Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб отримання антигенів із медичної п'явки, який включає відбір товарних медичних п'явок, їх просушування, фрагментацію тіл п'явок з наступним розтиранням, екстрагування тканинних структур та фільтрування надосаду, який відрізняється тим, що частини тіла п'явок промивають у забуференому фізіологічному розчині, просушують, розтирають і додають до перетертої маси забуферений фізіологічний розчин у масовому співвідношенні 1:10, а екстрагування антигенів здійснюють забуференим фізіологічним розчином у холодильнику, з наступним центрифугуванням на холоді та додатково стерилізують надосад.

Текст

Реферат: Спосіб отримання антигенів із медичної п'явки, який включає відбір товарних медичних п'явок, їх просушування, фрагментацію тіл п'явок з наступним розтиранням, екстрагування тканинних структур та фільтрування надосаду, крім того частини тіла п'явок промивають у забуференому фізіологічному розчині, просушують, розтирають і додають до перетертої маси забуферений фізіологічний розчин у масовому співвідношенні 1:10, а екстрагування антигенів здійснюють забуференим фізіологічним розчином у холодильнику, з наступним центрифугуванням на холоді та додатково стерилізують надосад. UA 80665 U (12) UA 80665 U UA 80665 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Спосіб належить до біології та медицини, а саме до діагностикумів, які використовують при імунологічних дослідженнях. Відомий спосіб отримання антигенів із медичної п'явки (Пат. 2033173 Российская Федерация, МПК А61К035/62. Способ получения препарата из медицинской пиявки, обладающего антитромботическим, тромболитическим, антиатеросклеротическим и гипотензивным действием / Баскова И. П.; заявитель и патентообладатель Баскова Изольда Порфирьевна. - № 5027506/14; заявл. 31.01.92; опубл. 20.04.95), який включає послідовне промивання товарних медичних п'явок дистильованою водою та фізіологічним розчином, їх заморожування, ліофільне висушування, звільнення висушених п'явок від шкірного покриву, розтирання в порошок до детриту, розчинення в фізіологічному розчині. Спільними із запропонованими ознаками є: - відбір товарних медичних п'явок; - послідовне промивання п'явок водою та фізіологічним розчином; - подрібнення до детриту. Недоліками способу є: недостатнє збереження антигенних властивостей медичної п'явки внаслідок заморожування та ліофільного висушування цілих п'явок, у травній системі яких міститься кров після годування; нестерильність отриманого діагностикуму; використання порошку, розчиненого у фізіологічному розчині, без сольової екстракції, що не дозволяє максимально виділяти антигени та зберігати їх природну структуру. Це обумовлює неточність визначення функціонального стану лімфоцитів крові людини і тварин при використанні антигенів, отриманих за допомогою даного способу. Окрім того, для отримання антигенів із медичної п'явки необхідне використання дорогого обладнання - ліофілізатора. Причинами, що перешкоджають досягненню результату, є: - використання цілої медичної п'явки, в травній системі якої містяться залишки крові після годування, що несуть чужорідні антигени, які не належать п'явці; - замороження п'явки, що призводить до зміни антигенних властивостей діагностикуму через порушення природної структури біополімерів клітин п'явки; - антигени, отримані за цим способом, мають порушену природну структуру; - застосування нестерильних антигенів може спричинити бактеріальний ріст у культурі лімфоцитів. Відомий спосіб отримання антигенів із медичної п'явки (Пат. 2116783 Российская Федерация, МПК А61К7/48. Крем для увядающей кожи лица / Селезнев К. Г.; Никонов Г. И.; заявитель и патентообладатель Московское акционерное общество "Биокон". -№ 95115644/14; заявл. 05.09.1995; опубл. 