Тверда композиція, що містить спори непатогенних бактерій bacillus genus

1. Фармацевтична тверда композиція спор непатогенних бактерій Bacillus genus, адсорбованих на матриці, виконаній з щонайменше одної водонерозчинної сполуки адсорбенту та похідного целюлози, де зазначена композиція одержана шляхом змішування суспензії згаданих спор у псевдозрідженому шарі. 2. Композиція за п. 1, яка відрізняється тим, що одержана змішуванням рідкої суспензії згаданих спор. 3. Композиція за п. 1 або 2, яка відрізняється тим, що містить від 3 до 30 більйонів вказаних спор на грам композиції. 4. Композиція за п. 3, яка відрізняється тим, що містить від 5 до 20 більйонів вказаних спор на грам композиції. 5. Композиція за п. 4, яка відрізняється тим, що містить приблизно 10 більйонів вказаних спор на грам композиції. 6. Композиція за одним з пп. 1-5, яка відрізняє ться тим, що вказаною сполукою адсорбенту є каолін. 7. Композиція за одним з пп. 1-5, яка відрізняє ться тим, що вказаною сполукою адсорбенту є кальцій карбонат. 8. Композиція за одним з пп. 1-7, яка відрізняє ться тим, що вказаним похідним целюлози є мікрокристалічна целюлоза. 9. Композиція за одним з пп. 1-8, яка відрізняє ться тим, що співвідношення мас 2 (19) 1 3 81225 Представлений винахід стосується твердої композиції, що містить спори непатогенних бактерій, для застосування у фармацевтичній, ветеринарній або харчувальній областях, зокрема композиції, що містить спори бактерій Bacillus genus. Підбір складу спор для застосування людиною чи твариною є важким та проблематичним, оскільки це містить живий матеріал, якщо використовують непридатну обробку, є ризик втрати значної частини активного компоненту. Відомі різні тверді композиції на базі спор. їх отримують різними способами, як-то, наприклад, ліофілізацією або "сушкою розпиленням"; подібно, рідкі суспензії спор або прості суміші спор зі звичайними екципієнтами, відомі з фармацевтичного рівня техніки, як-то, наприклад, [WO 99/49877], в якому композиції спор від бацил, що продукують молочну кислоту, описані для зменшення холестерину. Одним з головних недоліків попереднього рівня техніки є погана стабільність композицій як результат критичного фактору, який не дозволяє збереження протягом розумно довгого періоду та робить необхідним для збереження консервувати композицію перед її використанням при низькій температурі для підтримування властивостей спор незмінними як можливо. Іншим недоліком композицій попереднього рівня техніки є низька концентрація активного компоненту, а тому спор, які можна уводити у діючу композицію Рідкі композиції на основі спор є у продажу, наприклад суспензія спор бацил, яка продається в Італії протягом довгого часу під товарним знаком "Enterogermina®". Хоча вона є ефективною та протягом довгого часу використовується споживачами, ця суспензія не може містити дуже високу концентрацію активного компоненту (більш ніж 2 більйон спори/5 мл). Метою представленого винаходу є забезпечення твердої композиції на основі спор непатогенних бактерій, позначені далі як просто "спори", яка є простою при отриманні та легко зберігається і містить високу кількість активного компоненту та є стабільною в часі. Зараз виявлено, що адсорбцією спор на придатній матриці, використовуючи псевдозріджений шар, легко отримувати у промислових масштабах тверду форму спор при дуже високій концентрації, яка є дуже стабільною. Зокрема, виявлено, що ця тверда форма, позначена далі як "композиція", робить можливим приєднання до матриці великої кількості спор, створюючи тверду композицію при високій концентрації, розмір частинок та питома поверхня якої робить її особливо придатною для вивільнення спор in vivo вздовж усього шлунковокишкового тракт. На додаток виявлено, що композиція має чудову текучість, та як результат цього її можна обробляти у промислових умовах для формування 