Мазева композиція для зовнішнього лікування мікозів стоп

Мазева композиція для зовнішнього лікування мікозів стоп, що включає діючу лікарську речовину та мазеву основу, яка відрізняється тим, що як діючу лікарську речовину вона включає фармакологічно активну субстанцію, одержану з плодових тіл грибів-базидіоміцетів Lactarius pergamenus, яку вводять у мазеву основу, наприклад, за прописом Кутумової Е.Н., в кількості 2-5 %. (19) (21) u201008043 (22) 29.06.2010 (24) 25.11.2010 (46) 25.11.2010, Бюл.№ 22, 2010 р. (72) ЗАЙЧЕНКО ОЛЕКСАНДР ІЛЛІЧ, ПАНЧАК ЛІДІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, АНТОНЮК ВОЛОДИМИР ОЛЕКСАНДРОВИЧ, НЕМЧЕНКО ОЛЕГ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, ГОШКІНА СВІТЛАНА БОРИСІВНА, ЦИВІНСЬКА МАР'ЯНА ВОЛОДИМИРІВНА, СТОЙКА РОСТИСЛАВ СТЕПАНОВИЧ, КОРНІЙЧУК ОЛЕНА ПЕТРІВНА, ДАНИЛЕЙЧЕНКО ВАЛЕРІЙ ВАСИЛЬОВИЧ (73) ЗАЙЧЕНКО ОЛЕКСАНДР ІЛЛІЧ, ПАНЧАК ЛІДІЯ ВОЛОДИМИРІВНА, АНТОНЮК ВОЛОДИМИР 3 54969 Мазеву композицію для зовнішнього лікування мікозів стоп виготовляють таким чином. Зібрані плодові тіла грибів-базидіоміцетів Lactarius pergamenus висушують в сушильній шафі при температурі +45 - +70°С. Потім подрібнюють і екстрагують діючі речовини в апараті Соксклета за допомогою метанолу. Метанольний екстракт концентрують шляхом відгонки до 1/4 від початкового об'єму і поміщають в морозильну камеру при -18°С. Осад, що при цьому випадає видаляють центрифугуванням або фільтруванням. Розчинник з надосадової рідини видаляють відгонкою або випаровуванням при температурі не вище +70°С. Одержують в'язку рідину коричневого кольору. Цю рідину обробляють гексаном або петролейним ефіром (tKHn - +40 +65°С), що екстрагують речовини, активні проти грибків Candida albicans, а також Trichophyton rubrum та Trichophyton violaceum. Цю субстанцію використовують як основну фармакологічно активну складову композиції для лікування мікозів. Лікувальну композицію виготовляють таким чином. Готують мазеву основу, наприклад, беруть основу за прописом Кутумової Е.Н.: 10 г емульгатора Т 2 на гарячій водяній бані змішують з 60 г вазеліну з перемішуванням до їх взаємного розчинення. Далі туди вливають 30 мл гарячої (+80° С) 4 води. Все старанно перемішують, потім додають 2,0 - 5,0 г субстанції, одержаної за способом, описаним вище, і знову старанно перемішують. Після цього розливають в скляні або пластикові баночки з широким горлом і залишають до застигання. Одержану мазеву композицію використовують для втирання в уражену мікозом шкіру ніг та міжпальцевих складок. Дослідження бактеріостатичної дії фармакологічно-активної субстанції. З цією метою готували 1% розчин фармакологічно-активної субстанції в 96° етанолі за способом, описаним вище. На чашки Петрі з середовищем Сабуро суцільним газоном засівали завісину добової культури Candida albicans різних клінічних штамів, а також по одному штаму грибів Trichophyton rubrum та Trichophyton violaceum. В центрі було інокульовано 50 мкл етанольного розчину фармакологічно активної субстанції з концентрацією 10 мг/мл. Бактеріостатичну активність по відношенню до культур клінічних штамів оцінювали за величиною зони затримки росту навколо лунки з розчином фармакологічно активної субстанції, в якості позитивного контролю було використаностандартні паперові диски з ністатином (Табл.1). Таблиця 1 Дія фармакологічно активної субстанції, одержаної з плодових тіл Lactarius pergamenus на штами патогенних грибів № штаму 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 Мікроорганізм Candida albicans (еталон, штам) Candida albicans (клініч.штам №1) Candida albicans (клініч.штам №2) Candida albicans (клініч.штам №3) Candida albicans (клініч.штам №4) Candida albicans (клініч.штам №5) Candida albicans (клініч.штам №6) Candida albicans (клініч.штам №7) Candida albicans (клініч.