Спосіб клонального мікророзмноження капусти кольрабі

Реферат: Спосіб клонального мікророзмноження капусти кольрабі включає використання для розмноження та укорінення модифікованого середовища за прописом Мурасіге і Скуга, культивування при 16-годинному фотоперіоді при температурі 24±2 °C з інтенсивністю освітлення 3000-4000 лк, відносній вологості 65-70 %. Для стерилізації як експлант використовують насіння, яке стерилізують 35 % розчином "Білизни" за експозиції 45 хв. Для розмноження у середовище Мурасіге і Скуга із повним набором макроелементів додають бензиламінопурин (БАП) 0,2-0,6 мг/л і 30 г/л цукрози. Для укорінення у середовище Мурасіге і Скуга із повним набором макроелементів додають індолілоцтову кислоту (ІОК) - 0,2 мг/л і нафтилоцтову кислоту (НОК) - 0,3 мг/л, і 30 г/л цукрози. UA 78939 U (54) СПОСІБ КЛОНАЛЬНОГО МІКРОРОЗМНОЖЕННЯ КАПУСТИ КОЛЬРАБІ UA 78939 U UA 78939 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до сільського господарства і може бути використана в сільськогосподарській біотехнології, селекції, рослинництві, овочівництві, зокрема для розмноження і отримання розсади цінних селекційних матеріалів та збереження генотипу вихідної форми. Кольрабі - дворічна трав'яниста рослина, яка є різновидом капусти білокачанної. Належить до роду капусти (Brassica) родини капустяних. В Україні її вирощують на невеликих площах, проте в останні роки попит на неї збільшився, тому що вона містить вітаміни В 1, В2, РР та багато інших цінних речовин. Сьогодні її вирощують різними способами (насінням, безкасетним, касетним способами), проте отримують з однієї насінини одну рослину. Відомим і найбільш близьким до корисної моделі є мікроклональне розмноження капусти Brassica campestris (Дозет Б., Мезей С., Голошин Б., Галович В., Шесек С., Васильевич Л., Васич Д., Огнянов В., Мацет К. Культура тканей в растениеводстве. Новий Сад, 1995. - С. 87115). За відомим способом, що включає стерилізацію 2-4 мм сегментів капусти звичайної, які промивали дистильованою водою, стерилізували 30 % розчином хлораміну протягом однієї хвилини і пересаджували на середовище Мурасіге і Скуга, у якому брали лише 1/3 макроелементів. Отримані стерильні і життєздатні експланти, які становили 67 %, переносили на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга, у якому також брали лише 1/3 макроелементів, та додавали 6-Бензиламінопурину (БАП) - 1,0 мг/л і після третього пасажу отримали 6 штук нових пагонів. В подальшому пагони пересаджують на середовище Мурасіге і Скуга із вмістом 1/3 макроелементів, яке доповнене 6-БАП - 0,1 мг/л і нафтилоцтової кислоти (НОК) - 0,5 мг/л та на 14 добу одержують 82 % укорінених рослин капусти. Температура при культивуванні 24±2 °C, довжина фотоперіоду 16 годин. Відомий і пропонований способи вегетативного розмноження мають спільні ознаки: отримання стерильних проростків, живильні середовища для розмноження та укорінення за прописом Мурасіге і Скуга, температура при культивуванні 24±2 °C, довжина фотоперіоду 16 годин, садіння укорінених рослин у ґрунт. Однак, відомий спосіб мікроклонального розмноження не дозволяє отримати високого відсотку стерильних експлантів, не забезпечує отримання високого коефіцієнту розмноження рослин та укорінення, потребує довшого терміну культивування. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити спосіб клонального мікророзмноження капусти кольрабі, що забезпечить отримання високого відсотку стерильних експлантів, зменшити витрати та удосконалити склад живильних середовищ для розмноження та укорінення додаючи БАП - 0,2-0,6 мг/л, цукрозу - 30,0 г/л, індолілоцтову кислоту (ІОК) - 0,2 мг/л і НОК - 0,3 мг/л, зменшити термін культивування рослин та пришвидшити отримання розсади, збільшити у п'ять разів коефіцієнт розмноження. Поставлена задача вирішується тим, що у відомому способі розмноження капусти кольрабі для стерилізації 2-4 мм сегментів використовують стерилізуючу речовину хлорамін - 30 % та експозицію 60 хвилин. Експланти переносять на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга з вмістом 1/3 макроелементів та додають БАП - 1 мг/л, що забезпечує отримання 6 штук нових пагонів. Укорінення проводять на середовищі Мурасіге і Скуга з вмістом 1/3 макроелементів, у яке включено модифікацію НОК - 0,5 мг/л. Температура культивування 24±2 °C та 16-годинний фотоперіод. Придатність рослин до пересаджування після укорінення у ґрунт можлива на 14 добу. Запропонований спосіб клонального мікророзмноження капусти кольрабі включає використання як експланту - насіння, яке промивають дистильованою водою, стерилізують 35 % розчином "Білизни", за експозиції 45 хвилин, що забезпечує отримання 93 % стерильних експлантів. Пересаджування проростків проводять на модифіковане живильне середовище Мурасіге і Скуга з повним набором макро- і мікроелементів, що модифіковане БАП - 0,2-0,6 мг/л та 30,0 г/л цукрозою. Культивування проводили