Спосіб клонального мікророзмноження селери коренеплідної

Реферат: Спосіб клонального мікророзмноження селери коренеплідної включає стерилізацію насіння, використання для розмноження та укорінення модифікованого середовища за прописом Мурасіге і Скуга. Насіння стерилізують 35 % розчином "Білизни" за експозиції 30 хв. Для розмноження у середовище Мурасіге і Скуга додають бензиламінопурин (БАП) - 0,2-0,5 мг/л, для укорінення у середовище Мурасіге і Скуга додають індолілоцтову та нафтилоцтову кислоти (ІОК та НОК) - 0,3-0,5 мг/л і 30,0 г/л цукрози. Культивування проводять при 16-годинному фотоперіоді при температурі 24±2 °C з інтенсивністю освітлення 3000-4000 лк, відносній вологості 65-70 %. UA 78938 U (54) СПОСІБ КЛОНАЛЬНОГО МІКРОРОЗМНОЖЕННЯ СЕЛЕРИ КОРЕНЕПЛІДНОЇ UA 78938 U UA 78938 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, рослинництві, овочівництві, зокрема для розмноження і отримання розсади цінних селекційних матеріалів та збереження генотипу вихідної форми. Серед овочевих культур, які вирощуються в Україні, селера займає важливе місце завдяки своїм високим біологічним, смаковим та їстівним якостям. За стандартною технологією цю культуру розмножують насінням, безкасетним, касетним способами, проте отримують за традиційних способів з однієї насінини одну рослину. Слід відмітити, що найчастіше селеру вирощують саме розсадним способом, оскільки вона має вегетаційний період 180-200 діб. Крім того, у неї довгий період спокою і її насіння проростає дуже повільно до 20 діб. Відомим і найбільш близьким до корисної моделі є мікроклональне розмноження селери (Toth К F, Lacy M L, (1992) Micropropagation of celery (Apium graveolens var. dulce.) In Bajaj YPS (ed) Biotechnology in agriculture and forestry, vol. 19. High-tech and micropropagation III. Springer, Berlin Heidelberg New York, pp 218-229). Даний метод базується на тому, що насіння селери коренеплідної було використане для стерилізації. Його промивали дистильованою водою, потім стерилізували 70 % розчином етанолу протягом однієї хвилини і пересаджували на середовище Мурасіге. В подальшому стерильні і життєздатні експланти переносили на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга з додаванням 6-Бензиламінопурину (БАП) - 1,0 мг/л та 20,0 г/л цукрози та після третього пасажу отримали 5 штук нових пагонів. Отримані від розмноження пагони пересаджують на середовище Мурасіге і Скуга, яке доповнене 20,0 г/л цукрозою та індолілмасляною кислотою (ІМК) - 0,5 мг/л і на 18 добу одержують 76,2 % укорінених рослин селери. Відомий і пропонований способи клонального мікророзмноження мають спільні ознаки: стерилізація насіння та отримання життєздатних стерильних проростків, живильні середовища для розмноження та укорінення, пересадка укорінених рослин у ґрунт. Проте, відомий спосіб клонального мікророзмноження не забезпечує отримання достатньої кількості стерильних та життєздатних експлантів, що, в свою чергу, впливає на коефіцієнт розмноження та не забезпечує високого відсотку укорінення рослин. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб клонального мікророзмноження селери коренеплідної, що дасть можливість отримати вищий відсоток стерильних та життєздатних експлантів, оптимально поєднати вміст цитокінінів та ауксинів, збільшити коефіцієнт розмноження рослин, зменшити затрати на живильні середовища для розмноження та укорінення, зменшити термін культивування, підвищити відсоток укорінення рослин та пришвидшити отримання розсади. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі розмноження селери коренеплідної використовують насіння селери коренеплідної, яке промивають дистильованою водою, стерилізують 70 % розчином етанолу протягом 60 хвилини і пересаджують на середовище за прописом Мурасіге і Скуга з додаванням 6-БАП - 1,0 мг/л та 20,0 г/л цукрози, що забезпечує отримання 5 штук нових пагонів. Культивування проводять за температури 24±2 °C та 16-годинному фотоперіоді. Рослини пересаджують на середовище Мурасіге і Скуга, у яке включено додатково 20,0 г/л цукрози та ІМК - 0,5 мг/л. Придатність рослин до пересаджування у ґрунт можлива на 18 добу. Запропонований спосіб клонального мікророзмноження цукрового включає використання насіння селери, його промивають дистильованою водою 2-3 рази, проводять стерилізацію 35 % розчином "Білизни", за експозиції 30 хвилин, що забезпечує отримання 90 % стерильних експлантів. Пересаджують проростки на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга, що