Спосіб оцінки активності запального процесу дихальних шляхів при моделюванні патологічного процесу

Реферат: Спосіб оцінки активності запального процесу дихальних шляхів при моделюванні патологічного процесу, що включає оцінку цитограми індукованого мокротиння, причому додатково визначають концентрацію фактора некрозу пухлин альфа (ФНП-α) у бронхоальвеолярному змиві імуноферментним методом, причому діагностичний висновок роблять за інтегральним індексом респіраторного запалення ( I r i ) як пропорційного добутку вказаних показників. UA 81836 U (12) UA 81836 U UA 81836 U 5 10 15 20 25 30 Корисна модель належить до медицини і цитології, зокрема клінічної лабораторної діагностики, і може бути використана в експериментальній патології і широкій медичній практиці при проведенні діагностичних досліджень. Відомий спосіб оцінки активності запального процесу дихальних шляхів при моделюванні патологічного процесу, який включає оцінку цитограми індукованого мокротиння [1]. За відомим способом, активність запального процесу дихальних шляхів вивчають за порушенням слизової оболонки респіраторного тракту на клітинному рівні. Недоліком відомого способу є недостатній рівень інформативності і точності діагностичного дослідження, що не забезпечує отримання повної картини характеру запалення, так як не враховує місцеві і системні імунні механізми перебігу запального процесу у респіраторному тракті. В основу корисної моделі поставлено задачу вдосконалити відомий спосіб, в якому шляхом використання адекватніших і коректніших показників запалення як типового патологічного процесу досягають підвищення точності та інформативності діагностичного способу. При вирішенні поставленої задачі до уваги було взято те, що до показників діагностичних реакцій, спроможних забезпечити вищу точність дослідження, відносять цитокіни, розчинні білкові та поліпептидні продукти, що синтезуються активованими імунокомпетентними клітинами та мають різнонаправлену дію, яка полягає у про- або протизапальному ефекті, імуностимулюючому або супресивному впливі [2]. Аналогічно, фактор некрозу пухлин альфа, що продукується моноцитами та макрофагами і виконує важливу роль у забезпеченні запального процесу, віднесено до сполук із високим рівнем діагностичної інформативності. З наведених позицій, вказані продукти доцільно використовувати як критерії для оцінки активності запального процесу дихальних шляхів при моделюванні патологічного процесу. З огляду на наведені міркування, поставлену задачу вирішують тим, що у відомому способі оцінки активності запального процесу в респіраторному тракті у дітей, що включає оцінку цитограми індукованого мокротиння, відповідно до корисної моделі, додатково визначають концентрацію фактора некрозу пухлин альфа (ФНП-α) у бронхоальвеолярному змиві імуноферментним методом, а оцінку активності запального процесу здійснюють за інтегральним індексом респіраторного запалення ( I r i ) як пропорційного добутку вказаних показників за допомогою формули: I r i  m  c , (1) 6 де m - кількість альвеолярних макрофагів у бронхоальвеолярному змиві, ×10 /мл; c - концентрація фактора некрозу пухлин-альфа у бронхоальвеолярному змиві, пг/мл. 35 40 45 50 55 Спосіб здійснюють наступним чином. У лабораторної тварини з легень отримують бронхоальвеолярний змив шляхом п'ятикратного промивання їх через трахею фізіологічним розчином. Отриманий бронхоальвеолярний змив у кількості 5,0-5,5 мл центрифугують при 1500 g протягом 15 хв. У супернатанті визначають концентрацію ФНП-α методом імуноферментного аналізу, а з отриманого осаду готують мазки для вивчення кількості альвеолярних макрофагів, які фарбують за Романовським-Гімзою. Отримані дані заносять у робочу таблицю, після чого, користуючись формулою 1, визначають інтегральний індекс респіраторного запалення ( I r i ), за рівнем якого оцінюють активність запального процесу дихальних шляхів при вибраному патологічному процесі. Приклад 1. На статевозрілому щуру-самцю масою 200 г моделюють гепатопульмональний синдром. Тварину анестезують внутрішньочеревним введенням тіопенталу натрію в дозі 40 мг/кг маси тварини. Модель створюють шляхом накладання подвійної лігатури на загальну жовчовивідну протоку і подальшого її пересічення скальпелем [3]. Виконавши розріз під мечовидним відростком, загальну