Спосіб отримання зернового міцелію лікувального гриба ganoderma lucidum (curt:fr) p. karst

Реферат: Спосіб отримання зернового міцелію лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt: Fr) P. Karst, згідно якого зерновий субстрат (пшениця, просо, овес) промивають у проточній воді, варять його на слабому вогні, підсушують, засипають зерно у скляні пляшки, стерилізують, інокулюють маточним міцелієм Ganoderma lucidum першої генерації та інкубують у термостаті. До звареного зернового субстрату додають 30 % (вагових) від ваги субстрату відвареного зерна ячменю, що дає можливість прискорити процес отримання посівного міцелію до 7-8 діб. UA 75376 U (54) СПОСІБ ОТРИМАННЯ ЗЕРНОВОГО МІЦЕЛІЮ ЛІКУВАЛЬНОГО ГРИБА GANODERMA LUCIDUM (CURT:FR) P. KARST UA 75376 U UA 75376 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до біотехнології (мікології), а саме до засобів виготовлення посівного зернового міцелію лікувального гриба Ganoderma (G.) lucidum, з метою подальшого використання його у біотехнології вирощування на підприємствах виробничої діяльності грибівництві, а також фармацевтичній та інших галузях промисловості. Гриб Ganoderma lucidum (Curt: Fr) P. Karst - один з відомих базидіальних грибів, що використовується з лікувальною метою більше двох тисяч років народами Південно-Східної Азії. Плодові тіла та міцелій G. lucidum містять вуглеводи, амінокислоти, тритерпени, стероїди, алкалоїди, глікозиди, ефірні масла, вітаміни, такі мікроелементи як магній, марганець, молібден, кальцій, цинк, калій. Технологія штучного культивування лікувального гриба G. lucidum включає цілий комплекс виробничих операцій, які виконуються у певній послідовності. Посівний міцелій є сировиною для подальшої інокуляції субстрату і отримання плодових тіл. Найбільш поширеним способом виробництва посівного міцелію є вирощування його на зерні. Переваги такого способу: високий вміст живильних речовин та нескладна стерилізація, зерновий міцелій легко транспортується та рівномірно розподіляється при перемішуванні з субстратом. Досягнутий рівень у даній галузі ілюструється наступними прикладами: Відоме поживне середовище для вирощування міцелію, основу якого складає зерно пшениці [Высшие съедобные базидиомицеты в поверхностной и глубинной культуре / под. ред. Дудки И. А. - К.: Наукова думка, 1983. - с. 67-68.]. Недоліком цього поживного середовища є те, що отриманий міцелій характеризується невисокою якістю, внаслідок лізису міцелію під дією гідролітичних ферментів зерна. Відомий метод отримання посівного міцелію, що потребує зволоження та стерилізацію субстрату, і містить виноградні вичавки та джерела додаткового живлення [Заявка № 42955343/13 поз. ріш. від 31.07.89]. Недоліком цього методу є невисокий вміст у субстраті полісахаридів, необхідних для ефективного росту гриба, а також вміст лігніну та фенольних речовин, що гальмують розвиток міцелію. Відомий спосіб приготування живильного середовища [А.с. СССР 835365 кл. А01G1/04, 1989], що полягає в наступному. Зерно насичують водою, розварюють і додають керамзит, отриману суміш кип'ятять протягом 5-10 хв., охолоджують, змішують з крейдою і стерилізують. Недоліком такого середовища є те, що речовини керамзиту включаються у біосинтез міцелію, внаслідок чого знижується вихід біомаси. Відомий спосіб одержання живильного середовища (прототип) [Дудка И.А., Вассер СП. Грибы. Справочник миколога и грибника. - К.: Наукова думка. - С. 418-419.], згідно якого зерно хлібних злаків варять 15 хв., відціджують воду, охолоджують, додають крейду і гіпс, після чого суміш розкладають по колбах і стерилізують при температурі 121 °C, тиску 1 атм. впродовж 1,5 годин. У цьому випадку недоліком є тривале освоєння зерна міцелієм (16-20 діб). Задача, на рішення якої спрямована корисна модель, що пропонується, - скоротити термін отримання якісного посівного зернового міцелію для використання у біотехнологічному процесі вирощування плодових тіл лікувального гриба G. lucidum. