Спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові

Реферат: Спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові включає взяття у донора крові у контейнер та відділення формених елементів крові шляхом центрифугування. Відділяють шар тромбоцитів в окремий контейнер. Перед центрифугуванням отримують розчин, який формують з компонентів, один з яких Фіколл-400, а другий вибраний з групи: верографін, ізопак, урографін, уротраст, урополоніум, уроміро, нізотраст-370, тріозил, пак, омніпак або ронпакон. Перед центрифугуванням нашаровують відібрану у пацієнта свіжу кров на шар суміші зазначених речовин. Після здійснюють попереднє центрифугування. Прибирають верхній шар плазми та здійснюють повторне центрифугування. Потім відділяють шар тромбоцитів в окремий контейнер. UA 80169 U (12) UA 80169 U UA 80169 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до медицини і стосується способу отримання препарату для лікування запальних і дегенеративних процесів і для стимуляції регенерації тканин, зокрема отримання багатої на тромбоцити плазми крові. Відомий спосіб отримання плазми крові (див. Інструкція з донорського плазмаферезу, Затверджена Наказом Міністерства охорони здоров'я України 05.07.1999 N 164), за яким у донора беруть кров у пластикатну тару (контейнер), відділяють формені елементи крові шляхом центрифугування, при цьому центрифугування крові проводять при температурі від 0 до 30 град. С, протягом 12-15 хв. в режимі 980-1000 g., і переводять плазму із контейнерів з кров'ю в контейнер-приймальник плазми, відділяють контейнер з форменими елементами, в контейнер з форменими елементами вводять 50,0-100,0 мл 0,9 % розчину натрію хлориду, та ідентифікують контейнер за донором. Спосіб малоефективний, а збирана плазма містить дуже багато лейкоцитарної маси, що погіршує її властивості для лікування запальних і дегенеративних процесів і для стимуляції регенерації тканин. Відомий спосіб отримання плазми крові (див. SU902355, МПК А61К35/16, дата публікації 23.10.82 р., Бюл. №39), що включає збір в контейнери крові введення в кров стабілізатора з подальшим відділенням плазми, де в кров після стабілізації вводять суміш метилових ефірів 15фтор-15-дезоксипростагландину Е2 і 15-фтор-15-дезокси-11-епі-простагландину Е2 до кінцевої концентрації кожного з них 5-10 г/мл. Недоліками такого способу є використання дорогих хімічно активних сторонніх речовин, що призводить до значного дорожчання процесу і до погіршення місцевих тканинних реакцій репарації. Отримана збагачена тромбоцитами плазма, зважаючи на наявність в ній побічних хімічно активних речовин, малопридатна для ефективної стимуляції регенерації тканин. Відомий спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові (див. UA48703, МПК А61К35/14, А61К35/16, А61М1/36, дата публікації 25.03.2010, бюл. № 6), що включає збір в контейнери суміші крові та кісткового мозку з кісткової рани, зокрема відділюваних з отворів в губчастих частинах кісток під час встановлення занурювальних фіксаторів, наступне центрифугування в режимі 1500 об./хв. протягом 6 хв. Недоліком способу є обмежена сфера застосування в зв'язку з обмеженнями, що накладає спосіб забору та застосоване у способі джерело тромбоцитів. Умови центрифугування та інших дій по обробці джерела тромбоцитів не забезпечують достатнього рівня відділення лейкоцитарної маси та решти складових, що погіршує якість отриманої багатої на тромбоцити плазми крові. Отриманий продукт має бути застосований безпосередньо після отримання, тому що не може зберігатися тривалий час. Ефективність наступного лікування отриманим продуктом найбільшою мірою залежить від якості збагачення тромбоцитами плазми, яка в ідеалі не повинна містити інших компонентів, окрім життєздатних, багатих чинниками зростання тромбоцитів при максимально можливому їх числі. Відомий спосіб отримання аутологічного тромбоцитарного препарату для регенерації трубчастої кістки (RU2305563, МПК А61М1/36, А61К35/16, А61К35/14, дата