Спосіб діагностики мікозів стоп, кистей і оніхомікозів

Реферат: Спосіб діагностики мікозів стоп та кистей і оніхомікозів включає визначення збудника за мікроскопічними та культуральними ознаками. У хворих із гострозапальними явищами мікозів, а також у пацієнтів з діагнозом мікоз стоп і/або кистей і при відсутності позитивних результатів мікологічних досліджень нігтів чи у випадках, коли у хворого з групи ризику при клінічній симптоматиці грибкового ураження неодноразово отримують негативний результат мікроскопічної і культуральної діагностики, призначають ПЛР-діагностику з використанням пангрибкових праймерів ITS 4 і ITS 5. UA 68645 U (54) СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ МІКОЗІВ СТОП, КИСТЕЙ І ОНІХОМІКОЗІВ UA 68645 U UA 68645 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, зокрема до дерматології, і може бути використана для діагностики мікозів стоп та кистей і оніхомікозів. Мікоз стоп та кистей і оніхомікоз є одними з основних інфекційних дерматозів, обумовлених дерматоміцетами, дріжджовими і плісеневими грибами. Звертає на себе увагу зростання кількості хворих на мікози стоп, кистей та оніхомікози, питомої частки пацієнтів з розповсюдженими тяжкими формами, торпідними до традиційних методів терапії, збільшення кількості рецидивів і випадків повторного ураження [Рукавишникова В.М. Микозы стоп. - М.: ЭликсКом, 2003. - 332 с.; Кутасевич Я.Ф. Микозы стоп / Я.Ф. Кутасевич // Клінічна імунологія. Алергологія. Інфектологія. - 2007. - № 2 (7). - С. 23-28]. Це пов'язують із зниженням резистентності організму людини на фоні несприятливих факторів зовнішнього середовища, збільшенням пацієнтів із групи ризику, у тому числі які активно відвідують місця, де можливе зараження цією інфекцією, а також із загальним старінням населення, що має множинну супутню патологію [Сергеев А.Ю. Грибковые инфекции / А.Ю. Сергеев, Ю.В. Сергеев. - М.: Бином, 2008. - 360 с.; Gupta A.K. Assessing the efficacy of the oral antifungal agents in the management of dermatophyte toenail onychomicosis / A.K. Gupta // PS94 Venerology JEADV. - 2004. - Vol. 18, suppl. 1. - P. 58-59]. Негативний патоморфоз перебігу мікозів свідчить про недостатню ефективність традиційних методів діагностики, що у подальшому обумовлюють недостатню ефективність традиційних методів лікування. Діагностика мікозів ґрунтується на мікроскопічних та культуральних методах [Культуральна діагностика дерматомікозів: Метод. рек. / Уклад.: І.І. Мавров та ін. - К.: Т-во "Знання" України, 2004. - 21 с.]. Відомий комплекс діагностики мікозів стоп, кистей і оніхомікозів включає два етапи: мікроскопічне дослідження, яке надає висновок тільки про природу інфекції, та подальше культуральне дослідження, при якому патологічний матеріал засівається на живильне середовище та культивується протягом 7-14 діб і на підставі вивчення форми, характеру поверхні, кольору колоній та їх мікроскопічних особливостей визначається видова приналежність збудника мікозу [Культуральна діагностика дерматомікозів: Метод. рек. / Уклад.: I.I. Мавров та ін. - К.: Т-во "Знання" України, 2004. - 21 с.]. Зазначений комплекс діагностики мікозів стоп та кистей і оніхомікозів є найбільш близьким до того, що заявляється, за технічною суттю та результатом, який може бути досягнутим, тому його вибрано за найближчий аналог. Проте у цьому комплексі діагностики є свої недоліки. Низька чутливість та специфічність культурального методу при гострому запаленні та формах, коли діагностується мікоз стоп і/або кистей та при відсутності позитивних результатів мікологічних досліджень нігтів при наявності клінічної симптоматики. У зв'язку з вищевикладеним, в основу корисної моделі поставлено задачу підвищення ефективності діагностики мікозів стоп, кистей і оніхомікозів. Задачу, яку поставлену