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб отримання зернового міцелію лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt: Fr) P. Karst, згідно якого зерновий субстрат (пшениця, просо, овес) промивають у проточній воді, варять його на слабому вогні, підсушують, засипають зерно у скляні пляшки, стерилізують, інокулюють маточним міцелієм Ganoderma lucidum першої генерації та інкубують у термостаті, і згідно з корисною моделлю до звареного зернового субстрату додається 30 % (вагових) від ваги субстрату відвареного зерна ячменю. Це сприяє накопиченню міцеліальної маси та скороченню часу освоєння міцелієм зернового субстрату. Повне обростання зерна закінчується на 7-8 добу. Спільними ознаками прототипу та способу, що пропонуються, є те, що в обох випадках зерно проварюють, охолоджують, додають крейду і гіпс, розкладують по колбах та стерилізують. Відмінними ознаками способу, що пропонується, від прототипу є те, що як зерновий субстрат використовують наступні композиції зернових культур: пшениця + 30 % (ваг.) ячменю; просо + 30 % (ваг.) ячменю, овес + 30 % (ваг.) ячменю. Додавання ячменю дозволяє підвищити пухкість зернового середовища, що сприяє аерації зернових сумішей та прискоренню обростання зерна міцелієм в 1,5-2 рази у порівнянні з чистими злаками. Запропонований спосіб отримання посівного зернового міцелію реалізується таким чином. Зерно (пшениця, просо або овес) промивають у проточній воді для вилучення бруду і різних домішок. Потім заливають окропом і залишають набрякати протягом 0,5 години. Потім воду зливають, заливають набрякле зерно гарячою водою і кип'ятять на повільному вогні протягом 30-40 хв. Готове зварене зерно повинне бути м'яким, але не розвареним. Зерно розсипають на 1 UA 75376 U 5 10 15 чистій тканині для поверхневого підсихання. Таким же чином обробляють зерно ячменю. Після чого зерно змішують у вище зазначених пропорціях і додають крейду і гіпс з розрахунку 30 г крейди і 120 г гіпсу на 1 кг зернового субстрату для регулювання кислотного балансу та поліпшення структури субстрату. Отриманими субстратними сумішами заповнюють на 2/3 об'єму 1л та 0, 5 л колби і закривають ватно-марлевими корками, а поверх пергаментом. Потім автоклавують при температурі 120 °C, тиску 1-1,3 атм. впродовж 1,5 годин. Після охолодження ємностей приступають до інокуляції зернової суміші. Інокуляцію проводять матковою культурою першої генерації, зрощеною на середовищі сусло-агар (1 : 3) у пробірках або чашках Петрі. На одну колбу з стерильнім субстратом ємністю 1 л використовують вміст однієї пробірки або S чашки Петрі. Посів здійснюють у стерильних умовах в ламінарному боксі. Після інокуляції субстрат добре струшують для рівномірного розподілу міцелію і розміщують у термостаті при температурі 26-27 °C та відносній вологості 60 % у повній темряві. Лабораторні дослідження по вирощуванню міцелію лікувального гриба G. lucidum способом, що пропонується, проводились на кафедрі мікробіології та вірусології Одеського національного університету імені І.І. Мечникова. Результати досліджень обростання зерна міцелієм Ganoderma lucidum відображені в таблиці. Таблиця Зерновий субстрат (обростання в %) Термін обростання, доба 1 2 3 5 7 8 10 12 14 20 25 Пшениця Просо Овес Ячмінь 100 % 100 % 100 % 100 % 0 0 5 25 40 50 70 90 100 0 5 10 30 50 70 80 95 100 5 15 20 30 50 80 100 10 30 40 50 80 100 70 % Пшениці + 70 % Проса + 70 % Вівса + 30 % (ваг.) 30 % (ваг.) 30 % (ваг.) ячменю ячменю ячменю 5 10 10 25 30 30 40 40 40 50 50 60 90 90 90 100 100 100 Як видно з отриманих даних, запропоновані композиції зернових сумішей дають можливість інтенсифікувати процес засвоєння субстрату міцелієм у порівнянні з однокомпонентними субстратами з 11-14 діб до 7-8 діб. Таким чином, проведені нами дослідження показали, що додання 30 % ячменю до маси основної сировини (пшениці, проса або вівса) при виробництві посівного міцелію G. lucidum дозволяють одержати активний та якісний продукт за короткі строки. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Спосіб отримання зернового міцелію лікувального гриба Ganoderma lucidum (Curt: Fr) P. Karst, згідно якого зерновий субстрат (пшениця, просо, овес) промивають у проточній воді, варять його на слабому вогні, підсушують, засипають зерно у скляні пляшки, стерилізують, інокулюють маточним міцелієм Ganoderma lucidum першої генерації та інкубують у термостаті, який відрізняється тим, що до звареного зернового субстрату додають 30 % (вагових) від ваги субстрату відвареного зерна ячменю, що дає можливість прискорити процес отримання посівного міцелію до 7-8 діб. Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2