10.08.98), який включає: використання стандартних, статевозрілих, товарних, вирощених у штучних умовах медичних п'явок із періодом голодування після годування від 15 днів до 6 місяців; просушування п'явок і/або їх частин шляхом протирання вологопоглинаючим матеріалом; їх заморожування, отримання ліофілізату п'явок шляхом 12-24 годинної ліофілізації; подрібнення отриманої маси до порошкоподібного стану (детриту); екстрагування порошку дистильованою водою; фільтрування надосаду. Спільними із запропонованим рішенням ознаками є: - відбір товарних медичних п'явок; - їх просушування вологопоглинаючим матеріалом; - фрагментація тіл п'явок; - розтирання фрагментів тіл п'явок до детриту; - екстрагування тканинних структур протягом доби у водному середовищі; - фільтрування надосаду. Недоліками способу є: зміна антигенних властивостей тканин медичної п'явки, яка викликана заморожуванням, що призводить до неточності оцінки функціонального стану лімфоцитів крові людини та тварин. Окрім того, для отримання антигенів із медичної п'явки, за цим способом, необхідне використання дорогого обладнання - ліофілізатора. Причинами, що перешкоджають досягненню результату, є: - замороження п'явки, що призводить до зміни антигенних властивостей діагностикуму через порушення природної структури біополімерів клітин п'явки; - використання цілої медичної п'явки, в травній системі якої містяться залишки крові після годування, що несуть чужорідні антигени, які не належать п'явці; - екстрагування дистильованою водою, що змінює антигенні властивості біополімерів п'явки; - застосування нестерильних антигенів може спричинити бактеріальний ріст у культурі лімфоцитів. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб отримання антигенів із медичної п'явки, який шляхом збереження природної структури антигенів п'явки та 1 UA 80665 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 використання п'явок, які не містять чужорідних антигенів, дозволяє отримати недорогі, стерильні антигени з природною структурою. Суттєвими ознаками способу є: - відбір товарних медичних п'явок; - просушування їх вологопоглинаючим матеріалом; - фрагментація тіл п'явок; - промивання частин тіла п'явок від залишку крові, яка залишилася після годування, в забуференому фізіологічному розчині з рН 7,2 (ЗФР); - повторне їх просушування за допомогою волого поглинаючого матеріалу; - розтирання фрагментів тіл п'явок до детриту; - додавання до перетертої маси ЗФР у масовому співвідношенні 1:10; - екстракція антигенів протягом доби в холодильнику при +6 °C із періодичним струшуванням; - подвійне центрифугування в рефрижераторній центрифузі; - фільтрування надосаду з наступною його стерилізацією пропусканням через міліпоровий бакфільтр із розміром пор 2,3 мкм. Відмінними від прототипу ознаками є: - промивання частин тіла п'явок від залишку крові, яка залишилася після годування, в ЗФР із рН 7,2; - повторне просушування частин тіла п'явок за допомогою вологопоглинаючого матеріалу; - додавання до перетертої маси ЗФР у масовому співвідношенні 1:10; - екстрагування антигенів ЗФР у холодильнику при +6 °C із періодичним струшуванням; - подвійне центрифугування в рефрижераторній центрифузі; - стерилізація надосаду. Спосіб здійснюють таким чином: беруть 25-30 тіл товарних медичних п'явок, просушують їх вологопоглинаючим матеріалом, здійснюють фрагментацію тіл п'явок, промивають їх у ємкостях із ЗФР із рН 7,2 декілька разів (для усунення залишків крові від попередніх годувань), повторно їх просушують за допомогою вологопоглинаючого матеріалу та розтирають до детриту, додають до перетертої маси ЗФР у масовому співвідношенні 1:10, залишають на добу в холодильнику при +6 °C для екстракції тканинних структур, періодично струшують, центрифугують двічі в рефрижераторній центрифузі при +4 °C, 4000 g, 30 хв., фільтрують, а потім стерилізують надосад пропусканням через міліпоровий бакфільтр із розміром пор 2,3 мкм. Теоретичне обґрунтування способу. Запропонований спосіб отримання антигенів із медичної п'явки дозволяє забезпечити високий вихід стерильного цільового продукту з непошкодженою природною структурою