в основу корисної моделі, вирішують тим, що у відомому способі діагностики мікозів стоп та кистей і оніхомікозів, що включає визначення збудника за мікроскопічними та культуральними ознаками, згідно з корисною моделлю, хворим із гострозапальними явищами мікозів, а також пацієнтам з діагнозом мікоз стоп і/або кистей і при відсутності позитивних результатів мікологічних досліджень нігтів чи у випадках, коли у хворого з групи ризику при клінічній симптоматиці грибкового ураження неодноразово отримують негативний результат мікроскопічної і культуральної діагностики, додатково призначають ПЛРдіагностику з використанням пангрибкових праймерів ITS 4 і ITS 5. Технічний результат корисної моделі, що заявляється, полягає в тому, що у пацієнтів при гострому запаленні та формах, коли діагностується мікоз стоп і/або кистей та при відсутності позитивних результатів мікологічних досліджень нігтів при наявності клінічної симптоматики призначають ПЛР-дослідження з використанням пангрибкових праймерів, що специфічно виявляють висококонсервативні ділянки ДНК збудників. Спосіб діагностики мікозів стоп та кистей і оніхомікозів здійснюють таким чином. Визначення збудника за мікроскопічними та культуральними ознаками виконують за стандартними методами. Виділення ДНК проводять зі шкіри та нігтів фенольним методом, після чого проводять ампліфікацію отриманого ДНК з використанням пангрибкових праймерів ITS 4 і ITS 5. Умови ампліфікації з цими праймерами такі: після початкової денатурації протягом 3 хв. при 95 °С проводять 25-30 циклів: 95 °С - 15 с, 50 °С - 10 с, 60 °С - 4 хв. Після закінчення ампліфікації проводять детекцію продуктів реакції електрофорезом в 1,5 % гелі агарози в трис-ацетатному буфері з 0,5 мМ етидіума броміду, протягом 15 хв., після чого аналізують за допомогою трансілюмінатора зі світлом з довжиною хвилі 310 нм. При позитивному результаті виявляють амплікони певної величини. Залежно від розміру амплікона визначають видову приналежність 1 UA 68645 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 грибка [Polymerase chain reaction for early diagnosis of post-operative fungal endophthalmitis / B. Tarai, A. Gupta, P. Ray et al. // Indian J. Med. Res. - 2006. - Vol. 123. - P. 671-678.]. Ефективність способу ілюструють наступні приклади його клінічного застосування. Приклад 1. Хвора П., 56 років. Надійшла у дерматологічне відділення з діагнозом екзема. Хворіє на екзему три роки. У хворої загострення спостерігається до шести разів на рік, останнє - протягом трьох тижнів, що пов'язане з підвищенням температури навколишнього середовища, коли у хворої з'явилася виражена гіперемія, запальна інфільтрація, лущення, ексудація. З анамнезу виявлено, що чоловік хворої страждає на мікоз та оніхомікоз. Супутня патологія: варикозний симптомокомплекс. У зв'язку з вираженою ексудацією на момент госпіталізації у хворої неможливе мікроскопічне і культуральне мікологічне дослідження. Хворій призначено антигістамінні, дезінтоксикаційні, десенсибілізуючі засоби, а також ПЛР-діагностику. У результаті проведеної діагностики було виявлено амплікон розміром 392 н.п., що відповідає ДНК гриба виду Trichophyton mentagrophytes var interdigitale. Хворій додатково призначено комплекс протимікотичної терапії, що включає ламізил по 250 мг 1 раз на добу протягом 14 днів, десенсибілізуючі, антигістамінні, ангіопротекторні препарати. Місцево: міконазол 2 рази на день протягом 14 днів, комплекс антимікотичних профілактичних заходів. Через 7 днів запальні явища значно зменшилися, мокнуття було відсутнім. На 15-ту добу у хворої методом ПЛР гриби не були виявлені. Хвора виписана у стані клінічної ремісії на 17-й день з дотриманням загальних протимікотичних рекомендацій. Приклад 2. Хвора Ф., 32 роки, хворіє на мікоз шкіри стоп протягом