Спосіб отримання препаратів алергенів з пилку рослин

Реферат: Спосіб отримання препаратів алергенів з пилку рослин включає попереднє висушування, знежирення та екстрагування вихідної сировини, за яку використовують виключно пилок місцевих рослин. UA 71022 U (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ ПРЕПАРАТІВ АЛЕРГЕНІВ З ПИЛКУ РОСЛИН UA 71022 U UA 71022 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини, а саме до імунології та алергології, стосується діагностування та лікування полінозів і спрямована на покращення якості препаратів діагностичних і лікувальних алергенів. Відомий спосіб виділення та очистки алергенів трав'яного пилку, який складається з одержання водного екстракту пилку та розчинені компоненти піддають хроматографії гідрофобної взаємодії або катіонообмінної, стадії гель-фільтрації (Патент РФ № 2242248, МПК61 К 14/415, 10.11.2004р.). Недоліком цього способу є те, що він є малопридатним для серійного виробництва. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб отримання діагностичного алергену з пилку рослин, який оснований на тому, що вихідну сировину попередньо, висушують, знежирюють та екстрагують, причому екстрагування проводять рідиною Еванса-Кока протягом трьох діб при щоденному триразовому струшуванні, в подальшому перемішуванні, з інтервалом 1-1,5 години, в інтервалі між перемішуванням вихідну сировину підтримують при температурі плюс 4-8°, після чого проводять центрифугування при 5000-6000об/хв. надосадової рідини протягом 30-40 хв., після чого здійснюють фільтрування та стерилізуюче фільтрування, стабілізацію маточного алергену протягом 1-3 місяців та його розведення до отримання готової форми алергену (Патент РФ № 2373947, МПК А 61 К 36/36, 27.11.2009 р.). Недоліком цього способу є недостатня специфічність цільового продукту і, як наслідок, низька ефективність діагностики і лікування алергенами, що отримані зазначеним способом. Алергічні захворювання належать до імунопатологічних станів, що обумовлені неадекватною відповіддю імунної системи на екзоалергени (АГ). На алергічні захворювання хворіє, за різними даними, від 15 до 40 % населення різних країн. Значне місце в структурі алергічних захворювань займають полінози, тобто алергічні захворювання, що обумовлені гіперчутливістю до пилку рослин згідно з Резолюцією Генасамблеї ЕААСІ (Европейської Академії алергології і клінічної імунології), тільки специфічна імунотерапія відповідними алергенами, на відміну від фармакотерапії, може обірвати перебіг алергічних захворювань AЗ, у тому числі полінозів. Але специфічна імунотерапія може бути ефективною тільки в разі якісної етіологічної діагностики, тобто встановлення "причинного" алергену, який обумовив поліноз. Для цього алергологічна служба повинна мати високоспецифічні алергени, що досягається лише в разі, якщо алергени виготовлені з місцевої сировини. За часів СРСР діагностичні і лікувальні алергени завозилися до України з Росії, де виготовлялися з сировини, зібраної там же (у даному випадку, з рослин, які ростуть на терені Росії). За цих умов якість діагностики була невисокою, відповідно і ефективність специфічної імунотерапії при полінозі не перевищувала 70 % позитивних результатів. В основу корисної моделі поставлено задачу створення способу отримання препаратів алергену з пилку рослин, в якому за рахунок використання як вихідної сировини виключно рослин місцевості, де проводять діагностування та лікування хворих, а також за рахунок технологічних відмінностей, які полягають у новій послідовності операцій (фільтрація та стабілізуюча фільтрація проводяться після стабілізації), тривалості екстрагування та стабілізації, а також стандартизації маточного розчину алергену до концентрації 10000±2000 PNU/ в 1мл, досягається можливість отримання високоспецифічних алергенів, використання яких дозволить значно підвищити достовірність діагностування та ефективність специфічної імунотерапії хворих на поліноз. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб отримання препаратів алергенів з пилку рослин включає попереднє висушування, знежирення та екстрагування вихідної сировини, за яку використовують виключно пилок місцевих рослин, рідиною Еванса-Кока протягом п'яти діб при щоденному триразовому перемішуванні з інтервалом 1-1,5 години, під час якого вихідну сировину підтримують при температурі +4-8°, цетрифугування при 5000-6000об/хв. надосадової рідини протягом 30-40 хв., проведення стабілізації маточного розчину протягом 3-6 місяців, фільтрацію, стабілізуючу фільтрацію, проведення розведення або концентрації маточного розчину до отримання готової форми алергену. Спосіб здійснюється наступним чином. Для отримання препаратів алергенів з пилку рослин як вихідну сировину використовували виключно рослини того регіону, де мешкають хворі, які будуть обстежуватись і лікуватись за допомогою цих алергенів. Сировину