доповнене БАП - 0,2-0,5 мг/л, та 30,0 г/л цукрозою. Для укорінення було введено модифікацію із додаванням індолілоцтової і нафтилоцтової кислот (ІОК і НОК) - 0,3-0,5 мг/л, цукрози - 30,0 г/л. Культивування проводили за температури 24±2 °C та довжині фотоперіоду 16 годин, що забезпечує отримання 9 додаткових пагонів та 96,0 % укорінених рослин. Придатність рослин до пересаджування у ґрунт проводять на 12 добу. Новими відмінними від існуючого прототипу ознаками є: - використання для стерилізації "Білизни" - 35 %; - експозиція 30 хвилин; - додавання у середовище для розмноження БАП - 0,2-0,5 мг/л та цукрози 30,0 г/л; - використання цукрози; - для укорінення рослин додавання НОК та ІОК - 0,3-0,5 мг/л; - пересаджування рослин у ґрунт на 12 добу. Відмінні від прототипу ознаки при взаємодії з відомими дозволяють отримати високий вихід стерильних експлантів, здешевити та удосконалити склад живильного середовища для 1 UA 78938 U 5 10 15 20 розмноження та укорінення, збільшити коефіцієнт розмноження рослин, підвищити відсоток укорінення рослин та пришвидшити отримання розсади. Ефективність нового способу клонального мікророзмноження селери коренеплідної у культурі in vitro вивчали на таких матеріалах: Аніта, Цілитель, Чорномор. Результати досліджень вказують, що заміна стерилізуючої речовини та експозиції дає можливість отримати 90 % стерильних експлантів. Етанол - 70 %, проникаючи у насіння, пригнічує ростові процеси, хоча і дозволяє одержати 61 % стерильної культури. Крім того, збільшення БАП 0,2-0,5 мг/л та поєднання із цукрозою - 30,0 г/л забезпечує утворення 9 додаткових пагонів. Модифікація НОК і ІОК 0,3-0,5 мг/л, цукрози 30,0 г/л у середовищі для укорінення забезпечує 96 % укорінених рослин на 12 добу. Спосіб клонального мікророзмноження селери коренеплідної здійснюється таким чином, насіння промивають у дистильовані воді 2-3 рази. В подальшому проводять поверхневу стерилізацію 35 % розчином "Білизна" з експозицією 30 хвилин, що забезпечує отримання 90 % стерильних експлантів. Пересаджування рослин на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга з додаванням БАП 0,2-0,5 мг/л, цукрози - 30,0 г/л, що дає змогу отримати 9 додаткових пагонів. Клоновані рослини культивують в термальних приміщеннях при температурі 24±2 °C, освітленні 3000-4000 лк, відносній вологості 65-70 % та фотоперіоді - 16 годин. За достатнього отримання матеріалу готують модифіковане середовище для укорінення за прописом Мурасіге і Скуга із додаванням НОК і ІОК 0,3-0,5 мг/л, цукрозою 30,0 г/л, що забезпечує 96 % укорінених рослин на 12 добу. Показники ефективності використання запропонованого способу розмноження селери наведені в таблиці. Таблиця Показники ефективності використання запропонованого способу розмноження селери Показники Стерилізація Експозиція Експлант Стерильність експлантів, % Мінеральна основа середовища для розмноження і укорінення Гормони БАП, мг/л ІОК, мг/л НОК, мг/л ІМК, мг/л Кількість новоутворених пагонів, шт. Укорінення, % Цукроза, г Довжина фотоперіоду, годин Температура культивування, °C Коефіцієнт розмноження Придатність рослин до пересаджування у ґрунт, доба 25 30 35 Відомий спосіб Етанол 70 % 60 хвилин насіння 61 Запропонований спосіб Білизна - 35 % 30 хвилин насіння 90 MS MS 1,0 0,5 5,0 76,2 20,0 16,0 24±2 5 0,2-0,5 0,3-0,5 0,3-0,5 9,0 96,0 30,0 16,0 24±2 9 18 12 Впровадження запропонованої корисної моделі дає можливість отримати високий вихід стерильних експлантів, здешевити та удосконалити склад живильного середовища для розмноження та укорінення, збільшити коефіцієнт розмноження, підвищити відсоток укорінення рослин та пришвидшити отримання розсади. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ Спосіб клонального мікророзмноження селери коренеплідної, що включає стерилізацію насіння, використання для розмноження та укорінення модифікованого середовища за прописом Мурасіге і Скуга, який відрізняється тим, що насіння стерилізують 35 % розчином "Білизни" за експозиції 30 хвилин, для розмноження у середовище Мурасіге і Скуга додають бензиламінопурин (БАП) - 0,2-0,5 мг/л, для укорінення у середовище Мурасіге і Скуга додають індолілоцтову та нафтилоцтову кислоти (ІОК та НОК) - 0,3-0,5 мг/л і 30,0 г/л цукрози, 2 UA 78938 U культивування проводять при 16-годинному фотоперіоді при інтенсивністю освітлення 3000-4000 лк, відносній вологості 65-70 %. температурі 24±2 °C Комп’ютерна верстка Л. Купенко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3 з