4 у однодозові або багатодозові композиції, без необхідності піддавати їх наступній обробці. Отже, згідно з одним з своїх аспектів, винахід стосується композиції спор непатогенних бактерій Bacillus genus, адсорбованих на матрицю, зроблену з щонайменше одної водорозчинної сполуки та похідного целюлози, яку можна отримувати у псевдозрідженому шарі. Більш особливо, винахід стосується композиції спор непатогенних бактерій Bacillus genus, яку можна отримувати способом, який включає обробку у псевдозрідженому шарі рідкої суспензії вказаних спор матрицею, зробленою з водонерозчинної сполуки адсорбенту та похідного целюлози. Згідно з представленим винаходом, вираз "сполука адсорбенту" означає будь-яку хімічну сполуку або суміш хімічних сполук, яку можна ковтати та яка має властивості адсорбенту; переважно, водо-нерозчинну сполуку адсорбенту вибирають з групи: глинозем, каолін, кальцій карбонат, колоїдний оксид силіцію, магній та алюміній силікат і похідні целюлози та бентоніт, каолін особливо переважний. Згідно з винаходом, вираз "похідне целюлози" означає будь-яке похідне целюлози яке можна ковтати, як-то, наприклад, мікрокристалічну целюлозу, метилцелюлозу, гідроксипропілметилцелюлозу, тощо, які широко доступні, мікрокристалічна целюлоза є особливо кращою. Зрозуміло, навіть, коли це не визначено точно, що усі компоненти композиції винаходу є такими, що їх можуть ковтати людина та/або тварини, тобто "нетоксичними". Зокрема, природу та якість компонентів слід вибирати згідно з основним застосуванням композицій, а їх тип та чисто та повинні тому бути придатними та сумісними з кінцевим застосуванням композицій; тому, як ілюстрація, коли композиція призначена для фармацевтичного лікування, тип чистота компонентів мають бути прийнятними з фармацевтичної точки зору. Вирази "адсорбовані спори", "адсорбція" або "адсорбування" означають згідно з представленим винаходом, утримання спор на поверхні матриці, з якої вказані спори вивільняються у травному тракті. Спори можуть утримува тися на матриці будьяким способом, а саме будь-яким можливим способом (хімічним, біологічним, фізичним, тощо), залежно від типу використовуваної матриці, Відносні кількості двох компонентів, які складають матрицю, може змінюватися в широких межах. Наприклад, співвідношення за масою сполуки адсорбенту та похідного целюлози може бути між 90:10 та 10:90, переважно між 70:30 та 30:70, навіть більш переважно між 60:40 та 40:60, два компоненти переважно представлені у матриці у співвідношенні за масою приблизно 50:50. У будь-якому випадку, матриця винаходу є водо-нерозчинною сумішшю, яка є інертною з огляду на спори, де вираз Інертна з огляду на 5 81225 спори" означає що вона не взаємодіє негативно зі спорами. Спори, які можна застосовувати згідно з представленим винаходом є переважно спорами непатогенних бактерій, які є особливо корисними у фармацевтичній, ветеринарній та/або харчувальній областях. Композиції представленого винаходу можуть містити спори одної Bacillus або спори різних змішаних Bacilli. Згідно з кращим аспектом композиція винаходу включає спори Bacillus subtilis або Bacillus clausii. Переважно, композиція винаходу включає спори одного або більше штамів Bacillus clausii (первинна таксономічна назва якої є Bacillus subtilis), депоновані у згоді з Будапештською конвенцією, з CNCM, Pasteur Institute, під номером: 1-273, 1-274, 1-275 та 1-276. Обробку у псевдозрідженому шарі, добре відому фахівцям, використовують для отримання композиції. Згідно з цим способом, водну суспензію, що містить спори, позначена далі, як "концентрована суспензія" розбризкують на матрицю, отриману змішуванням щонайменше одної сполуки адсорбенту та похідного целюлози, постійно перемішуючи струмом повітря при цьому, у пристрої, призначеному для цієї мети, як-то, наприклад, обробка у псевдозрідженому шарі грануляційного