публікації: 10.09.2007), що полягає у введенні в аутогенну кров стабілізатора, її центрифугуванні, додаванні прокоагулянта, що містить 10 % розчин СаСl2 і чинника згортання крові, при цьому центрифугування проводять при кімнатній температурі впродовж 6-8 хв із швидкістю 1000-2300 об/хв., а потім як чинник згортання крові додають 5000 ОД тромбіну. У відомому способі вибір швидкості роблять з діапазону, ні нижня, ні навіть верхня межі якого не можуть забезпечити якісне фракціонування аутокрові при одноразовому центрифугуванні, тим більше, що використовують для цього "звичайну лабораторну центрифугу" з радіальним розгоном і розподілом компонентів крові по їх щільності без чітких меж, що відділяють одні компоненти від інших. Відомий спосіб отримання аутологічного тромбоцитарного препарату (US7811607, МПК А61К35/16, 12.10.2010), що полягає в центрифугуванні антикоагульованої аутокрові в контейнері центрифуги, зафіксованому зйомно в днищі центрифуги гвинтовим з'єднанням з можливістю обертання відносно вертикальної осі центрифуги, в пошаровому розділенні аутокрові в результаті центрифугування багатої тромбоцитами плазми і еритроцити, виділенні шару багатої тромбоцитами плазми і в її активуванні активатором, наприклад тромбіном у присутності хлориду кальцію. Недоліком такого способу є обмежена сфера застосування, яка пов'язана з необхідністю застосування вузькоспеціального пристрою, який відсутній у більшості лабораторій. Відсутність у способі засобів, що відокремлюють при центрифугуванні шари тромбоцитів та еритроцитів не може забезпечити якісне фракціонування ауто крові, та тромбоцитарного препарату, повністю 1 UA 80169 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 відокремленого від решти складових, внаслідок чого при застосуванні отриманого препарату можливе загострення наявних у пацієнта хронічних, гострих запальних і вірусних захворювань. Задачею корисної моделі є створення способу одержання багатої на тромбоцити плазми крові, в якому за рахунок застосування нових дій та емпірично одібраних режимів їх застосування та речовин забезпечується менш травматичний для формених компонентів крові процес відокремлення тромбоцитів. Поставлена задача корисної моделі вирішується тим, що у способі одержання багатої на тромбоцити плазми крові передбачає забір у донора крові у контейнер, відділення формених елементів крові шляхом центрифугування, відділення шару тромбоцитів в окремий контейнер. Згідно з корисною моделлю, перед центрифугуванням отримують розчин, що має щільність 1,077 г/см, який формують з компонентів, один з яких Фіколл-400, а інший вибраний з групи: верографін, ізопак, урографін, уротраст, урополоніум, уроміро, нізотраст-370, тріозил, пак, омніпак або ронпакон, перед центрифугуванням, нашаровують відібрану у пацієнта свіжу кров на шар суміші зазначених речовин, здійснюють попереднє центрифугування при 90-120 gв протягом 14-15 хв., прибирають верхній шар плазми, здійснюють повторне центрифугування при 400-450 gв протягом 270-350 сек., а потім відділяють шар тромбоцитів в окремий контейнер. Сукупність дій та застосованих у новому способі речовин менш травматична для формених компонентів крові. За рахунок більш повного відокремлення підвищується термін збереження отриманого препарату. При застосуванні отриманого препарату зменшується вірогідність загострення наявних у пацієнта хронічних, гострих запальних і вірусних захворювань за рахунок значно меншої дії на систему згортання крові, систему комплементу та інші. Тромбоцити людини містять ряд речовин, характерною особливістю яких є здатність стимулювати репаративні процеси при дистрофічних порушеннях (плакін або b-лізин синтезується в гіпоталамусі, а в тромбоцитах він депонується, таурину в тромбоцитах в 300 разів більше, ніж в плазмі, окрім цього тромбоцитарний чинник зростання сприяє репаративним процесам, bтромбоглобулін є дезагрегантом, а інгібітори протеаз а 1-інтитрипсин та а2-макроглобулін відіграють