Спосіб одержання засобу з діуретичною дією

Спосіб одержання засобу з діуретичною активністю шляхом дробного екстрагування 50 % спиртом етиловим рослинної сировини і подальшим упарюванням одержаного сумарного екстракту та cушінням, який відрізняється тим, що послідовно тричі по 12 годин екстрагують траву вівса посівного (Herba Avenae sativae L.) при співвідношенні сировина:екстрагент 1:10. (19) (21) u201107580 (22) 16.06.2011 (24) 10.01.2012 (46) 10.01.2012, Бюл.№ 1, 2012 р. (72) БУРЦЕВА ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВНА, ТЕРНИНКО ІННА ІВАНІВНА (73) БУРЦЕВА ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВНА, ТЕРНИНКО ІННА ІВАНІВНА 3 66593 ву вівса посівного послідовно тричі по 12 годин при співвідношенні сировина: екстрагент 1:10. Як рослинну сировину вибрано траву вівса посівного стадії молочно-воскової стиглості Herba Avenae sativae L. родини м'ятликових - Роасеае, яка широко культивується на території України. Саме вибір виду рослинної сировини у поєднанні з заданими параметрами способу обумовлює одержання кінцевого продукту з необхідним спектром фармакологічної активності, дозволяє розширити арсенал існуючих біологічно активних речовин, придатних до одержання лікарських засобів у різних лікарських формах, надаючи, тим 4 самим, можливість індивідуального підходу до лікування хворих. Авторами вперше було виявлено діуретичну активність густого екстракту трави вівса посівного, одержаного заявленим способом. Вибір екстрагенту, співвідношення сировина:екстрагент, оптимального часу та кратності екстракції здійснювали експериментальним шляхом, виходячи з умов максимальної екстракції діючих речовин з сировини. Основними діючими речовинами є фенольні сполуки, а саме - флавоноїди, за вмістом яких і визначали ефективність екстракції. Дані експериментів наведено у таблицях 1-4. Таблиця 1 Вибір оптимального екстрагенту при екстракції трави вівса посівного № досліду 1. 2. 3. 4. Екстрагент 70 % етиловий спирт 50 % етиловий спирт 30 % етиловий спирт Вода очищена Вихід готового продукту, % 6,05 % 8,31 % 7,54 % 11,16 % Примітка: Екстракцію проводили при співвідношенні сировина:екстрагент - 1:5, водноспиртовими розчинами екстрагували протягом 12 годин при кімнатній температурі, водою - впродовж 4 годин при 90 °C. Згідно експериментальним даним оптимальним екстрагентом є 50 % етиловий спирт, адже при екстракції саме цим розчином спостерігається максимальний вихід густого екстракту (окрім води очищеної; але екстракт, отриманий за допомогою Вихід флавоноїдів, % 17,66 % 18,01 % 5,25 % 0% води очищеної взагалі не містив флавоноїдів) та кількісний вміст флавоноїдів (табл. 1). Елективним інтервалом співвідношення сировини до екстрагенту є 1:10. При зменшенні цього співвідношення значно зменшується вихід готового продукту (табл. 2). Збільшення співвідношення недоцільне, тому що показники виходу практично не змінюються, а витрати спирту етилового зростають. Отже оптимальним співвідношення сировини до екстрагенту є 1:10. Таблиця 2 Визначення співвідношення сировина:екстрагент при екстракції трави вівса посівного 50 % спиртом етиловим № досліду 1. 2. 3. Співвідношення сировина: екстрагент 1:5 1:10 1:20 Вихід готового продукту, % Вихід флавоноїдів, % 8,31 % 11,65 % 12,02 % 18,01 % 17,28 % 15,87 % Примітка: Екстракцію проводили протягом 6 годин при кімнатній температурі. Аналіз даних таблиці 3 свідчить, що ефективним інтервалом часу екстракції є 12 годин. Зменшення цього часу не дозволяє вичерпно екстрагувати фенольні сполуки з сировини. Збільшення не забезпечує зростання показників виходу готового продукту і діючих речовин і є економічно недоцільним. Отже оптимальний час екстракції - 12 годин. Таблиця 3 Визначення оптимального часу екстракції трави вівса посівного 50 % спиртом етиловим при співвідношенні сировина: екстрагент 1:10 № досліду 1 2 3 4 Час екстракції, години 6 12 18 24 Вихід готового продукту, % 6,95 % 11,65 % 11,98 % 12,05 % Вихід флавоноїдів, % 17,28 % 17,20 % 16,75 % 16,61 % 5 66593 Згідно з результатів, наведених в таблиці 4, є триразова екстракція сировини є оптимальною кратністю. Адже саме при триразовій екстракції 6 найвищій вихід готового продукту при незначному зменшенні вмісту