Поживний субстрат для отримання посівного міцелію лікувального гриба ganoderma lucidum (curt: fr) p. karst

Реферат: Поживний субстрат для отримання посівного міцелію лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt: Fr) P. Karstго, згідно з яким компоненти зернового субстрату промивають у проточній воді, варять на слабкому вогні, підсушують, засипають у скляні ємності, стерилізують, інокулюють маточним міцелієм Ganoderma lucidum першої генерації та інкубують у термостаті. Як компоненти використовують суміш зі злакових культур наступного складу (ваг. %): пшениця 25, овес - 25, просо - 25, ячмінь - 25, що дозволяє прискорити процес отримання посівного міцелію до 7 діб і отримати максимальну біомасу міцелію. UA 78917 U (12) UA 78917 U UA 78917 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології, а саме до поживних субстратів для отримання посівного міцелію грибів з подальшим використанням їх на підприємствах виробничої діяльності - грибівництві, а також у фармацевтичній промисловості. Гриб G. lucidum один з відомих базидіальних дереворуйнівних грибів, що використовується з лікувальною метою більше ніж дві тисячі років. Плодові тіла, міцелій та спори G. lucidum містять приблизно 400 різних біологічно активних компонентів, які переважно включають тритерпеноїди, полісахариди, нуклеотиди, стероли, стероїди, жирні кислоти, протеїни, алкалоїди, глікозиди, летючі ефірні масла, вітаміни [Wasser S. Reishi or Ling Zhi (Ganoderma lucidum) / Enciclopedia of dietary supplements. - 2005.]. Технологія культивування лікувального гриба G. lucidum потребує отримання посівного міцелію для вирощування плодових тіл. Досить поширеним способом є використання як поживного посівного субстрату із зерен злакових культур. Зерно не є дешевою сировиною, але забезпечує збагачення міцелію усіма необхідними поживними речовинами і сприяє збільшенню біомаси, прискорює вирощування плодових тіл. Досягнутий рівень у даній галузі ілюструється наступними прикладами: Відоме поживне середовище для вирощування міцелію, основу якого складає зерно пшениці [Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностной и глубинной культуре / под ред. Дудки И.А. - К.: Наукова думка, 1983. - С. 67-68]. Недоліком цього поживного середовища є те, що отриманий міцелій характеризується невисокою якістю, внаслідок лізису під дією гідролітичних ферментів зерна. Відомий спосіб отримання посівного міцелію на середовищі, що містить відходи хвойних дерев (хвою, кору, тирсу і т. д.) і біоорганічну добавку - суміш гідроксиду кальцію і крохмалю у рівних співвідношеннях в кількості 1,0-15 % [патент РФ № 2140730, A01G1/04, 1999]. Однак, вказане середовище розроблене для отримання плодових тіл їстівних базидіальних грибів, зокрема опеньків, але не підходить для вирощування лікарського дереворуйнівного гриба G. lucidum. Також недоліком цього середовища є його багатокомпонентність. Відоме поживне середовище для культивування міцелію і спосіб його приготування [Казокин Ю.И. Грибы на грядках. // Сделай сам. - М.: Знание. - 1/1992. - С. 9], що містить зерно і мінеральні добавки, по якому зерно бланшують протягом 45-50 хвилин при температурі 95100 °C, до вологості 53-55 % (по масі), після підсихання і охолодження в нього вносять крейду і гіпс у кількості 5 % до маси зерна для створення нейтральної реакції середовища, підготовлену масу уміщують у скляні банки, щільно закривають кришками і стерилізують в автоклаві протягом 2,5 годин при температурі 150 °C і тиску пари 1,5 атм. Після охолодження в підготовлене живильне середовище вносять міцелій, знову закривають кришкою, струшують для рівномірного перемішування зерна з введеною культурою та проводять вирощування посадкового матеріалу. У цьому випадку недоліком є те, що при бланшуванні зерна протягом 45-50 хвилин зерно розварюється, маса підлягає злипанню, що різко знижує аерацію в процесі розвитку міцелію, який є суворим аеробом. Відомий спосіб одержання живильного середовища (прототип) [Дудка И.А., Вассер С.