збирали в період пилкування рослин. Отриману сировину попередньо висушують, знежирюють і екстрагують. Причому екстрагування проводять рідиною Еванса-Коха протягом п'яти діб при щоденному триразовому перемішуванні з інтервалом 1-1,5 години, підтримуючи вихідну сировину при температурі +4-8° за Цельсієм. Після цього проводять центрифугування при 5000-6000 об/хв. надосадової рідини протягом 30-40 хв., а 1 UA 71022 U 5 10 15 20 25 також стабілізацію маточного розчину алергену. Для стабілізації фізичних та біологічних властивостей маточний розчин витримують протягом 3-6 місяців, потім проводять його фільтрацію та стерилізуючу фільтрацію Після цього проводиться розведення або концентрація маточного розчину до отримання готової форми алергену. Відомості, що підтверджують можливість здійснення способу отримання препаратів алергенів з пилку рослин (на прикладі Вінницького ТОВ "Імунолог і підприємства "Алерген", м. Ставрополь) Вінницьке ТОВ "Імунолог" - єдиний в Україні виробник діагностичних і лікувальних алергенів, який з 1993 року виконує весь цикл їх виготовлення: від збирання і обробки сировини - до виготовлення препаратів алергенів у їх закінченому вигляді (у флаконах, у ковпачках компакт-ланцетів, у вигляді драже з вмістом алергенів). За останні 3 роки за даними звітів головних алергологів регіонів України, специфічну імунотерапію (СІТ) алергенами отримували близько 29 тисяч дітей і дорослих - мешканців України. Перспективний аналіз, проведений цими ж фахівцями, показав, що ефективність СІТ алергенами, виробництва ТОВ "Імунолог", при полінозі перевищує 90 % відмінних і добрих результатів, тобто суттєво краще, ніж це було при роботі з російськими алергенами. Для того, щоб дослідити специфічність вітчизняних алергенів, виготовлених ТОВ "Імунолог", порівняли результати діагностики полінозу (при наявності у хворих клініко-анамнестичних даних, що свідчили про наявність цього захворювання) у 62 хворих, яким на правій руці було проведено прик-тест з відповідними вітчизняними алергенами, а на лівій - алергенами Російського виробництва (підприємство "Алерген", м. Ставрополь). Відібрані були лише хворі з сенсибілізацією до алергенів бур'янів, і шкірні проби (прик-тест) проводилися тільки алергенами: 1) з пилку амброзії полинолистної і 2) з пилку полину гіркого. Причому алергени у флаконах були однакові, як на вигляд, так і за способом виробництва (водно-сольові розчини) і за концентрацією специфічного білку у 1 мл (по 10000 PNU). Такий підхід, на нашу думку, як і думку багатьох вчених є більш надійним для порівняння специфічності алергенів, ніж порівняння результатів проведення СІТ, оскільки при вивченні результатів лікування існує багато суб'єктивних факторів, які можуть суттєво вплинути на сутність висновків. Результати порівняння наведено у таблицях 1 і 2. Таблиця 1 Кількість позитивних результатів шкірного тестування алергенами, виробництва України (Вінницьке ТОВ "Імунолог") і Росії (Ставропольське підприємство "Алерген") Вид алергену амброзії полину Кількість хворих 62 62 Позитивних Позитивних результатів (ліве результатів (праве передпліччя) – Достовірність передпліччя) – алергени розбіжностей алергени ТОВ підприємства "Імунолог" "Алерген" 48 38 Р < 0,05 44 31 Р < 0,05 30 Таблиця 2 Середній діаметр (М±m) папули прик-тесту Вид алергену амброзії полину 35 Кількість хворих 62 62 Середній розмір папули у мм 7,2±0,33 6,8±0,27 Середній розмір Достовірність папули у мм розбіжностей 4,3±0,21 Р < 0,05 3,9±0,21 Р < 0,05 Таким чином, як видно з таблиць, і по частці позитивних результатів тестування обома пилковими алергенами, і по середньому діаметру папули, препарати алергенів, виготовлених відповідно до корисної моделі і випробуваних на Вінницькому ТОВ "Імунолог" переважають препарати алергенів виробництва Російського підприємства "Алерген". 2 UA 71022 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб отримання препаратів алергенів з пилку рослин, який оснований на тому, що вихідну сировину попередньо висушують, знежирюють та екстрагують, причому екстрагування проводять рідиною Еванса-Кока при щоденному триразовому перемішуванні з інтервалом 1-1,5 години, в інтервалі між перемішуванням вихідну сировину підтримують при температурі +4-8°, після чого проводять цетрифугування при 5000-6000 об/хв. надосадової рідини протягом 30-40 хв., фільтрацію, стерилізуючу фільтрацію та стабілізацію маточного алергену та його розведення до отримання готової форми алергену, який відрізняється тим, що екстрагування проводять протягом п'яти діб, а перед проведенням фільтрації та стерилізуючої фільтрації проводять стабілізацію розчину протягом 3-6 місяців, причому при необхідності розчин маточного алергену концентрують до 10000±2000 PNU/ в 1мл, а як вихідну сировину використовують виключно пилок місцевих рослини. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3