апарату. Концентрована суспензія є водною, яка виявляє дуже високу концентрацію спор. Згідно з особливо кращим аспектом винаходу, концентровану суспензію отримують інокуляцією одного або більше штамів Bacilli у культиваційному середовищі (наприклад на основі пептонів та мінеральних солей), інкубуючи суміш при придатній температурі протягом 48-72 годин при аерації, відділяючи клітини від збідненого середовища дистильованою водою центрифугуванням, а далі пастеризацією отриманої суспензії. Приклад такого отримання наведено в експериментальному розділі. Концентрована суспензія, що так отримують, має концентрацію спор Bacillus більше, ніж 10 більйонів на грам, нормально приблизно між 15 та 25 більйонів на грам, або навіть більше. Загалом, концентровану суспензію переважно консервують після заморожування внаслідок її високої нестабільності при зовнішній температурі. У цьому конкретному випадку концентровану суспензію слід розморожувати безпосередньо перед її застосуванням способом представленого винаходу. Альтернативно, концентровану суспензію можна створювати для негайного вживання суспензії спор, консервованих у формі, яку ліофілізують у воді. Температура струму повітря, використовуваного у способі представленого винаходу, знаходиться між зовнішньою температурою та максимальною температурою, яку витримують спори; згідно з кращим аспектом спосіб переважно здійснюють при температурі між 40 та 90°С, переважно між 60 та 80°С. 6 Після закінчення розпилення та адсорбції концентрованої матриці, отриману композицію далі підтримують у суспензії струмом нагрітого повітря до потрібного остаточного вмісту води, переважно вмісту води менше, ніж 3%, переважно 2% або менше. Тривалість способу визначається кількістю концентрованої суспензії, яку продувають, швидкістю продувки та також температурою струму повітря. Нормально, для закінчення обробки кількості приблизно ЗО кг матриці потрібно приблизно дві години. Спосіб отримання композиції складає наступний об'єкт представленого винаходу. Як визначено вище, композицію винаходу можна отримувати у високо концентрованій формі і вони можуть мати концентрацію, наприклад, між 3 та ЗО більйонів спор на грам кінцевої композиції, наприклад, між 5 та 20 більйонів спор на грам кінцевої композиції, переважно приблизно 10 більйонів спор на грам отже роблячи можливим вживання потрібної кількості спор у невеликому об'ємі. Ця важлива властивість означає, що композиція є особливо легкою для застосування і її, наприклад, можна уводити у тонкі желатинові капсули або пакетики або уводити у їжу або в інші композиції, за необхідністю, композицію можна також застосовувати після знов суспендування у воді або в інших придатних рідинах. Композиція винаходу має бути стабільною, в той же час тримаючи свій титр незмінним протягом довгого періоду часу, навіть при температурі більш ніж зовнішня температура (приблизно 40°С). Визначення титру спор у композиції винаходу можна проводити будь-яким способом, наприклад підрахунком на звичайних чашках для культур. Як визначено вище, композиція винаходу має велику питому поверхню, перевагою є дуже дрібний розмір частинок, до 90% частинок композиції мають розмір частинок рівним або менше 130 мікрометрів, переважно 60% частинок композиції мають розмір частинок рівним або менше 60 мікрометрів. На додаток, композиція не має запаху або смаку, а тому її можна додавати до їжі або пиття, або до іншої композиції без змінювання їх власного смаку. За бажанням, композиція може містити добавки, належно вибрані як функція кінцевого споживання, типу абсорбції або типу наступного лікування, бажаного для його об'єкту, за умови що добавки є інертними з огляду на спори. Наприклад, можливо додавати ковзні речовини, розріджувачі, тощо, або-будь-які інші засоби, здатні збільшувати текучість або поліпшува ти інші певні фізичні властивості з метою полегшення наступної обробки композиції. Наприклад, коли бажано уводити композицію у тверді желатинові капсули, може бути корисним додавати магній стеарат та/або мікрокристалічну целюлозу. Альтернативно замість або разом з вищезазначеними добавками можна додавати, посилюючі запах засоби, здатні до надання композиції особливого аромату або смаку. 