П. Грибы. Справочник миколога и грибника. - К.: Наукова думка. - С. 418-419.] згідно з яким зерно хлібних злаків варять 15 хв., відціджують воду, охолоджують, додають крейду, гіпс, після чого суміш розкладають по колбах і стерилізують при температурі 121 °C, тиску 1 атм впродовж 1,5 год. У цьому випадку недоліком є тривале освоєння зерна міцелієм (16-20 діб). Задача корисної моделі - скоротити термін отримання якісного посівного зернового міцелію для використання у біотехнологічному процесі вирощування плодових тіл лікувального гриба G. lucidum. Поставлена задача вирішується використанням поживного субстрату для отримання посівного міцелію лікувального гриба G. lucidum, згідно з яким компоненти зернового субстрату промивають у проточній воді, варять на слабкому вогні, підсушують, засипають у скляні ємності, стерилізують, інокулюють маточним міцелієм G. lucidum першої генерації та інкубують у термостаті, який відрізняється тим, що як компоненти використовують суміш із зерен злакових культур наступного складу (ваг. %): пшениця - 25, овес - 25, просо - 25, ячмінь - 25. Це сприяє накопиченню міцеліальної маси та скороченню часу освоєння міцелієм зернового субстрату. Повне обростання зерна закінчується через 7-8 діб. Спільними ознаками прототипу та способу, що пропонується, є те, що в обох випадках зерно проварюють, охолоджують, додають крейду і гіпс, розкладають по ємностях та стерилізують. Відмінними ознаками способу, що пропонується, від прототипу є те, що як зерновий субстрат використовують наступну композицію зернових культур (ваг. %): пшениці - 25, вівсу 25, проса - 25, ячменю - 25. 1 UA 78917 U 5 10 15 20 Запропонований спосіб отримання посівного зернового міцелію реалізується таким чином. Зерно (пшениця, просо, овес, ячмінь) промивають у проточній воді для вилучення бруду і різних домішок. Потім заливають окропом і залишають набухати протягом 0,5 години. Воду зливають, заливають набрякле зерно гарячою водою і кип'ятять на повільному вогні протягом 30-40 хв. Готове зварене зерно повинне бути м'яким, але не розвареним. Зерно розсипають на чистій тканині для поверхневого підсихання. Після чого зерно змішують у пропорції (ваг. %): пшениці - 25, вівса - 25, проса - 25, ячменю - 25, і додають крейду і гіпс з розрахунку 30 г крейди і 120 г гіпсу на 1 кг зернового субстрату для регулювання кислотного балансу та поліпшення структури субстрату. Отриманим субстратом заповнюють на 2/3 об'єму 1 л ємності і закривають ватно-марлевими корками, а поверх пергаментом. Потім автоклавують при температурі 120 °C, тиску 1-1,5 атм впродовж 1,5 години. Після охолодження ємностей приступають до інокуляції зернової суміші. Інокуляцію проводять маточною культурою першої генерації, зрощеною на середовищі сусло-агар (1: 3) у чашках Петрі. На одну ємність з стерильним субстратом використовують вміст ½ чашки Петрі. Посів здійснюють у стерильних умовах в ламінарному боксі. Після інокуляції субстрат добре струшують для рівномірного розподілу міцелію і розміщують при температурі 26-27 °C та відносній вологості 60 % у повній темряві. Лабораторні дослідження по вирощуванню міцелію лікувального гриба G. lucidum способом, який пропонується, проводились на кафедрі мікробіології, вірусології та біотехнології Одеського національного університету імені І.І. Мечникова. Результати досліджень по обростанню зерна міцелієм G. lucidum відображені в таблиці 1. Таблиця 1 Склад поживного середовища, ваг. % Термін обростання, доба Пшениця 100 Просо 100 Овес 100 Ячмінь 100 1 2 3 5 7 8 10 12 14 25 Обростання субстрату, % 0 5 10 5 15 30 10 20 40 30 30 50 50 50 80 70 80 100 80 100 95 100 0 0 5 25 40 50 70 90 100 Пш. - 25 Пр. - 25 Ов. - 25 Яч. - 25 15 45 60 85 100 Як видно з отриманих даних, запропонований поживний субстрат у порівнянні з субстратами з чистих злаків дає можливість інтенсифікувати процес засвоєння субстрату міцелієм з 11-14 діб до 7 діб. Крім того перевага запропонованого поживного середовища в порівнянні з відомими виявляється в здатності нарощування більшої кількості біомаси міцелію лікувального гриба G. lucidum (таблиця 2), що добре видно на фото. Таблиця 2 Поживний субстрат, % Пшениця 100 Просо - 100 Овес - 100 Ячмінь - 100 Біомаса міцелію, г/100 г субстрату 30 Пшениця - 25, просо - 25, овес - 25, ячмінь - 25 32,1±3,5 24,5±5,2 23,5±4,8 25,5±3,2 26,8±2,8 Таким чином, проведені дослідження показали, що поєднання зернових культур у вказаному співвідношенні при виробництві посівного міцелію G. lucidum дозволяють за короткий термін одержати активний та якісний продукт. 2 UA 78917 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Поживний субстрат для отримання посівного міцелію лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt: Fr) P. Karst, згідно з яким компоненти зернового субстрату промивають у проточній воді, варять на слабкому вогні, підсушують, засипають у скляні ємності, стерилізують, інокулюють маточним міцелієм Ganoderma lucidum першої генерації та інкубують у термостаті, який відрізняється тим, що як компоненти використовують суміш зі злакових культур наступного складу (ваг. %): пшениця - 25, овес - 25, просо - 25, ячмінь - 25, що дозволяє прискорити процес отримання посівного міцелію до 7 діб і отримати максимальну біомасу міцелію. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3