флавоноїдів в екстракті. Таблиця 4 Визначення кратності екстракції трави вівса посівного 50 % спиртом етиловим при співвідношенні сировина: екстрагент 1:10 протягом 12 годин № досліду 1 2 3 Кратність екстракції 1 раз 2 рази 3 рази Вихід готового продукту, % 11,65 % 14,42 % 16,78 % Заявлений спосіб здійснюють наступним чином: траву вівса посівного стадії молочно-воскової стиглості (Herba Avenae sativae L.) подрібнюють і послідовно тричі по 12 годин екстрагують 50 % етиловим спиртом у співвідношенні сировинаекстрагент 1:10, отримані екстракти об'єднують, фільтрують, відганяють екстрагент під вакуумом і досушують до густого екстракту. Вихід готового продукту - 16,78 %. В результаті здійснення заявленого способу одержують засіб з діуретичною активністю у формі густого екстракту темно-коричневого кольору зі слабким характерним запахом. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 1000 г повітряно-сухої сировини трави вівса посівного (Avena sativa L.), подрібненого шляхом вальцювання, вміщували в екстрактор, заливали 12,7 л 50 % спирту етилового. При проведенні першої екстракції вміст екстрагенту було збільшено з урахуванням коефіцієнту поглинання на 2,7 л, тобто на таку кількість, яка поглинається повітряно-сухою сировиною при намочуванні. Екстракцію проводили при кімнатній температурі 12 годин. Процес було повторено тричі. Отримані екстракти об'єднували, фільтрували і помістили в вакуумновипарний апарат при температурі 50 °C і тиску 85 кПа. Екстракт упарили і досушили до густого екстракту у сушильній шафі при температурі 60 °C. Отримали 167,8 г цільового продукту, що у перерахунку до повітряно-сухої сировини складає 16,78 %. Приклад 2. Вивчення діуретичної активності густого екстракту трави вівса посівного проводили на білих щурах-самцях масою 240-260 г за методом Е.Б. Берхіна [1]. Досліди проводилися у віварії ЛугДМУ згідно вимог Комісії з біоетики ДЗ «ЛугДМУ» (наказ Вихід діючих речовин, % 17,20 % 17,15 % 17,12 % № 6 від 02.09.2009 р.) відповідно до методичних рекомендацій [6], а також згідно правил GLP [8-10]. Дослідних тварин було поділено на 6 груп по 6 щурів: група 1 - контрольна; групи 2, 3, 4 - тварини, що одержували засіб, одержаний за заявленим способом, у дозах 25 та 50 та 100 мг/кг; групи 5 та 6 - тварини, що одержували препарат порівняння фітоліт в дозах 24 та 35 мг/кг. Дозу фітоліту для тварин розраховували за методом Ю.П. Риболовлева і співавт. з використанням коефіцієнтів видової стійкості, виходячи з разової дози препарату для людини [5]. При вивченні водного діурезу тварини отримували стандартну дієту у вигляді гранульованого корму за встановленими нормами при вільному доступі до води. До водного навантаження білих щурів протягом 3 годин позбавляли води та їжі. Досліджувані речовини вводили перорально (внутрішньошлунково), у вигляді водних розчинів. Одночасно проводили контрольні дослідження на тваринах з аналогічним воднохарчовим раціоном, яким замість досліджуваних препаратів вводили воду в еквівалентній кількості. Після цього тваринам до шлунку за допомогою зонду вводили водне навантаження в кількості 3 % від маси тіла. Відразу ж після водного навантаження дослідних тварин поміщали до індивідуальних кліток, пристосованих для збору сечі. Кількість сечі враховували щогодини протягом 4 годин. Кількість сечі, виділеної контрольною групою тварин, приймали за 100 %. Розрахунок діуретичної активності проводили за наступною формулою: V  100 % ДА  о Vк де, ДА - діуретична активність, %; Vo - об'єм сечі, виділеної тваринами дослідної групи, мл/100 г; Vк - об'єм сечі, виділеної тваринами контрольної групи, мл/100 г. Результати дослідів представлені в таблиці 5. 7 66593 8 Таблиця 5 Показники діуретичної активності засобу, одержаного за заявленим способом Досліджувані засоби Доза, мг/кг Контроль 25 50 100 24 35 Засіб, одержаний за заявленим способом Фітоліт Діурез через 2 години 4 години Активність до контАктивність до конмл/100 г мл/100 г ролю, % тролю, % 1,655±0,237 100 1,719±0,187 100 2,334±0,163* 141 2,77±0,068** 161 1,472±0,225 89 1,981±0,160 115 1,625±0,204 98 2,00±0,161 116 1,357±0,141 82 1,728±0,316 101 1,768±0,213 107 2,338±0,171* 136 Примітка: * і ** - вірогідність результатів при р