7 81225 Можна додавати до матриці перед адсорбцією спор або просто до кінцевої композиції, отриманої способом винаходу, можливі інші компоненти. За необхідністю, композиція може бути об'єктом наступних модифікацій; композицію можна тому гранулювати згідно з добре відомими способами, коли бажано проводити її пресування, або можна обробляти, як-то для отримання композиції з регульованим вивільненням, згідно з добре відомими способами, для модифікації періоду, протягом якого вона вивільняється у кишечнику. Композицію можна застосовувати у різній кількості згідно з потребами, для яких її вживають. Загалом, у цьому випадку застосування людиною можливе для забезпечення 10 більйонів спор/добу, а навіть більш переважно від 1 до 8 більйонів на добу, наприклад, 2, 4 або 6 більйонів спор на добу, застосування можливе одною дозою або повторним дозуванням. Для її застосування композицію винаходу за прийнятністю можна формувати у дозовані одиниці; наприклад, зважаючи на її якості, її можна легко формувати у желатинові капсули, як-то желатинові капсули у форматі 0, 1 або 2, вибрані експертом-фахівцем згідно з дозуванням. Дозовані одиниці у формі желатинових капсул або пакетиків, що містять композицію винаходу репрезентують наступний об'єкт представленого винаходу. Наприклад, ці дозовані одиниці можуть містити від 1 до 10 більйонів вказаних спор, переважно від 2 до 5 більйонів, від 50 до 500мг, наприклад від 50 до 250мг каоліну та, наприклад, від 50 до 600мг, наприклад від 50 до 300мг мікрокристалічної целюлози. Ці дозовані одиниці можна застосовувати один або більше разів на добу, за потребою та залежно від концентрації дозованої одиниці. Наприклад, можливе отримання дозованих одиниць, що містять 5-7 більйонів спор, переважно приблизно 6 більйонів спор, та вживання вказаної дозованої одиниці тільки раз на добу. Оскільки вона містить живий матеріал, ясно що мікробіологічний титр може змінюватися; відповідно, для отримання композиції переважно додають надлишок спор у 10-20% відносно потрібної дози. Зважаючи на відсутність токсичності продукту, такий надлишок не створює будь-яких проблем. Деякі партії композицій винаходу, упаковані у скло або у поліетилен піддають дослідженню стабільності, як-то оцінці поведінки при різній температурі (від 5°С до 40°С) та відносній вологості (до 75% відносної вологості). Результати після 24 місяців показали, що титр композиції не послаблюється значно в будь-яких досліджених умовах. На додаток резистентність до антибіотиків та біохімічні характеристики оцінювали в таких же умовах, результати у згоді з початковими властивостями продукту. Композиція згідно з винаходом є корисною у фармацевтичній, ветеринарній або харчувальній областях. 8 Вона зокрема має таке ж застосування, як комерційно доступний продукт, Enterogermina®; зокрема, композиція винаходу виявляє корисний вплив на кишечник та на імунну систему і є особливо придатною для лікування та попередження кишкового дисбактеріозу та ендогенного авітамінозу та також при коад'ювантному лікуванні для відтворення кишкової мікрофлори, зміненої після лікування антибіотиками або хемотерапГі, вона є адаптованою, наприклад, для застосування у комбінації з антибіотиками для боротьби з Helicobacter pylori. Об'єктом винаходу є також медичний продукт, що містить композицію бактеріальних спор, які визначено вище. Нижченаведені приклади ілюструють винахід без його обмеження. Отримання концентрованої суспензії Попередню ферментацію 600мл суспензії чотирьох штамів Bacillus