Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю

1. Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю з шишок хмелю звичайного шляхом їх екстракції гарячою водою з наступною фільтрацією, який відрізняється тим, що екстракцію здійснюють десятикратною кількістю води при температурі не менше 70°С принаймні у три етапи з подальшим об'єднанням одержаних екстрактів, упарюванням і сушкою в вакуумі при температурі 90-100°С. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що перший етап екстракції здійснюють принаймні протягом двох годин, а тривалість кожного наступного етапу дорівнює чверті цього періоду. Винахід відноситься до фармації, а саме до способів одержання комплексів біологічно активних речовин рослинного походження з протизапальною та репаративною активністю, зокрема з шишок хмелю, що можуть бути використані в якості лікарських субстанцій для одержання засобів у різних лікарських формах. У фітотерапії ряду захворювань часто використовують хміль як лікарську сировину. Шишки хмелю входять до складу седативних лікарських засобів. Спиртовий екстракт шишок хмелю міститься у препараті уролесан. Ефірна олія хмелю входить до седативних препаратів валокордин та корвалдин [1]. Відомий спосіб одержання настою з шишок хмелю як засобу, що вгамовує біль при лікуванні радикуліту у період загострення [2]. Згідно з цим способом 25г шишок хмелю заливають 1 л води, кип'ятять на водяній бані протягом 15 хвилин, охолоджують 5 хвилин і проціджують. Одержаний водний настій вживають по 200мл тричі на день. До недоліків відомого способу можна віднести одержання настою при кип'ятінні, що частково призводить до руйнування термолабільних речовин, до того ж водний настій є нестабільною лікарською формою з коротким терміном застосування. Завданням винаходу є створення способу одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю шляхом екстрагування шишок хмелю звичайного, що у сукупності з заявленими параметрами нового способу обумовлює одержання нетоксичного засобу з вираженою фармакологічною активністю, який може бути використаний в якості лікарської субстанції при створення препаратів у різних лікарських формах. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю з шишок хмелю звичайного шляхом їх екстракції з наступною фільтрацією, винаходом передбачено, що екстракцію здійснюють десятикратною кількістю води при температурі не менше 70°С принаймні у три етапи з подальшим об'єднанням одержаних екстрактів, упарюванням і сушкою. (19) UA (11) 85925 (13) C2 (21) a200706251 (22) 06.06.2007 (24) 10.03.2009 (46) 10.03.2009, Бюл.№ 5, 2009 р. (72) КОВАЛЬОВ СЕРГІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, UA, КОВАЛЬОВ ВОЛОДИ МИР МИКОЛАЙОВИЧ, U A, БЕРЕСТОВА СВІТЛАНА ІГОРІВН А, U A, МАЛОШТАН ЛЮДМИЛА МИКОЛАЇВН А, UA, ГЛАДЧЕНКО ОЛЕГ МИХАЙЛОВИЧ, UA, УЛАНОВА ВІРА АНАТОЛІЇВН А, UA (73) НАЦІОН АЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, UA (56) SU A 393833, 10.08.1973. SU A 611926, 25.06.1978. RU 2241484, 10.12.2004. UA U 14493, 15.05.2006. UA U 15750, 17.07.2006. 3 85925 Згідно з винаходом перший етап екстракції здійснюють принаймні протягом двох годин, а тривалість кожного наступного етапу дорівнює чверті цього періоду. З джерел інформації хміль відомий як лікарська сировина з досить широким спектром фармакологічної дії: анальгетичної, протимікробної, противиразкової, седативної, снодійної, сокогонної, такої, що знижує проникливість капілярів [2]. Проте заявлений спосіб обумовлює одержання засобу з протизапальною та репаративною дією. Дослідження авторів розширюють загальновідомі дані про біологічно активні властивості хмелю, що дозволяє передбачити його використання у більш широкому колі лікувальних засобів. Всі параметри заявленого способу визначені дослідним шляхом і не відомі з джерел інформації. Експериментально встановлено, що при здійсненні заявленого способу використання в якості екстрагенту гарячої води при температурі не нижче 70°С забезпечує максимальне вилучення з сировини біологічно активних речовин. Визначені дослідним шляхом такі ознаки, як екстрагування сировини десятикратною кількістю води, проведення екстракції принаймні у три етапи бажано тривалістю відповідно 2 години та по 0,5 години є необхідними і достатніми