Спосіб встановлення ризику розвитку розладів, пов`язаних з розрегулюванням g-білка для суб`єкта

1 Спосіб встановлення ризику розвитку розладів, пов'язаних з розрегулюванням G-білка для суб'єкта, який включає порівняння in vitro генної ПОСЛІДОВНОСТІ /?3 -субодиниці G-білка людини з генною ПОСЛІДОВНІСТЮ ATG fet 1 CAG Gla SEQ I NO CAG CTC AAG AAG D GAG 1 CGG Arg GGG GAG ATG GAG C W L Gly Gla Met Glu Cl5 ATT GCA GAT GCC AGG H e Ala Asp Ala Arg 20 GTG TCT GGC СТА GAG Val Ser Gly Leu Gla 35 ACG TTA AGG GGB CAC Thr Leu Arg Gly liis CTG CGT CAG GAA GCG L e j Arg Gin Glu Ala 10 AAA GCC TGT GCT GAC Lys Ala Cys Ala Asp 25 GTG GTG GGA CGA GTC Val Val Sly Arg Val 40 CTG GCC AAG ATT TAC Leu Ala Lys lie туг GCC Ala ACT Thr 65 GTG Val GAT TCT AAG CTG CTG T Aap Ser L /5 i£u Le^ 70 TGG GiC AGC TAC ACC Crp Asa Ssr Tyr Thr GTA AGT GCC ^al Ser АІа АТС lie CTG Leu 'CC AAC AAG Thr As-i Lys TCC TCC TGG 0-C ATG ACC ~GT GCC TAT Ser Set Trp Vel Pet Ttr Cys Ala Tyr G..U Gil L e j Lya IS GTT ACT CTG GCA Val Thr Leu Ala 30 CAG АТС CGG ACG Sin Met Arg Thr 45 GCC ATG CAC TGG Ala let ЯІВ Trp 60 TCG CAA GAT GGG AAG CTG Ser Glr. Asp Gly Lys Leu 75 GTG CAC GCC АТС CCA CEG Val Й 1 3 Ala lie Pro Lea 90 95 GCC CCA TCA GGG AAC TTT Ala Pro Sec Gly Asn Phe Lys GAG Glu CGG Arg s o CGC Arg GTG val AAG ACT GTA L/s ""ir val TCT CCT GAC Ser Pro £sp 19S AAS CTC TGG Lys Le~ Trp 210 CAC GAG TCG Fis Gls. Ser 22Ъ hiC TCC ACG Суз Т к ї GGG CTG GAC AAC ATG Gly tsu Asp *sn Met 1Ї0 ДАТ GTC AAG GTC AGC Asn Val Lys Val Ser .35 TGC TGC CGC TCC CTG cys Cys A E J Рйе Leu ISO ACC ACG TGT GCC TTG Thr Thr Cys Ala beu 165 TTT G^G GGA CAC ACG fhe Val Gly His Thr ISO VX AAT CTC TTC ITT PUG Asn Leu Phs U e 200 GAT GTG CGA GAG GGG Asp val 'urg Glu Gly 215 G?C »SC AAC CCC АТС Asp H a Asn Ala lie ' 230 GGC TCG CAT GAC GCT Gly Ser Asp ^GT TCC A^C fAC \AC C'C AAA TCC Cys See lie Tyr A S T L e ^ Lys Ser 135 CGG GAG CTT TCT GCT CAC АСА GGT Arg Glu L E U Ser Ala (Us ТПГ Gly 140 GAT GAC AAC АДГ ATT GTG ACC AGC k$g \sg »sn 4S- I.E Vil Thr Ser 155 ISO TGG GAC ATT GAG ACT CGG CAG CAG Trp Asp H e G J U Thr Gly GlT Gin -!0 175 GGT GAC TGC АТС- \С,С CTG GCT GTG Gly Asp cys Vet. Ser Leu Ala Val 135 190 TCG GGG GCC TGT GAT GCC AGT GCC Sef Glj Ala Cys Asp Ms, Ser Ala JOS ACC TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC T h r Cys Arg Gin Т>1Г Р>іе The Gly 220 TGT TTC TTC CCC AAT GGA GAG GCC Cys Phe 2\e ГГО ? s n Gly G l u Ala 2.35 240 TCC TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG er Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg 25 S 250 АТС TGC TTC CC CiC GAG AGC АТС АТС TGC GGC H e Cys Phe er His Glu Ser H e Л е Cys Gly 270 263 T^C TCC CTC AGT GGC CGC СТА СТА TTC GCT CGC Phe Ser LSJ Ser Gly A;9 Lsu Leu Phe Ala Gly 285 Ї80 TGC AAT G1TC TGG GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT Суз A S T val Trp Аэр Ser 4st Lys Eer Glu Arg 300 295 GGC CAC GAT AAC AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC Gly ь-s Asp A S T Arg Val Ser Cys Ь Е Ц Gly Val 310 315 320 GCT GTG GCC АСА GGT TCC 'GG GAC AGC TTC CTC Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser P>>e Leu 335 330 G GAGGCTGGAG AAAGGHAAGS GGAAGGC1GT GAACACACTC GCA GAC CAG СЙС CTG Ala Asp Gin