Спосіб одержання суми поліфенолів з антимікробною, протизапальною та антиоксидантною дією

Спосіб одержання суми поліфенолів з антимікробною, протизапальною та антиоксидантною 3 49151 ту з вираженою антимікробною, протизапальною та антиоксидантною активністю. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання суми поліфенолів з антимікробною, протизапальною та антиоксидантною дією шляхом принаймні трикратної екстракції рослинної сировини 50% спиртом етиловим переважно при співвідношенні сировини до екстрагенту 1:10 з подальшим упарюванням, фільтрацією та сушкою об'єднаного екстракту, винаходом передбачено, що екстракції піддають кореневища гравілату міського Geum urbanum при додатковому співвідношенні сировини до екстрагенту 1:9 та 1:11 протягом 13-15 годин, після чого сировину додатково промивають екстрагентом у кількості до 40% від заданого співвідношення, а зливи об'єднують з сумарним екстрактом. В якості сировини обрано кореневище гравілату міського Geum urbanum родини розові, який широко розповсюджений на всій території України. Саме вибір рослинної сировини у поєднанні з параметрами заявленого способу обумовлює одержання кінцевого продукту з необхідним спектром 4 фармакологічних властивостей, дозволяє розширити арсенал існуючих біологічно активних речовин, придатних до одержання лікарських засобів у різних лікарських формах, надаючи тим самим можливість індивідуального підходу до лікування хворих. У народній медицині існують окремі відомості про помірну антимікробну або протизапальну активність відварів гравілату міського [4]. Авторами вперше було виявлено антиоксидантну дію суми поліфенолів кореневища Geum urbanum, одержаних заявленим способом. Вибір в якості екстрагенту спирту етилового було здійснено експериментальним шляхом, виходячи з умов максимальної екстракції поліфенольних сполук з обраної сировини. Оптимальним екстрагентом для заявленого способу є 50% спирт етиловий. У процесі досліджень були визначені також співвідношення сировини до екстрагенту і час екстракції. Дані експериментів наведено у таблицях 12. Таблиця 1 Визначення оптимального співвідношення сировина:екстрагент при екстракції кореневищ гравілату міського 50% спиртометиловим у відповідності з заявленим способом № досліду 1 2 3 4 5 Співвідношення сировина: екстрагент Вихід готового продукту, % 1:5 1:9 1:10 1:11 1:12 17,8 18,1 19,7 19,6 19,6 Згідно з даним експерименту ефективним інтервалом співвідношення сировини до екстрагенту є 1:9-1:11. При зменшенні цього співвідношення зменшується як вихід готового продукту, так і вихід діючих речовин. Збільшення співвідношення недо Вихід діючих речовин, % 38,45 41,55 42,55 42,45 42,45 цільне, тому що показники виходу практично не змінюються, а витрати спирту етилового зростають. Оптимальним є співвідношення сировини до екстрагенту як 1:10. Таблиця 2 Визначення оптимального часу екстракції кореневищ гравілату міського 50% спиртом етиловим в співвідношенні сировина:екстрагент 1:10 № досліду 1 2 3 4 5 Час екстракції, години 12 13 14 15 16 Вихід готового продукту, % 18,0 18,2 19,7 19,6 19,6 Аналіз даних табл.2 свідчить, що ефективним інтервалом часу екстракції є 13-15 годин. Зменшення цього часу не дозволяє вичерпно екстрагувати поліфенольні сполуки з сировини. Збільшення - не забезпечує зростання показників виходу готового продукту і діючих речовин, та є економічно недоцільним. Оптимальний час екстракції - 14 годин. Вихід діючих речовин, % 39,55 41,35 42,55 42,55 42,55 Експериментальним шляхом визначено, що додаткове промивання сировини (після екстракції та зливу одержаного екстракту) екстрагента у кількості 40% від використаного при екстракції дозволяє збільшити відсоток екстрактивних речовин, які обумовлюють фармакологічну дію. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: кореневище гравілату міського подрібнюють до розміру частин 0,5-1,0мм, принаймні трикратно 5 49151 екстрагують 50% спиртом етиловим у співвідношенні сировина:екстрагент 1:9-1:11 протягом 13-15 годин, сировину додатково промивають екстрагентом, об'єднують всі зливи з подальшим упарюванням одержаного екстракту до видалення екстрагенту, фільтрацією та сушінням. Вихід готового продукту 19,7%. Одержаний продукт - негігроскопічний аморфний порошок світло-коричневого кольору з специфічним характерним запахом, розчинний у воді, в 50% етанолі при нагріванні, слабо розчинний у хлороформі, етилацетаті та ефірі. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1 1,5кг подрібнених (подрібненість 0,5-1мм) кореневищ Geum urbanum екстрагували 10л 50% спирту етилового в типовому екстракторі ємністю 15л з мішалкою та несправжнім дном на протязі 14 годин. Екстракт в об'ємі 5л зливали, а сировину промивали 2л 50% етилового спирту. Екстрагування проводили за тими ж умовами тричі новими порціями екстрагенту, додаючи кожного разу 5л 50% спирту етилового, зливаючи 6л екстракту і промиваючи сировину 2л 50% спирту етилового. Усі зливи об'єднували та упарювали до повного вилучення спирту. Об'єм кубового залишку становив 3л. Для вилучення смолистих речовин, які випадають при упарюванні (випадає 50г, що складає 6 3,3% від ваги завантаженої сировини), сумарний екстракт фільтрували через нутч-фільтр. Очищений екстракт висушували у вакуумному апараті при температурі 35±5°С і розрідженні 550±5мм.рт.ст. до сухого залишку. Отримали 295,5г сухого цільового продукту, що у перерахунку на повітряно-суху сировину складає 19,7%. Дослідження біологічної активності суми поліфенолів, отриманої запропонованим способом, були проведені in vitro та in vivo і довели, що одержані за заявленим способом поліфенольні сполуки мають виражену антимікробну, протизапальну та антиоксидантну дію. Приклад 2 Для вивчення антимікробної активності суми поліфенолів, одержаної за заявленим способом, був використаний метод дифузії в агар. Для оцінювання активності застосовували рекомендовані ВООЗ штами мікроорганізмів: Staphylococcus aureus 25923 АТСС, Escherichia coli 25922 АТСС, Proteus vulgaris 4636 АТСС, Proteus aeruginosa 27853 АТСС та Candida albicans 885/653ATCC. Визначення антимікробної активності досліджуваної суми поліфенолів проводили методом дифузії в агар. В якості препарату порівняння було обрано "Новоіманін". Результати дослідження наведені в таблиці 3. Таблиця 3 Вивчення антимікробної активності суми поліфенолів кореневища гравілату міського методом дифузії Варіант досліду Сума поліфенолів Новоіманін S. aureus 25923 АТСС 22,8±1,4 16,1±1,2 Діаметр зон затримки мікроорганізмів в мм±мм Тест-культура мікроорганізмів Е. соlі 25922 P. vulgaris 4636 P. aeruginosa 27853 АТСС АТСС АТСС 20,3±1,2 19,6±0,7 17,2±0,6 15,2±0,6 14,5±0,8 12,5±1,1 Аналіз даних таблиці 3 свідчить про виражену антимікробну дію суми поліфенолів, отриманих з кореневища гравілату міського заявленим способом, що перевищує дію препарату порівняння. Приклад 3 Протизапальну активність суми поліфенолів, одержаних за заявленим способом, вивчали на моделі гострого запального набряку, викликаного субплантарним введенням у задню лапу щура 0,1мл 1% розчину карагеніну. Об'єм лапи вимірювали за допомогою онкометру до початку досліду та у момент максимального розвитку набряку (4 години). Суму поліфенолів та препарат порівняння С. albicans 885/653 АТСС 18,2±0,6 11,2±0,8 ортофен у дозі 8мг/кг вводили у шлунок тварин відповідних дослідних груп за 30 хвилин до введення флогогенного агенту. Контрольна група тварин одержувала еквівалентну кількість води. Протизапальну активність розраховували за формулою, запропонованою Ф.П. Трінусом: Уk Уo A 100 , де Уk А - протизапальна активність, % Уk і Уo відповідно об'єм лапи у контролі та у досліді. Результати досліду представлені в табл.4. Таблиця 4 Протизапальна активність суми поліфенолів у порівнянні з ортофеном (n=7) Показник / група Величина набряку, ум.одиниць Протизапальна активність, % Контроль 13,75±1,11 Ортофен, 8мг/кг 3,25±0,75* 76,4 Примітка. * - вірогідність розходжень при р