clausii 1-273, 1-274,1-275 та 1-276 (у рівній пропорції) при концентрації 500 мільйон спори/мл проводять у 30л ферментаційного середовища протягом 7 годин. Попередньо ферментовану суспензію інокулюють у 1 000л ферментаційного середовища на основі пептонів та мінеральних солей; інкубацію проводять при 37°С протягом 48-72 годин при аерації, клітини відокремлюють від культиваційного середовища дистильованою водою центрифугуванням до отримання кінцевого об'єму 100 л, та суспензію пастеризують при 70°С протягом 30 хвилин. Концентровану суспензію, що містить концентрацію спор Bacillus clausii приблизно 20 більйонів на грам отримують так. Приклад 1 15кг каоліну фармацевтичної якості та 15кг мікрокристалічної целюлози фармацевтичної якості завантажують у систему для обробки у псевдозрідженому шарі, та суміш гріють протягом кількох хвилин струмом повітря при 60°С. В зоні ламінарного потоку 15кг водної суспензії суміші спор Bacillus clausii 1-273, 1-274, 1-275 та 1-276 (концентрована суспензія, яку отримують, як вищезазначено) при концентрації 20 більйонів спор на грам завантажують у контейнер з перистальтичним насосом, з'єднані з розпилювальними форсунками, які мають 1,2мм у діаметрі та з'єднані з установкою псевдозрідженого шару. Концентровану суспензію спор розпилюють на нагріту суміш при тиску 2 бар та швидкості потоку 135 мл/хвилин, тримаючи суміш у суспензії повітрям при 60°С. Приблизно через 110 хвилин, систему зупиняють, дають охолонути та композицію збирають. Отримують композицію, що виявляє такі, характеристики: титр - визначено підрахунком на чашках: 10 більйонів спор/г; остаточний вміст води 2%; 7 розмір частинок - визначено, використовуючи лазерний аналізатор розміру частинок Malvern® у демінералізованій воді: 90% частинок < 100 мкм, 60% частинок < 50 мкм; 9 81225 питома поверхня: 3-5 м 2/г. Приклад 2 Проводячи процедуру як описано у прикладі 1, але використовуючи тільки штам Bacillus clausii 1274, отримують продукт, що виявляє такі, характеристики. титр - визначено підрахунком на чашках: 10 більйонів спор/г; остаточний вміст води 2%; розмір частинок, визначено, використовуючи лазерний аналізатор розміру частинок Malvern® у демінералізованій воді: 90% частинок < 130 мкм, 60% частинок < 60 мкм; питома поверхня: 3,5-5 м 2/г. Приклад З Проводячи процедуру як описано у прикладі 1, але використовуючи тільки штам Bacillus clausii 1276, отримують продукт, що виявляє такі, характеристики. титр -12 більйонів спор/г; остаточний вміст води 3%; розмір частинок - визначено, використовуючи, лазерний аналізатор розміру частинок Malvern® у демінералізованій воді: 90% частинок < 130 мкм, 60%. частинок < 60 мкм; питома поверхня: 3-5 м 2/г, Приклад 4 57г мікрокристалічної целюлози та 3г магній стеарату додають до 240г композиції прикладу 1. Після змішування отриману так композицію розподіляють у тверді желатинові капсули з кришкою формату 1, кожна з яких містить 300мг такої композиції: Матриця(каолін + мікрокристалічна целюлоза), що містить приблизно 2 більйони спор Bacillus dausii (1-273,1-274, 1-275,1-276) 240,00 мг Мікрокристалічна целюлоза 57,00мг Магній стеарат. 3,00мг Приклад 5 Тверді желатинові капсули формату 1, що містять 275мг композиції Матриця (каолін + мікроіфисталічна целюлоза), що містить приблизно 2 більйони спор Bacillus clausii (1-273,1274,1-275,1-276), 200,00мг Мікрокристалічна целюлоза 72,25мг Магній стеарат рослинного походження 2,75мг (при продукуванні формули 220,00 мг відповідні 10% зверху дози) Приклад 6 Тверді желатинові капсули формату 1, що містять 275мг композиції Матриця (кальцій карбонат + мікрокристалічна целюлоза), що містить приблизно 2 більйони спор Bacillus clausii (1-273, 1-274, 1-275, 1-276), 200,00мг Мікрокристалічна целюлоза 52,25мг Магній стеарат рослинного походження 2,75 мг (при продукуванні формули 220,00мг відповідні 10% зверху дози) 10