Glu Leu 2S0 АТС ACG TCT GTG GCC П е C*ir Ser Vel AlE 275 TAC GAC GAC ГГС AAC Tyr Asp Asp Рйе Asn 290 GTG GGC АТС CTC TOT Vai Sly lie Leu Ser 305 АСА GCT GAC GGG ATG Thr Ala Asp Gly Met 325 AAA АТС TGG AAC TGA lie Э40 AGCAGCCCCC TGCCCGACCC TCCCACTAAG CTTTCTCCTT AGCATCAGGG ACACAGGGGC CAGTCCTCAC AGCCTCTCCC AGGCCCAGCA GACTTGAGTC CCTTTGTCCA GGCCTGGGTG C T A G G G T C C GGCCCTCTTC TAAGACACCT GCAJ.TAAAGT CATCTCATTC AGGTGTTCTC TGAGGGCaGT GCGGAECA"O AAAGAACTGC CCCATCTCCT T T W G A G C A AGGAC4ACCT TGJGGCCCCi GGCCCTAGCP GTATAGGGCG TTTGGCCCTG T T A ^ C A T G C TTTCTCCTTT GTAGCACCCT GGT TTCTATAT-C GGACTGTG CC CCCATGGCCT GCCCCTCCCC TTCCSCCCCC TGACTATCGC ТТСТАССТТг CGGGTGCCAT TTTGGGAGGC TCCCTCCCCA AGCCCTTTGC AGAGCCACTA TCTGGCACCA ЕТТЇСТСТСС О 1424 14S4 1517 та у випадку, якщотимін (Т) присутній у положенні 825, встановлення для суб'єкта підвищеного ризику захворювання, асоційованого з розрегулюванням G-білка 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що порівняння генів здійснюють шляхом секвенування 3 Спосіб за п 2, який відрізняється тим, що частину гену, що містить позицію 825, ампліфікують перед секвенуванням 4 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що порівняння генів здійснюють шляхом гібридизації 5 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що порівняння генів здійснюють шляхом розщеплення за допомогою ферментів рестрикції 6 Спосіб за п 5, який відрізняється тим, що в ньому використовують рестриктазу Dsal (О (О ю 56164 Даний винахід стосується способу діагностики хвороб шляхом генетичного аналізу, зокрема, аналізу генів субодиниць білків, що зв'язують гуаНІНОВІ нуклеотиди, (G-білків) Гетеротримерні білки, що зв'язують гуаншові нуклеотиди, (G-білки) відіграють важливу роль у внутрішньоклітинній передачі сигналу Вони опосередковують передачу позаклітинних сигналів після стимуляції рецепторів гормонів й інших рецепторів, які здійснюють конформаційну зміну після активації рецептора Це веде до активації G білків, які можуть потім активізувати або інгібувати внутрішньоклітинні ефектори (наприклад, ІОННІ канали, ферменти) Гетеротримерні G білки складаються з трьох субодиниць а, р та у субодиниць На сьогодні, декілька різних субодиниць а, 5 субодиниць р і приблизно 12 субодиниць у було виявлено біохімічними та молекулярно-біологічними методами (Birnbaumer, L and Birnbaumer, M Signal transduction by G proteins 1994 edition J Recept Res 15 213 - 252, 1995, Offermanns, S and Schultz, G Complex information processing by the transmembrane signaling system involving G proteins Naunyn Schmledebergs Arch Phanmacol 350 329 - 338, 1994, Nurnberg, В , Gudermann, T, and Schultz, G Receptors and G proteins as primary components of transmembrane signal transduction Part 2 G proteins structure and function J Мої Med 73 123 -132, 1995, Neer, E J Heterotnmenc G proteins Organizers of Transmembrane Signals Ce22 80 249 - 257, 1995, Rens-Domiano, S and Hamm, H E Structural and functional relationships of heterotnmenc G-protems FASEB J 9 1059 - 1066, 1995) Опосередкована рецептором активація певних а-субодиниць може бути інгібована попередньою обробкою токсином коклюшу (РТХ) Вони включають, зокрема, ізоформи а, такі як