штам №8) Candida albicans (клініч.штам №9) Candida albicans (клініч.штам №10) Trichophyton rubrum Trichophyton violaceum Діаметр зони затримки росту (в мм) Етанол (коНістатин 1 % р-н активної субстанції нтроль) (контроль) 37 0 24 0 0 20 11 0 18 0 0 28 25 0 20 22 0 0 18 0 27 14 0 0 9 0 22 0 0 23 28 0 25 30 Н.д. Н.д 29 Н.д. Н.д. Примітка: Н.д. - дія не досліджувалась. Дослідження хімічного складу фармакологічноактивної субстанції. Фармакологічно-активну субстанцію розділяли за допомогою хроматографії на колонці силікагелю Л 40/160 та досліджували хімічний склад одержаних фракцій за допомогою тонкошарової хроматографії (ТШХ) на пластинках «Силуфол» та за допомогою мас-спектрометрії на мас-спектрометрі 6C/MS Agilent Technologies 6890 N/5975 В. З цією метою 2,8 г темно-коричневої густої маси, одержаної шляхом екстракції гексаном мета нольного залишку, який одержували з плодових тіл грибів-базидіоміцетів Lactarius pergamenus , розчиняли в 12,0 мл н-гексану, наносили на колонку силікагелю Л 40/160 висотою 40,0 см і діаметром 2,0 см, попередньо промиту чистим нгексаном. Після цього колонку мили послідовно наступними розчинниками: н-гексан (200 мл), нгексан-етилацетат 7,5 : 1 (300 мл), н-гексанетилацетат-метанол 4:2:1 (300 мл), ізопропанол (160 мл), метанол (200 мл). Після такої промивки колонка повністю очистилась від барвних речо 5 54969 вин,~3а результатами вимірювання оптичної густини в елюатах при 300 нм та 450 нм було одержано 6 підфракцій, які позначили як підфракції № 1.1-1.6. Кожну з одержаних підфракцій перевіряли 6 на бактеріостатичну активність по відношенню до культури Candida albicans. Результати цих досліджень та якісний та кількісний склад підфракцій представлені в Таблиці 2. Таблиця 2 Якісний та кількісний склад підфракцій метанольного екстракту плодових тіл L. pergamenus та їх дія на Candida albicans (еталонний штам) Масова № підфрадоля підкцій фракції (%) 1.1 0,07 % 1.2 0,6 % 1.3 51,73% 1.4 42,85 % 1.5 2,24 % 1.6 2,51 % Хімічний склад одержаних фракцій (основні ідентифіковані за допомогою мас-спектрометрії речовини та їх процентне співвідношення) 1. Біс (2-етилгексил) фталат - 50,6 % 2. Диізобутилфталат - 4,4 % 3. 2,2,4-триметилфуроазулен - 7,36 % 4. 2,6,10-триметил-1,5,9-ундекатрієн- 13,64 % 5. метилстеарат - 13,9 % 1. Біс (2-етилгексил) фталат -1,1% 2. Олеїнова кислота 10,4% 3. Метилстеарат - 13,1% 4. Етилпальмітат - 3,2% 5. 9,12-октадекандіенової кислоти метиловий ефір - 6,8 % 6. Лактапіперанол - 2,5% 6. Стеаринова кислота - 62,9% 1. 3-а, 8- -велерал -15,91% 2. 9-октадеканової кислоти 2,3-дигідропропіловий ефір - 43,1 % 3. Нафто-(2,3-b) фуран 2,3Н-он - 2,95% 4. Стеаринової кислоти 2-гідрокси-1метилпропіловий ефір - 19,35% 5. 9,17-октадекадієналь -2,16% Всього - 24 речовини Складна суміш, що включає понад 60 речовин 1. З-етил-4-метилпентанол (листковий альдегід) 25,6 %, 2. n-нонанал (пеларгонієвий альдегід) - 21,3%; 3. 7-метокси-5-етокси-2,2-диметилхроманон 53,1% 1. бета-нафтиламін -35,7% 2. ліноленової кислоти хлорид - 64,3 % Результати одержаних досліджень показують, що окремі підфракції фармакологічно активної субстанції мають дію слабшу, ніж вихідна субстанція (Табл.1). Фармакологічний ефект вихідної субстанції, очевидно, обумовлений сесквітерпеновими сполуками, що містяться в суміші (2,2,4триметилфуроазулен, лактапіперанол, 3- , 8- велерал ), але також підсилюється іншими допоміжними речовинами. Одержані результати свідчать про недоцільність подальшого фракціонування субстанції з метою застосування в якості діючого компонента мазевої композиції для зовнішнього лікування мікозів стоп. Клінічні випробування мазевої композиції для лікування мікозів. Одержана композиція при вти Діаметр зони затримки росту (в мм) при дії 1 % розчину підфракції на культуру Candida albicans (еталонний штам). 