для здійснення заявленого способу і одержання кінцевого продукту з очікуваними видами активності. Кількість етапів екстракції може бути зменшена або збільшена, проте при цьому знижується економічна доцільність способу: у першому випадку збільшуються витрати сировини, у другому - зростають, енерговитрати та час здійснення способу. Проведення екстракції у 3 етапи є оптимальним варіантом. Винахід здійснюють наступним чином. Подрібнені до розміру часток 2мм сухі шишки хмелю звичайного завантажують у реактор, додають у десятикратній кількості гарячу воду, температура якої не менше 70°С. Екстракцію проводять переважно у 3 етапи з тривалістю першого етапу 2 години, решти - по 0,5 години, одержані екстракти об'єднують, фільтрують та упарюють під вакуумом до одержання сухого залишку. 4 Одержаний сухий екстракт з шишок хмелю звичайного являє собою порошок темнокоричневого кольору зі специфічним запахом. Вихід готового продукту - 15-16% Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1 0,5 кг подрібненої сировини помістили у реактор з паровою рубашкою та мішалкою, залили водою 70°С у співвідношенні сировина : екстрагент 1:10 та екстрагували протягом 2 годин при періодичному перемішуванні, потім профільтрували. Другу та третю екстракції проводили за попередніх умов на протязі 0,5 години кожна. Одержані екстракти об'єднали і випарили у вакуумі при температурі 90-100°С до отримання сухого продукту. Одержали 80,02г готового продукту (16%). Приклад 2 Протизапальну активність комплексу біологічно активних речовин з шишок хмелю (далі - Екстракт), одержаних за заявленим способом, вивчали на моделі карагенінового запалення у дозах 5мг/кг, 10мг/кг, 20мг/кг. В якості препарату порівняння було використано альтан. Досліди проводили на щура х середньою масою 200г. Субплантарним введенням 1% розчину карагеніну у кількості 0,1мл викликали набряк однієї з лап у дослідних тварин. Тваринам дослідних груп за годину до ін'єкції карагеніну вводили вн утрішньошлунково досліджуваний екстракт у різних дозах та альтан у ефективній дозі. Контрольні тварини одержували еквівалентну кількість води. Ступінь набряку оцінювали за збільшенням об'єму лапи, який виміряли у динаміці через 1, 2, 3, 24 години за допомогою механічного онкометру. Протизапальну активність (ПА) досліджуваних засобів визначали за їх здатністю зменшувати набряки у дослідних тварин у порівнянні з контролем. Розрахунок здійснювали за формулою: D Vд - DVк ПА = × 100 , де DVк ΔVд, ΔVк - різниця між об'ємом набряклої та ненабряклої лапи тварини у досліді та контролі відповідно. Дані експерименту наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Вивчення протизапальної активності комплексу біологічно активних речовин з шишок хмелю (Екстракту), одержаного за заявленим способом на моделі карагенінового запалення Варіанти досліду 1 година Об'єм ПА,% Екстракт, 5мг/кг 8,8±0,39* 40 Екстракт, 9,0±0,27* 38 10мг/кг Екстракт, 9,4±0,27* 36 20мг/кг Альтан, 1мг/кг 9,8±0,47* 33 Контроль 14,6±0,49 Динаміка досліду 2 години 3 години Об'єм ПА,% Об'єм ПА,% 9,4±0,22* 55 10,4±0,68 60 24 години Об'єм ПА,% 14,4±0,44* 55 11,0±0,41* 47 11,8±0,51* 55 15,2±0,65* 53 11,2±0,62* 46 12,9±0,53* 50 16,2±0,60* 48 13,4±0,27* 20,8±0,47 36 15,6±0,73* 26,0±0,57 40 16,0±0,89* 32,0±0,93 50 * - достовірно по відношенню до контролю р≤0,05 5 85925 Аналіз одержаних даних свідчить про виражену протизапальну активність Екстракту у всі х досліджених дозах, який достовірно знижував розвиток набряку у порівнянні з контрольною групою. Дані перших трьох годин досліджень доводять, що Екстракт за протизапальною активністю перевищує препарат порівняння. Приклад 3 З метою одержання об'єктивної оцінки протизапальну активність комплексу біологічно активних речовин з шишок хмелю (Екстракту), одержаного за заявленим способом, вивчали також на моделі зимозанового набряку. 