а,1, а,2, а,3 і різні оа субодиниці G-білки цих типів також згадані як РТХ-чутливі G-білки Ми виявили, що генетична модифікація гену субодиниці [33 G-білка людини є придатною для діагностики хвороб Ця генетична модифікація особливо придатна для встановлення ризику розвитку порушення, пов'язаних з розрегулюванням G-білка Крім того, винахід стосується способу встановлення відносного ризику розвитку порушень, пов'язаних з розрегулюванням G-білка для суб'єкта, що включає порівняння генної ПОСЛІДОВНОСТІ [33 субодиниці людського G-білка суб'єкта з генною ПОСЛІДОВНІСТЮ SEQ Ю N0 1, і у випадку, коли тимін (Т) є присутнім у положенні 825, встановлення для суб'єкта збільшеного ризику хвороби Генетична модифікація, що була знайдена, локалізується у субодиниці [33 гену G-білка людини Цей ген був описаний Levme et al (Proc Natl Acad Sci USA, 87, (1990) 2329 - 2333) Область кодування містить кодон Ser (ТСС) у положенні 275, у той час як суб'єкти зі збільшеним ризиком захворювання, пов'язаного з розрегулюванням Gбілку, містять кодон ТСТ, що також кодує Ser у цьому положенні Генетична модифікація - заміна основи в положенні 825, при якій цитозин (С) замінений тиміном (Т) Проте, така заміна основи є "німою" на амінокислотному рівні, тобто, вона не призводить до введення іншої амінокислоти в цьому положенні ПОСЛІДОВНІСТЬ, знайдена у суб'єктів із збільшеним ризиком захворювання показана у SEQ ID N0 1 у списку послідовностей Генетична модифікація, що була знайдена, звичайно зустрічається у гетерозиготній формі Порушення, пов'язані з розрегулюванням Gбілка, визначаються як хвороби, у яких G-білок бере участь у перенесенні сигналу і не виконує свою функцію фізіологічним способом Розрегулювання може мати кілька причин, наприклад, модифікація в структурному гені або модифікована експресія гену Порушення включають серцево-судинні хвороби, розлади обміну речовин та імунологічні хвороби Як приклади серцево-судинних хвороб можна згадати такі Артеріальна гіпертензія, артеріальна гіпертензія при вагітності (гестоз, артеріальна гіпертензія при вагітності), коронарна серцева хвороба, місцевий або загальний атеросклероз, стеноз кровоносних судин, рестеноз після процедур реваскуляризацм (наприклад, РТСА з та без імплантації стента), тенденція до інсульту або тромбозу та підвищеної агрегації тромбоцитів Як приклади розладів обміну речовин можна згадати такі Метаболічний синдром, нечутливість до інсуліну та пперінсулінемія, цукровий діабет 2-го типу, діабетичні ускладнення (наприклад, нефропатія, невропатія, ретинопатія, і т д ) порушення обміну ЛІПІДІВ, порушення центральної хеморецепци (толерантність до СОг, толерантність до ацидозу, раптова дитяча смерть (SIDS)) Як приклади імунологічних захворювань можна згадати такі Порушена сила імунної реакції організму (формування імуноглобулінів, агресивність Т-клітин та ПК-клітин), порушена загальна тенденція до проліферації, включаючи здатність до загоєння ран, тенденція до розвитку пухлин та проліферації, включаючи метастазійний потенціал злоякісно трансформованих клітин, тривалість латентного періоду після інфікування ВІЛ до того, як хвороба стає КЛІНІЧНО очевидною, саркома Капоші, тенденція до цирозу