9 9 19 ранні в здорову шкіру не викликає будь-яких видимих змін, подразнень або алергічних реакцій. Всіх хворих з діагнозом «мікоз стоп» було поділено на дві групи, в яких було виділено дві форми захворювання: 1) сквамозно-гіперкератотична форма; 2) інтертригінозна форма. В першій групі (9 хворих) проводили традиційне місцеве лікування маззю «Цинкундан». Лікування хворих другої групи (9 хворих) здійснювали за допомогою мазевої лікувальної композиції, одержаної за способом, описаним вище, шляхом щоденної обробки міжпальцевих проміжків мазевими композиціями (Табл. 3). 7 54969 8 Таблиця 3 Дія лікувальної мазевої композиції на хворих з діагнозом «мікоз стоп» № хворого 1-4 5-8 9-13 14-18 Вираженість симптомів відповідно до дня від початку лікування Побічна дія 10- 13- 161-3 4-6 7-9 19-21 12 15 18 1. Використання запропонованої мазевої композиції Сквамозно-гіперкератотична Побічні явища 1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 19-21 форма. Симптоми: відсутні - еритема + + - набряк + + - лущення + + + + + + - свербіння + + + + + 2. Використання мазевої композиції найближчого аналога (мазь «Цинкундан») Сквамозно-гіперкератотична Побічні явища 1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 19-21 форма. Симптоми: відсутні - еритема + + + + - набряк + + + - лущення + + + + + + - свербіння + + + + + + 1. Використання запропонованої мазевої композиції Інтертригінозна форма. СимПобічна дія 1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 19-21 птоми: - еритема Побічні явища у + + + вигляді печії і - набряк + + + болей спостері- везикуляція + + + гаються у перші - ерозії + + + 6 днів лікування - кірочки + + + - лущення + + + + - свербіння + + + - печія + + - біль + + 2. Використання мазевої композиції найближчого аналога (мазь цинкундан) Інтертригінозна форма. СимПобічна дія 1-3 4-6 7-9 10-12 13-15 16-18 19-21 птоми: - еритема Побічні явища у + + + + вигляді печії і - набряк + + + + болей спостері- везикуляція + + + гаються у перші - ерозії + + + + 9 днів лікування - кірочки + + - лущення + + - свербіння + + + - печія + + - біль + + Основні симптоми та протікання захворювання Таким чином, у випадку використання запропонованої мазевої композиції при лікуванні сквамозно-гіперкератотичної форми мікозу стоп спостерігалося повне зникнення симптомів захворювання на 16 - 18 добу від початку лікування. В порівнянні з лікуванням за найближчим аналогом такі симптоми як еритема та набряк зникали на 4-6 діб раніше. Побічні явища у вигляді алергічних реакцій та печії і болей при застосуванні запропонованої мазевої композиції та мазі «Цинкундан» не спостерігалися. У випадку використання запропонованої мазевої композиції при лікуванні інтертри-гінозної форми мікозу стоп спостерігалося повне зникнення симптомів захворювання також на 16 - 18 добу від початку лікування. В порівнянні з лікуванням за найближчим аналогом такі симптоми як еритема, набряк та везикуляції зникають на 4-6 діб раніше. Побічні явища у вигляді алергічних реакцій при застосуванні запропонованої мазевої композиції та мазі «Цинкундан»не спостерігалися, а печія та болі у місці застосування мазевих композицій у випадку застосування запропонованої мазевої 9 54969 композиції зникали в середньому на три доби раніше. Зберігання запропонованої мазевої композиції при кімнатній температурі (+18 -24°С) у скляних баночках об'ємом 40 мл протягом 6-ти місяців не виявляло зовнішніх видимих змін і не зменшувало фармакологічний ефект. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 10 Джерела інформації: 1. Халеева Е.Л., Перцев И.М. Анализ ассортимента противогрибковых мазей на рынке Украины. - Провизор. - 2000. - №10. - С. 19-21. 2. Машковский М.Д. Лекарственные средства 7 изд. - Москва: Медицина, 1977. - Т. 2. -С.307-318. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601