за температури 24±2 °C та довжині фотоперіоду 16 годин. Для укорінення було введено додатково ІОК - 0,2 мг/л та НОК - 0,3 мг/л, цукроза - 30,0 г/л. Новими відмінними від існуючого прототипу ознаками є: - введення в стерильну культуру насіння капусти кольрабі; - використання для стерилізації "Білизни" - 35 %; - експозиція 45 хвилин; - використання повного набору макроелементів у середовищах для розмноження і укорінення за прописом Мурасіге і Скуга; - додавання у середовище для розмноження БАП 0,2-0,6 мг/л та цукрози 30,0 г/л; - використання цукрози; - для укорінення рослин додавання ІОК - 0,2 мг/л та НОК - 0,3 мг/л, та цукрози - 30,0 г/л; 1 UA 78939 U 5 10 15 20 25 - пересаджування рослин у ґрунт на 10 добу. Відмінні від прототипу ознаки при взаємодії з відомими дають можливість отримати високий вихід стерильних експлантів, зменшити витрати та удосконалити склад живильного середовища, пришвидшити отримання розсади, збільшити відсоток укорінених рослин та коефіцієнт розмноження капусти кольрабі у п'ять разів. Ефективність нового способу клонального мікророзмноження капусти кольрабі у культурі in vitro вивчали на таких матеріалах: Гігант, Делікатесна біла. За результатами досліджень видно, що стерилізуюча речовина "Білизна" та експозиція 45 хвилин забезпечує отримання 93 % стерильних експлантів, що на 32 % більше. Використання 1/3 кількості макроелементів у живильних середовищах для розмноження є недоцільним. Важливим є зменшення дорогого гормону БАП із 1 мг/л до 0,2-0,6 мг/л та додавання 30,0 г/л цукрози, що дасть можливість не тільки здешевити середовище за прописом Мурасіге і Скуга, а й забезпечить у п'ять разів вищий коефіцієнт розмноження. У середовищі для укорінення не слід використовувати БАП, а доцільніше використовувати ІОК - 0,2 мг/л і НОК - 0,3 мг/л та цукрозу - 30,0 г/л, що дозволить отримати 93,0 % укорінених рослин, які можна пересаджувати у ґрунт на 10 добу. Спосіб клонального мікророзмноження капусти кольрабі здійснюється таким чином: як експлант використовують насіння капусти кольрабі, яке промивають у дистильованій воді. Стерилізацію проводять 35 % розчином "Білизна" з експозицією 45 хвилин, що забезпечує отримання 93 % стерильних експлантів. В подальшому проростки висаджують на модифіковане живильне середовище за прописом Мурасіге і Скуга з повним набором макроелементів та доповнюють БАП 0,2-0,6 мг/л, цукрози - 30, 0 г/л, що призводить до отримання 30 штук рослин з одного експланту та збільшення у п'ять разів коефіцієнту розмноження. Для укорінення використовують з повним набором макроелементів модифіковане середовище Мурасіге і Скуга та доповнене ІОК - 0,2 мг/л і НОК 0,3 мг/л та цукрозою 30 г/л, що забезпечує 97 % укорінених рослин на 10 добу. Культивування проводили в термальних приміщеннях за температури 24±2 °C, освітленні 3000-4000 лк, відносній вологості 65-70 % та фотоперіоді - 16 годин (див. таблицю). Таблиця Показники ефективності використання запропонованого способу клонального мікророзмноження капусти кольрабі Показники Відомий спосіб Стерилізація Експозиція, хвилини Хлорамін 30 % 60 хвилин Сегменти 2-4 мм 67 Експлант Стерильність експлантів, % Мінеральна основа середовища для розмноження і 1/3 макро MS укорінення БАП, мг/л для розмноження 1,0 БАП, мг/л для укорінення 0,1 ІОК, мг/л НОК, мг/л 0,5 IMK, мг/л Кількість новоутворених пагонів, шт. 6,0 Укорінення, % 82,0 Цукроза, г Довжина фотоперіоду, годин 16,0 Температура культивування, °C 24±2 Коефіцієнт розмноження 6 Придатність рослин до пересаджування у ґрунт, доба 14 Запропонований спосіб Білизна - 35 % 45 хвилин Насіння 93 MS 0,2-0,6 0,2 0,3 30,0 97,0 30,0 16,0 24±2 30 10 30 Впровадження запропонованої корисної моделі дає можливість отримати високий вихід стерильних експлантів, зменшити витрати та удосконалити склад живильного середовища, пришвидшити отримання розсади, збільшити відсоток укорінених рослин та коефіцієнт розмноження капусти кольрабі у п'ять разів. 2 UA 78939 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб клонального мікророзмноження капусти кольрабі, що включає використання для розмноження та укорінення модифікованого середовища за прописом Мурасіге і Скуга, культивування при 16-годинному фотоперіоді при температурі 24±2 °C, який відрізняється тим, що культивування проводять з інтенсивністю освітлення 3000-4000 лк, при відносній вологості 65-70 %, для стерилізації як експлант використовують насіння, яке стерилізують 35 % розчином "Білизни" за експозиції 45 хвилин, для розмноження у середовище Мурасіге і Скуга із повним набором макроелементів додають бензиламінопурин (БАП) 0,2-0,6 мг/л і 30 г/л цукрози, для укорінення у середовище Мурасіге і Скуга із повним набором макроелементів додають індолілоцтову кислоту (ІОК) - 0,2 мг/л і нафтилоцтову кислоту (НОК) - 0,3 мг/л, і 30 г/л цукрози. Комп’ютерна верстка А. Крулевський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3