печінки, толерантність до трансплантата і відторгнення трансплантата Використання генетичної мутації ВІДПОВІДНО ДО винаходу є особливо корисним для встановлення ризику артеріальної гіпертензії, що розвивається Винахід, крім того, стосується отримання трансгенних тварин, що несуть генетичну мутацію, описану вище Трансгенні тварини цього типу є дуже важливими, зокрема, як тваринні моделі для дослідження і терапії порушень, описаних вище Способи отримання трансгенних тварин є загально відомими кваліфікованому спеціалісту Для способу, ВІДПОВІДНО до винаходу, встано 56164 влення відносного ризику розвитку хвороби, від В cells from hypertensive patients Hypertension 26 суб'єкта отримують зразок тканини тіла, що міс432 - 435, 1995, Rosskopf, D , Schroder, К-J , and тить генетичну інформацію суб'єкта Це, як правиSiffert, W Role of sodium-hydrogen exchange in the ло, здійснюють, шляхом відібрання крові та видіproliferation of immortalised lymphobiasts from лення з неї нуклеїнової кислоти patients with essential hypertension and normotensive subjects Cardiovasc Res 29 254 Встановлюють структуру гену субодиниці [33 259, 1995, Siffert, W , Rosskopf, D, Montz, A, G-білка з ізольованої нуклеїнової кислоти суб'єкта Wieland, T, Kaldenberg-Stasch, S , Kettler, N , та порівнюють її з ПОСЛІДОВНІСТЮ, позначеною як Hartung, К, Beckmann, S , and Jakobs, К Н SEQIDN0 1 Enhanced G protein activation in immortalized Структура гена може бути встановлена шляlymphobiasts from patients with essential хом секвенування нуклеїнової кислоти Це може hypertension J Clln Invest 96 759-766,1995) здійснюватись або безпосередньо з геномної ДНК, або після ампліфікації нуклеїнової кислоти, наприРНК отримали стандартними методами з іморклад, за допомогою методу ПЛР талізованих клітинних ЛІНІЙ ВІД гіпертоніків та транскрибували у кДНК з використанням зворотної Структура гена може визначатися на геномнотранскриптази кДНК, що кодує рЗ-субодиницю Gму рівні або також на рівні мРНК або кДНК білка ампліфікували та секвенували шляхом поліПереважно, и встановлюють шляхом секвенумеразної ланцюгової реакції (ПЛР) Для ПЛР виковання після ампліфікації шляхом ПЛР кДНК Приристовували такі олігонуклеотидні праймери датні для ПЛР праймери можуть легко бути виве5'-TGGGGGAGATGGAGCAACTG і дені кваліфікованим спеціалістом із 5'-CTGCTGAGTGTGTTCACTGCC послідовностей, описаних у SEQ ID NO 1 Переважною процедурою для цього є така, коли в кожУ порівнянні з ПОСЛІДОВНІСТЮ, опублікованою ному випадку обирають праймер, що зв'язується з Levme et al (Levme, М А , Smallwood, Р М , Моеп, ниткою ДНК та комплементарною ниткою перед і Р Т , Jr, Helman, L J , and Ahn, TG Molecular за потрібною позицією основи 825 cloning of [33 subunit, a third form of the G protein [3subumt polypeptide Proc Natl Acad Sci USA 87(6) Однак, ІНШІ методи можуть також використо2329 - 2333, 1950), наступна різниця була знайдевуватися для порівняння генів, наприклад вибіркона в кДНК з клітин гіпертоніків нуклеотид 825 цива гібридизація або відповідне картування з ресттозин (С) в області ПОСЛІДОВНОСТІ кодування замірикційними ферментами Заміна основ С -> Т в нений на тимін (Т) (нуклеотид 1 відповідає основі положенні 825, описана