіха волоського у порівнянні з відомим противиразковим препаратом плантаглюцидом свідчить, що на різних моделях ураження рідкий екстракт перевищує препарат порівняння Так, на моделі адреналинового набряку рідкий екстракт діє у два рази активніше плантаглюциду При проведенні першої фази КЛІНІЧНИХ досліджень використовували 40% спиртовий екстракт листя горіха волоського Одержані результати лікування дозволили зробити такі висновки Рідкий екстракт листя горіха волоського ефективний при лікуванні хворих хронічним гастритом, гастродуоденитом, які протікають на тлі збереженої та зниженої кислотоутворюючої функції шлунка Прийом засобу призводить до зменшення ріпі нічних проявів больового, диспепсичного синдромів , зменшення запалення слизистої оболонки гастродуоденальної зони Рідкий екстракт листя горіха грецького добре переноситься хворими, не викликає побічних реакцій Продовжуються дослідження по подальшому розширенню спектра специфічної активності засобу, який одержують заявляємим способом, використанню його в різних лікарських формах Порівняльний аналіз заявляемого способу та способу-прототипу Заявляємий спосіб 1 Замочування 200кг сухого листя горіха волоського в 200л 35 - 45% спирту етилового (1 1) і настоювання на протязі 2год 2 Екстракція набухлого листя горіха волоського 400л 35 - 45% спирту етилового методом настоювання на протязі 24 - 48год з подальшим зливом одержаного екстракту 3 друга екстракція сировини 200л 35 - 45% спирту етилового методом настоювання на протязі 6 - 12год з подальшим зливом одержаного екстракту 4 Третя екстракція сировини 200л 35 - 45% спирту етилового методом настоювання на протязі 6 - 12год з подальшим зливом одержаного екстракту і віджимом сировини 5 Відстоювання об'єднаних екстрактів протягом 3 діб при 5 - 10°С 6 Фільтрація одержаного продукту 7 Концентрація продукту будь-яким відомим способом до одержання густого екстракту або сухого екстракту Загальний термін проведення способу - 110 150год (4,5 - 6 діб) Вихід ЦІЛЬОВОГО продукту по сухому залишку- 6 -10% від маси сировини Примітка термін проведення процесу залежить також і від технологічних можливостей виробника при безперервному технологічному процесі він становить 110год Спосіб-прототип 1 Багаторазова екстракція 15кг сухого листя горіха кого 30л 70 - 80% етилового спирту з кожнодобовою зміною розчинника до його повного знебарвлення з подальшим об'єднанням одержаних екстрактів (КІЛЬКІСТЬ екстракцій - не менше 10 разів, ВІДПОВІДНО термін проведення екстракції - 10 діб, загальне співвідношення сировина екстрагент 1 20) 2 Упарювання об'єднаного екстракту до вилучення екстрагента 44927 3 Очистка одержаного водного залишку хлороформом при співвідношенні 1 1 4 Екстракція очищеного водного залишку сумішшю 96% спирту етилового та етилацетату (8 9) (2 - 1) при співвідношенні водний залишок екстрагент 1 1 5 Інкубування суміші (витримування суміші на протязі 6 - 8год для розділення фракцій) 6 Відділення водного залишку 7 Упарювання одержаного рідкого екстракту до одержання сухого екстракту Загальний термін проведення способу - 11 12 діб Вихід ЦІЛЬОВОГО продукту - 6 - 8% по сухій сировині Порівняльний аналіз дозволяє зробити висновок пре те, що вихід цільового продукту в заявляемому способі вище при меншій концентрації екстрагента (в 2 рази) та при значно меншій його КІЛЬКОСТІ (в шість разів) Термін проведення проце 10 су скорочується в рази Таким чином, заявляємий спосіб одержання лікарського засобу з листя горіха волоського у порівнянні з прототипом та аналогами дозволяє одержати цільовий продукт з більшим виходом, у значно коротші терміни, з більш високим рівнем та широким спектром специфічної активності ЛІТЕРАТУРА 1 Патент Российской Федерации N 2033803, кл А 61 К 35/78 Опубл БИ, 1995, N 12 2 Авторское свидетельство СССР N 799762, кл А 61 К 35/78 Опубл БИ, 11981, N 4 3 Патент України N 22667, кл А 61 К 35/78 Опубл бюл "Промислова власність", 1998, N З 4 Авторское свидетельство СССР N 1428383, кл А 61 К 35/78 Опубл БИ, 1988, N37 5 Патент СССР N 1774871, кл А 61 К 35/78 Опубл БИ, 1992, N41 6 Авторское свидетельство СССР N 1670847, кл А 61 К 35/78 Опубл БИ, 1991, N ЗО (прототип) ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна (044) 456 - 20 - 90