року, коли вперше в ділянці міжпальцьових проміжків і склепіння стоп з'явилося лущення і незначна гіперемія. При мікроскопічному дослідженні був виявлений міцелій грибків, установлений діагноз мікоз стоп і призначено комплексну терапію, що включала загальні рекомендації та мазь клотримазол. Однак пацієнтка не лікувалася. Повторно звернулася до лікаря у зв'язку з помутнінням нігтьових пластин і появою пунктиформних втиснень. З анамнезу встановлено, що хвора часто відвідує манікюрний кабінет перукарні. При мікроскопічному та культуральному мікологічному дослідженнях грибки у нігтьових пластинах не знайдено. Хворій призначено ПЛР-діагностику. Було виявлено амплікон розміром 925 н.п., що відповідає ДНК грибів виду Trichophyton rubrum. Хворій було поставлено діагноз мікоз стоп, оніхомікоз. Хворій була змінена терапія, призначено орунгал по 2 т. 2 рази на день 7 днів 1 раз на місяць № 3, проведено видалення уражених ділянок нігтьових пластинок, змазування стоп маззю ламізил два рази на день. Через три місяці у хворої при ПЛР-діагностиці в нігтьових пластинках ампліконів, що відповідають ДНК грибків, не було знайдено. Хворій було рекомендовано дотримання загальних протимікотичних рекомендацій. Приклад 3. Хворий С., 26 років. був прийнятий у відділення з діагнозом оніходистрофія кистей і стоп. З анамнезу встановлено, що ураження шкіри кистей і стоп, нігтьових пластин І, V пальців стоп і І пальця правої кисті з'явилося 3 роки тому, хворий не лікувався. Протягом останнього року з'явилося ураження нігтьових пластин III пальця правої кисті та II пальця лівої, а також з'явилося незначне почервоніння, спостерігалося лущення на долонях і стопах. При неодноразовому мікроскопічному та культуральному дослідженнях уражених нігтьових пластин і ділянок шкіри долонь грибки не виявлялися. Хворому у зв'язку з оніходистрофією було призначено за місцем проживання протизапальну терапію і засоби, що покращують трофіку тканин та включають прийом полівітамінів (ревалід по 2 таблетці 3 рази на день), цинктералу по 1 таблетці 2 рази на день, судинозміцнюючих засобів (трентал по 1 таблетці З рази на день), антигістамінних засобів. У зв'язку з характерною клінічною картиною грибкового ураження шкіри та нігтів хворому було призначено мікроскопію і культуральне дослідження лусочок шкіри та частин уражених нігтьових пластин. У зв'язку з негативним результатом, що можливо пов'язано зі складностями культуральної діагностики, хворому була проведена ПЛР-діагностика частин уражених нігтьових пластинок кистей і стоп, а також лусочок з осередків ураження шкіри долонь і стоп. Було виявлено амплікон розміром 925 н.п., що відповідає ДНК грибків Trichophyton rubrum. Хворому було поставлено діагноз: мікоз стоп і кистей, оніхомікоз. Було призначено антифунгальну терапію з використанням системних антимікотиків (ламізил по 250 мг 1 раз на добу протягом 12 тижнів), комплекс протимікотичних заходів з використанням ламізилу крему 2 рази на добу. Через 12 тижнів у хворого спостерігалася клінічна ремісія, що було підтверджено методом ПЛР. 2 UA 68645 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб діагностики мікозів стоп та кистей і оніхомікозів, що включає визначення збудника за мікроскопічними та культуральними ознаками, який відрізняється тим, що у хворих із гострозапальними явищами мікозів, а також у пацієнтів з діагнозом мікоз стоп і/або кистей і при відсутності позитивних результатів мікологічних досліджень нігтів чи у випадках, коли у хворого з групи ризику при клінічній симптоматиці грибкового ураження неодноразово отримують негативний результат мікроскопічної і культуральної діагностики, додатково призначають ПЛРдіагностику з використанням пангрибкових праймерів ITS 4 і ITS 5. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3