вище, веде до втрати діА в стартовому кодоні ATG) Ця заміна основи велянки розщеплення для рестриктази Dsa І, що де до німого поліморфізму, тобто амінокислота, також використовується для виявлення цього геяка кодується ВІДПОВІДНИМ триплетом основ (сенетичного поліморфізму рин) не змінюється в порівнянні з початковою ПОЯкщо суб'єкт має тимін (Т) у положенні 825, він СЛІДОВНІСТЮ Знайдену ПОСЛІДОВНІСТЬ ДНК описано повинний бути визначений, як такий, що має підBSEQIDNO 1 вищений ризик захворювання, ніж суб'єкт з цитозином (С) у цьому положенні Приклад 2 Далі винахід ілюструється в наступних приВиявлення генетичної модифікації у гіпертонікладах ків шляхом рестрикційного аналізу Приклад 1 На фігурі 1 зображено порівняння генів нормоТОНІКІВ та гіпертоніків шляхом рестрикційного анаВиявлення генетичної модифікації у гіпертонілізу У цьому способі, кДНК, що кодує [33, з клітин ків шляхом секвенування від нормотоніків (НТ) і гіпертоніків (ГТ), що була Збільшена чутливість до активації РТХампліфікована шляхом ПЛР, була піддана рестричутливих G-білків була виявлена в попередніх кційному аналізу, використовуючи фермент Dsa I дослідженнях у пацієнтів із значною артеріальною Продукти реакції були фракціоновані в агарозному гіпертензією Це дослідження було можливе на гелі, який зображено на фігурі 1 іморталізованих клітинах від пацієнтів, що мали як фенотипічний маркер підвищену активність Na/H Повна рестрикція [33 кДНК з клітин нормотоніобмінника Підвищена чутливість до активації РТХків після травлення Dsa І ясно видна на рисунку чутливих G-білків має важливі наслідки для клікДНК з клітин гіпертоніків тільки частково розщептинних функцій Вони включають підвищене форлена Dsa І Крім продуктів розщеплення, що очікумування внутрішньоклітинних вторинних месенвалися, присутні також нерозщеплені продукти джерів (наприклад, інозитол 1,4,5-трифосфату), ПЛР Контрольні фрагменти (маркери) завантажепідвищене звільнення ІОНІВ внутрішньоклітинного но ліворуч і праворуч для порівняння розмірів 2+ Са , підвищене утворення імуноглобулінів і збіЧотири з п'яти послідовностей ДНК від гіпертоніків, льшення швидкості росту клітини Через те, що ці зображені тут, показують заміну основи, описану зміни можна виявити в іморталізованих клітинах та вище, та є гетерозиготними з цієї модифікації після довгого культивування клітин, можна зробиОПИС ПОСЛІДОВНОСТЕЙ ти висновок, що ця модифікація є генетично закрі(1) ЗАГАЛЬНА ІНФОРМАЦІЯ пленою (Rosskopf, D , Fromter, E , and Siffert, W (і) ЗАЯВНИК Hypertensive sodium-proton exchanger phenotype (A) НАЗВА БАСФ Акцієнгезельшафт persists in immortalized lymphobiasts from essential (B) ВУЛИЦЯ Карл-Босх-Штрассе 38 hypertensive patients-a cell culture model for human (C) МІСТО Людвігшафен hypertension J Clln Invest 92 2553 - 2559, 1993, (E) КРАЇНА Федеративна Республіка Німеччина Rosskopf, D , Hartung, К, Hense, J , and Siffert, W (F) ПОШТОВИЙ ІНДЕКС D-67056 Enhanced immunoglobulm formation of immortalized (G) ТЕЛЕФОН 0621/6048526 56164 (Н) ТЕЛЕФАКС 0621/6043123 (1) ТЕЛЕКС 1762175170 (м) НАЗВА ЗАЯВКИ Спосіб діагностики захворювань шляхом аналізу генів (їм) КІЛЬКІСТЬ ПОСЛІДОВНОСТЕЙ 2 (iv) КОМП'ЮТЕРНА ФОРМА ЗАПИСУ (A) ТИП