6 Дослід проводили на щурах масою 200 г. Набряк викликали субплантарним введенням в одну з лап тварин 2% суспензії зимозану у дозі 0,1мл. В якості препарату порівняння використовувати альтан. Тваринами дослідних груп за годину до ін'єкції зимозану вводили внутрішньошлунково Екстракт у дозах 5мг/кг, 10мг/кг, 20мг/кг та альтан відповідно. Контрольні тварини одержували еквівалентну кількість води. Протизапальну активність досліджуваних засобів (ПА) визначали за критеріями та розрахунками, аналогічними тим, що наведені у прикладі 2. Дані досліду представлені у таблиці 2. Таблиця 2 Вивчення протизапальної активності комплексу біологічно активних речовин з шишок хмелю (Екстракту), одержаного за заявленим способом, на моделі зимозанового набряку Варіанти досліду Екстракт, 5мг/кг Екстракт, 10мг/кг Екстракт, 20мг/кг Альтан, 1мг/кг Контроль 0,5 години Об'єм ПА,% Динаміка досліду 1 година 2 години Об'єм ПА,% Об'єм ПА,% 3 години Об'єм ПА,% 8,00±0,36* 56 8,93±0,33* 59 10,2±0,74 65 12,6±0,49* 61 10,2±0,30* 44 10,6±0,42* 52 13,0±0,73* 55 15,0±0,57* 53 12,3±0,42* 32 13,2±0,60* 40 14,0±1,14* 52 13.8±0,60* 57 12,2±0,79* 33 13,0±0,73* 41 15,8±0,54* 46 16,0±0,51* 50 18,2±0,54 22,0±0,51 29,0±0,93 32,2±0,91 * - достовірно по відношенню до контролю р≤0,05. За даними досліду Екстракт у всіх дозах проявив виражену протизапальну активність, достовірно, знижуючи розвиток набряку у порівнянні з контролем у дозах 5мг/кг, 10мг/кг на 1 та 2 годину досліду, а на 2-3 години досліду - у всіх вивчених дозах Екстракт перевершує за протизапальною активністю препарат порівняння. Приклад 4 Вивчення репаративної активності комплексу біологічно активних речовин, (далі Екстракт), одержаних з шишок хмелю за заявленим способом, проводили на моделі лінійних різаних ран у щурів. Дослідним щурам у наркотичному стані наносили лінійні рани, на які накладали шви. Після виходу з наркозу тварини дослідних груп одержували перорально Екстракт у дозах 5мг/кг, 10мг/кг та препарат порівняння альтан у ефективній дозі. Лікування тривало 5 днів. Тварини дослідної групи залишались нелакованими. Після виведення тварин з досліду було проведено дослідження міцності зростання країв рани на ранотензиометрі. Для цього зразок клаптику шкіри зі швом затискували з одного краю шва, а з іншого краю закріплювали ємність для води в якості навантаження. При рівномірному наливанні води відмічали її об'єм, при якому шов розривається. Міцність шва відповідає об'єму води, що обумовлює розрив шва. Репаративну активність (РА) досліджуваних засобів розраховували за формулою: РА=(ΔVд·100%)/ΔVк ·100, де ΔVд, ΔVк - об'єм води, при якому розривається шов відповідно на зразках з дослідної та контрольної групи. Досліджували також показники білкового обміну як фактори, що визначають швидкість репаративної регенерації: вміст загального білка у сироватці крові за біуретовою реакцією та концентрацію РНК і ДНК у гомогенаті шкірної рани щурів за спектрофотометричним методом при реакції з хлорною кислотою. Результати досліджень наведені у таблиці 3. 7 85925 8 Таблиця 3 Умови досліду Контроль Екстракт, 5мг/кг Екстракт, 10мг/кг Альтан, 1мг/кг Показники тензинометрії, Репаративна (об'єм води), г активність, % 474,16±21,77 840,83±44,44* 77 766,67±44,95* 62 661,96±55,0* 40 Загальний білок, г/л 72,88±2,94 87,53±3,75* 90,52±5,36* 84,63±3,15* ДНК, мкг/мл РНК, мкг/мл 21,13±2,66 33,01±1,82* 25,11±1,62 24,18±2,31 23,77±1,22 31,35±1,67* 29,17±1,29* 30,2±11,6* * - достовірно по відношенню до контролю р≤0,05. Аналіз даних табл. 3 свідчать про наявність вираженої репаративної активності Екстракту, одержаного за заявленим способом, що перевищує препарат порівняння. Таким чином, заявлено спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною та репаративною активністю з шишок хмелю звичайного. Заявлений спосіб є простим у виконанні, економічним, екологічно чистим, має достатню вітчизняну сировинну базу і може бути здійснений як у лабораторних, так і у виробничих умовах на стандартному обладнанні, відзначається практичною нетоксичністю, має виражену про Комп’ютерна в ерстка В. Клюкін тизапальну та репаративну активність і може бути використаний в якості лікарської субстанції у складі препаратів різних лікарських форм. Джерела інформації: 1. Е.И. Светличная, И.А. Толок. Этимологический словарь латинских ботанических названий лекарственных растений. Харьков. Издательство НФаУ, «Золотые страницы», 2003, С. 125. 2. Б.А. Самура, В.Ф. Черных, И.П. Банный и др. Фитотерапия в клинике внутренних болезней. Харьков. Издательство НФаУ, «Золотые страницы», 2003, С. 25, С. 350. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601