антигенів при мінімальних витратах. Приклад виконання способу. Спосіб здійснювали таким чином: відбирали 30 тіл товарних медичних п'явок аптечної екоформи віком 5-7 місяців, які голодували чотири місяці, відкидали їх на сито, просушували їх вологопоглинаючим матеріалом (фільтрувальним папером). Здійснювали фрагментацію тіл п'явок на 4-5 частин, за допомогою ножиць. Промивали фрагменти тіл п'явок від залишків крові великої рогатої худоби в кількох порціях ЗФР із рН 7,2, повторно просушували їх фільтрувальним папером та зважували (вага фрагментів тіл 30 п'явок дорівнювала 19,3 г). Далі фрагменти тіл п'явок розтирали у фарфоровій ступці з битим склом із невеликою кількістю ЗФР із рН 7,2, (можливе використання морцелятора -подрібнювача тканин електромеханічного, МНПО "Ендомедіум-Україна", Харків). Потім перетерту масу перенесли в 250 мл флакон і додали ЗФР у масовому співвідношенні перетерта маса: ЗФР - 1:10. Витримували в холодильнику протягом доби при +6 °C для екстракції тканинних структур, флакон періодично струшували. Центрифугували двічі в рефрижераторній центрифузі при +4 °C, 4000 g, 30 хв. Надосад фільтрували пропусканням через міліпорові бакфільтри з розміром пор 6,0; 5,0; 3,0 та стерилізували пропусканням через міліпоровий бакфільтр із розміром пор 2,3 мкм. У частині проби визначили вміст білка за Лоурі, який становив 6,77 мг/мл. Екстракт фасували в стерильні мікропробірки (епіндорф) і зберігали у замороженому стані (при температурі -20 °C) до використання. Отримані антигени тестували на стерильність загальноприйнятими методами шляхом висівання розчину антигенів на поживні мікробіологічні середовища; росту мікроорганізмів (бактерій, грибів) не виявили. Наявність антигенних властивостей фільтрату із медичної п'явки, отриманого запропонованим способом, тестували в культурі лімфоцитів до (контроль) та після (дослід) курсу гірудотерапії.У культурах клітин крові людей після гірудотерапії спостерігалась у 2-3 рази 2 UA 80665 U 5 інтенсивніша реакція бластної трансформації лімфоцитів на антигени п'явки, порівняно з контролем. Це пов'язано з тим, що сенсибілізовані до антигенів медичної п'явки лімфоцити при повторній зустрічі з антигенами п'явки реагують відповідними імунологічними реакціями. Це дозволяє стверджувати, що антигени, отримані запропонованим способом, мають непошкоджену природну структуру. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє отримувати із медичної п'явки недорогі, стерильні антигени зі збереженою природною структурою. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 Спосіб отримання антигенів із медичної п'явки, який включає відбір товарних медичних п'явок, їх просушування, фрагментацію тіл п'явок з наступним розтиранням, екстрагування тканинних структур та фільтрування надосаду, який відрізняється тим, що частини тіла п'явок промивають у забуференому фізіологічному розчині, просушують, розтирають і додають до перетертої маси забуферений фізіологічний розчин у масовому співвідношенні 1:10, а екстрагування антигенів здійснюють забуференим фізіологічним розчином у холодильнику, з наступним центрифугуванням на холоді та додатково стерилізують надосад. Комп’ютерна верстка М. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for producing antigens from medicinal leeches

Автори англійською

Frolov Oleksandr Kyrylovych, Lytvynenko Raisa Oleksandrivna, Kopiika Vira Viktorivna, Fedotov Yevhen Rudolfovych

Назва патенту російською

Способ получения антигенов из медицинской пиявки

Автори російською

Фролов Александр Кириллович, Литвиненко Раиса Александровна, Копейка Вера Викторовна, Федотов Евгений Рудольфович

МПК / Мітки

МПК: A61K 38/00, A61K 39/00

Мітки: медичної, антигенів, п`явки, спосіб, отримання

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/5-80665-sposib-otrimannya-antigeniv-iz-medichno-pyavki.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб отримання антигенів із медичної п’явки</a>

Подібні патенти