НОСІЯ Дискета (B) КОМП'ЮТЕР IBM PC сумісний (C) ОПЕРАЦІЙНА СИСТЕМА PC-DOS/MS-DOS (D) ПРОГРАМНЕ ЗАБЕЗПЕЧЕННЯ Patentln Release #1 0, Version#1 25 (ЕРА) (2) ІНФОРМАЦІЯ ПРО SEQ ID NO 1 (і) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛІДОВНОСТІ (A) ДОВЖИНА 1517 пар основи (B) ТИП Нуклеїнова кислота (C) КІЛЬКІСТЬ СПІРАЛЕЙ Подвійна (D) ТОПОЛОГІЯ лінійна (м) ТИП МОЛЕКУЛИ кДНК для мряк (їм) ГІПОТЕТИЧНИЙ НЕМАЄ (iv) АНТИ-СЕНС НЕМАЄ (vi) ДЖЕРЕЛО ПОХОДЖЕННЯ (А) ОРГАНІЗМ Homo sapiens (їх) ОСОБЛИВОСТІ (A) КЛЮЧ CDS (B) РОЗТАШУВАННЯ 1 1024 (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ SEQIDNO 1 105 1.0 СЇС GAC AAC KTG TGT ТСС АТС ТАС ААС СТС ААА ТСС LeQ Asp А5П Met Cys Sec U s Тує Ази Leu Lys Ser 120 125 GTC AAG GTC SGC CGG GAG CTI ЯСЇ GCT CkC АСА GGT Val Lys Val Ser Arg Glu Lau Ser Ala His Thr Gly 135 Ш TGC CGC ТЇС CTG SAT GAC AAC AAT ATT GTS АСЄ AGC Суз Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn H e Val Thr Ser tSO 155 ACG TGT GCC ITS TGG GAC ATT GAG ACT GGG CAG CAG Thr Cys Ala Lea Trp Asp H e Glu Thr Gly Gin Gin 165 170 115 AAG ACT GTA ТЇТ GTG GGA CAC ДСС GG? GftC TCC ATG AGC CTG GCT GTG Lys Thr Val Fha Val Gly His Thr Gly Asp Cys Met Ser Leu Sla Val 1B0 135 ISO TCT CCT GAC ГТС AA? CTC TTC АТЇ TCG GGG GCC TGT GAT GCC ACT GCC Ser Р Ї П Asp Pbe Asn Leu Phe H e Ser Gly Al« Cys Asp Ala Sex Ala liS 200 IBS AAG CTC SGG SAT GTG CGA GAG GGG ACC TGC CGT CSG ACT TTC ACT GGC Lys Leu Trp asp Val Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly 270 Ї10 215 CSC GAG TCG GAC АЇС AAC GCC АТС TGT TTC TTC CCC AAT GG=i GAG GCC His Glu Ser Asp lie Asn Ala H e Cys Phe Phe Pro A S K Gly Glu Ala 225 330 ЗЭ5 240 АГС TGC ACG GGC TCG G M GSC GCT TCC TGC CGC TTG Ї М GAC CTG CGG H e Cys ?bx Gly Ser Asp Asp Ala Ser Cys Arg LeU Phe Asp LSI! Srg 245 250 255 GCA GAC CAG GAG CTG АТС TGC TTC TCC CAC SAS AGC ЙТС АТС TGC GGC Ala asp Gla Glu bsu Т І Й Cys Phe Ser His Glu Ser H a H e Cys Gly 370 АТС ACG ?ст GTG асе TTC тсс стс AGT GGC CGC ста ста ттс ест GGC lle Thr Ser Val Ale Phe Eer Leu Ser Gly Arg Lea Leu Phe Ala Gly 275 286 sas TAC GAC GAC TTC M C TGC AAT GTC TSS GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT Tyr Asj йзр Phe Asn Cys Aan Val Trp Asp Eer Met Lys Ser Glu Arg 300 250 295 GTG GGC АТС CTC TCT GGC СДС GBT AAC SGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC Val Gli H e L E U Ser Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val 305 310 315 3J0 АСА GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC АСА GGT TCC TGG GAC AGC TTC CTC The Ala Asp Gly Met Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp 4sp Ser Phe Lea 325 330 335 AAA АТС TSG AAC TGA G GAGGCTGGAG MAGGGAAGT GGAAGGCAGT GAACACACTC Lys lie Trp Asn * GGG GAG AfG GAG CAA Gly Glu Het Glu Gin S CAG ATT GCA GAT GCC AGG Gin lie Ala Asp Ala A:g AGCAGCCCCC TCCCACTAAG AGCA^TCSSGG CAGTCCTCAC AGGCCCAGCA CCTTTGTCCA CTAGGGTCCT SAACIC'CC? GTG TCT GGC Val Ser Gly GAG Glu ACG TTA AGG GGA CAC Ti>r Let ArgGly His GAT TCT AAG Aso Ser Lys GTG TCG GAC AGC TAC ACC Val Tip Ssp Sec Tyr Thr TCC TGG GTC Ser Trn Val ACC Thr CTG CGT CAG GAA GCG GAG Leu АГ7 Gin Glu Ala Glu 10 AAA GCC ЇЄТ GCT GAC e?T Lys Ala Cys Ala Asp Val 25 GTG GTG GGA CGA QIC CAG Val Val Gly