важливу роль в гемосудинній регуляції. В окремих варіантах виконання способу одержання багатої на тромбоцити плазми крові у отриману у донора кров додатково додають цитрат натрію або цитрат декстрози у співвідношеннях 5/1, або гепарин у відношенні 25 од в 1 мл крові. Застосування у способі додаткових дій та речовин знижує вірогідність агрегації тромбоцитів. В окремих варіантах виконання способу одержання багатої на тромбоцити плазми крові відокремлені тромбоцити додатково двічі відмивають у фізрозчині. Застосування у способі додаткових дій додатково підвищує якість отриманого препарату. Запропонований спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові ілюструється прикладами одержання багатої на тромбоцити плазми. При здійсненні наведених прикладів центрифугування здійснювали на апараті «ELIZA» фірми DRGInstrumentsGmbH, Germany. При здійсненні зазначених в Таблиці 1 прикладів порошок Фіколла-400 та вказаний в Таблиці 1 другий компонент розчиняли в дистильованій воді, розчини змішували. За допомогою 3 ареометра вимірювали щільність отриманого розчину, яка повинна складати 1,077 г/см . Якщо щільність вища, ніж необхідно, то додавали розчин Фіколла 400, якщо нижче - другий компонент розчину. Периферичну кров з ліктьової вени в об'ємі 10 мл брали в пробірку, що містить гепарин, в кінцевій концентрації 25 од. в 1 мл крові. У центрифужну пробірку наливали 2-3 мл отриманої суміші(градієнта щільності), на нього нашаровували 4-6 мл плазми, що відстоялася. Співвідношення об'ємів градієнт:плазма витримували в межах 1:2-1:4. Пробірку центрифугували на режимах, вказаних в Таблиці. Прибирали верхній шар плазми, здійснювали повторне центрифугування при 400-450 gв протягом 270-350 сек, а потім відділяли шар тромбоцитів в окремий контейнер. Відокремлені тромбоцити додатково двічі відмивали у фізрозчині. 50 2 UA 80169 U Таблиця Компоненти Попереднє Температура Термін Термін, Центрифугує, Термін, приклади розділяючого центрифугув. збереження, збереженхв. gв сек. розчину gв °С ня, год. 1. Фіколл-400-пак 90 15 415 270 4 3 Фіколл-4002. 95 15 420 290 5 3 ронпакон Фіколл-4003. 120 14 400 350 4 3 тріозил Фіколл-4004. 100 14,5 410 280 5 3 ізопак Фіколл-4005. 90 15 450 270 4 3 уротраст Фіколл-4006. 115 14 400 350 4 3 омніпак 5 Як показують приклади сукупність дій та застосованих у новому способі речовин менш травматична для формених компонентів крови. За рахунок більш повного відокремлення підвищується термін збереження отриманого препарату. При застосуванні отриманого препарату не відмічалося загострення наявних у пацієнта хронічних, гострих запальних і вірусних захворювань. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 20 25 1. Спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові, за яким у донора беруть кров у контейнер, відділяють формені елементи крові шляхом центрифугування, відділяють шар тромбоцитів в окремий контейнер, який відрізняється тим, що перед центрифугуванням отримують розчин, що має щільність 1,077 г/см, який формують з компонентів, один з яких Фіколл-400, а другий вибраний з групи: верографін, ізопак, урографін, уротраст, урополоніум, уроміро, нізотраст-370, тріозил, пак, омніпак або ронпакон, перед центрифугуванням нашаровують відібрану у пацієнта свіжу кров на шар суміші зазначених речовин, здійснюють попереднє центрифугування при 90-120 gв протягом 14-15 хв., прибирають верхній шар плазми, здійснюють повторне центрифугування при 400-450 gв протягом 270-350 сек., а потім відділяють шар тромбоцитів в окремий контейнер. 2. Спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові за п. 1, який відрізняється тим, що у отриману у донора кров додатково додають цитрат натрію або цитрат декстрози у співвідношенні 5/1, або гепарин 25 од. в 1 мл крові. 3. Спосіб одержання багатої на тромбоцити плазми крові за п. 1, який відрізняється тим, що відокремлені тромбоцити додатково двічі відмивають у фізрозчині. Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3