Arg Val Gin 40 CTG GCC AAG ATT TAC GCC Leu Ala Lys H e Tyr Ala 55 60 GCC TCG CAA GAT Ala Ser Gin Asp 75 ACC AAC AAG GTG CAC GCC Thr Aan Lys Val His Ala CAG CTC AAG AAG Gin Laa Lys Lys ACT CTG GCA GAG Thr Leu Ala Glu ATG CGG ACG CGG Het Arg Thr Arg ATG CAC TGG GCC Het U s Trp Ala GGS AAG CTG АТС C-Іу Lys Leu H e 80 АТС CCA CTG CGC H e Pro Leu Arg 95 TGT GCC TAT GCC CCA УСА GGG AAC ITT GTC Cys Ala Tyr SIa Pro Ser Gly Asn Phe Val 150 GCA TGT GGG GGG Ala Cys Gly Gly І15 СЙ? GAG GSC AAT Ar? Glu Gly Asa 130 TAT CTC TCC TGC Tyr Leu Set Cys 1« TCG GSG GAC ACC Ser Gly KEp T°ir TGCCCHACCC СТГТСТССТТ ACSCAGGGGC AGCCTCTCCC GACTTSAGTC GGKTSGGTG GGCCCTCTTC GCkATAAAGT CATCTCATTC AGGTGTTCI'C ТТСТАЇАЇТС TGAGGGCAGT GGGGAGCATG GGACTGTGCC AAAGAACTGC CCCATCTCCT CCCATGGCeT TTAATGAGCA AGGACAACCT GCCCCTCCCC TGAGGCCCCA GGCCCTASG!| TTCCTCCCCC GTATAGGGCG TTTGGCCCTG TGACTATSGC TTATTCATGC TTTCTCCTTT ТТСТАССЇТТ GTAGCACCCT GGT CGGGTGCCAT TTTSGGAGGC TCCCTCCCCA AGCCCTTTGC AGAGCCACTU TCTGGCACCA TTTTCTCTCC (2) ІНФОРМАЦІЯ ПРО SEQ ID NO 2 (і) ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОСЛІДОВНОСТІ (A) ДОВЖИНА 341 амінокислота (B) ТИП Амінокислотна (D) ТОПОЛОГІЯ лінійна (м) ТИП МОЛЕКУЛИ білок (хі) ОПИС ПОСЛІДОВНОСТІ SEQIDNO 2 UB4 1244 i3O4 1364 1424 1434 1517 56164 Met Gly Glu Met Glu 1 5 Gin lie Ala Asp A U 20 Leu val Ser Gly Leu 35 Arg Thr Leu Arg Gly 50 ?hx Asp Бег Lys Leu 65 Val Trp Ssp Ser Tyr B5 Ser Ser Trp val Met 100 Ala Cys Sly Gly Lej 115 Ara Glu Sly Asn Val 130 Tyr Leu Ser Cys Cys Ser Gly ftsp Thr Thr 165 Lys Thr Val Pne Val 180 Eer Pro Asp Phe Asn 195 Lys Leu Trp Asp Val 210 4^5 Glu Sec ftsp l i e 225 l i e Cys Thr Gly Ser 245 Ala Asp Glii Glu Leu 2SG H e Thr Ser Val Ala Tyr Asp Asp JPhe Asn 290 Val Gly H e Leu Sec 305 Thr Ala Asp Gly Met 325 Lys l i e Tro Asn * 340 Gin Leu Arg Gin Glu Ala Glu Gin Leu bvs Lys 10 15 Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu « a Glu 25 30 Glu Val Val Gly Arg Val Gin Het Arg Thr Arg 40 45 His Leu Ala Lya H e Tyr Ala Met His Trp Ala 55 60 Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu lie 70 75 SO Thr Thr Asa Lys Val His Ala H e Pro Leu Arg SQ 95 Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val 105 110 Asp Asn Met Cys Ser H e Tyr Asn Leu Lys Eer 120 125 Lys val Sar Arg Glu Lej Ser Ala His Thr Gly 135 140 firg Phe Lea Asp Asp Asn Asn lie Val Thr Eer 150 155 160 Cys Ala Leu Trp &sp lie Glu Thr Gly Gin Gin 170 175 Gly Sis The Gly Asp Cys Het Sar Leu Ala Val 135 190 Leu Phe H e Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala 200 305 Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly 215 220 Rsn Ala H e Cys Phe Phe Fro Asn Gly Glu Ala 230 235 240 Asp Asp Ala Ssr Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg 250 255 H e Cys Phe Sej Eia Glu Ser H e lie Cys Gly 265 270 Phe Ser Leu Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Sly 260 2S5 Cys Asn Val Trp Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg 295 300 Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val 3io 315 эго Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu 330 335 Підписано до друку 05 06 2003 p 10 H T H T H T I T Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 m гт п гт гт