жовчовивідну протоку відділяють від розташованих поруч тканин, накладають подвійну лігатуру, вище і нижче місця планованого перерізу. Потім головну жовчовивідну протоку пересікають скальпелем. Для виявлення загальної жовчовивідної протоки визначають її анатомічне розташування: вона знаходиться вище ворітної вени, виходячи з воріт печінки у вигляді Y-подібної форми, об'єднує гілочки обох дольових проток. У контрольній групі тварин загальну жовчовивідну протоку відділяють від тканин, але не пересікають. Післяопераційну рану пошарово, наглухо зашивають. На 31-у добу після операції тварин виводять з експерименту під тіопенталовим наркозом. Тваринам розкривають грудну клітку і відділяють легенево-серцевий комплекс. З легень отримують бронхоальвеолярний змив шляхом п'ятикратного промивання їх через трахею фізіологічним розчином. Отриманий БАЗ в кількості 5,0-5,5 мл центрифугують при 1500 g протягом 15 хв., відбирають супернатант для визначення концентрації ФНП-α методом імуноферментного аналізу, а з отриманого осаду готують мазки для вивчення кількості альвеолярних макрофагів, які фарбують за 1 UA 81836 U Романовським-Гімзою. Відсоток життєздатних клітин оцінюють у камері Горяєва за реакцією з трипановим синім, при цьому життєздатними вважають абсолютно незабарвлені клітини. Проводять підрахунок кількості клітин у п'яти великих квадратах камери Горяєва, що відповідає їх кількості в 1 мл клітинної суспензії [4]. Концентрація ФНП-α у бронхоальвеолярному змиві 5 6 складала 11,50 (пг/мл), кількість альвеолярних макрофагів - 1,07 (×10 /мл). Розрахували I r i за допомогою формули 1, а саме: I r i  107  1150  12,31 . , , 10 Приклад 2. Запропонованим способом оцінювали рівень респіраторного запалення при патологічному процесі у 6 білих статевозрілих нелінійних щурів масою 200-220 г. Рівень активності запального процесу дихальних шляхів у вигляді зазначених діагностичних показників наведено у таблиці. Таблиця Рівень активності запального процесу дихальних шляхів у бронхоальвеолярному змиві щурів із гепатопульмональним синдромом Контрольна група Дослідна група № п/п 6 6 Iri Iri m, ×10 /мл с, пг/мл m, ×10 /мл с, пг/мл 1 0,29 2,80 0,81 1,09 10,80 11,77 2 0,48 1,20 0,58 1,34 9,30 12,46 3 0,39 1,50 0,59 1,50 10,10 15,15 4 0,23 3,90 0,90 1,00 14,50 14,50 5 0,44 1,10 0,48 1,07 11,50 12,31 6 0,27 1,90 0,51 0,90 12,80 11,52 М±m 0,35±0,04 2,07±0,44 0,64±0,07 1,15±0,09 11,50±0,77 12,95±0,61 15 20 25 30 У результаті, встановлено, що індекс респіраторного запалення при експериментальному гепатопульмональному синдромі достовірно перевищував (р < 0,001) дані контрольної групи. Наведені дані засвідчують високу точність дослідження та інформативність показників. Отже, запропонований спосіб забезпечує вищий, ніж за відомим способом, рівень точності та інформативності, і може бути застосований у клініко-лабораторній практиці та експериментальних дослідженнях. Джерела інформації:, які слід взяти до уваги: 1. Пат. 7066U, МПК А61В 10/00. Спосіб оцінки активності запального процесу в респіраторному тракті у дітей / Л.С. Овчаренко, А.О. Вертегел, А.Б. Бородін, Т.Г. Андрієнко, Н.В. Жихарєва. - № u 20040705357; заявл. 05.07.04, опубл. 15.06.05, Бюл. № 6. 2. Сидоренко Ю.В. Цитокіновий профіль крові у хворих на хронічне обструктивне захворювання легень, сполучене з неалкогольним стеатогепатитом, на тлі туберкульозу легень / Ю.В. Сидоренко // Український медичний альманах.-2008. - Т. 11, № 6. - С. 139-142. 3. Fallon М.В. Common bile duct ligation in the rat: a model of intrapulmonary vasodilatation and hepatopulmonary syndrome / M.B. Fallon, G.A. Abrams, J.W. McGrath et al. // Am. J. Phisiol.-1997. Vol. 272. - P. 779-784. 4. Кубышкин A.B. Эластолитическая активность бронхоальвеолярного лаважа при моделировании воспалительного процесса в легких / А.В. Кубышкин, И.И. Фомочкина // Укр. біохім. журн.-2008. - № 1 (80). - С. 89-95. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 40 Спосіб оцінки активності запального процесу дихальних шляхів при моделюванні патологічного процесу, що включає оцінку цитограми індукованого мокротиння, який відрізняється тим, що додатково визначають концентрацію фактора некрозу пухлин альфа (ФНП-α) у бронхоальвеолярному змиві імуноферментним методом, причому діагностичний висновок роблять за інтегральним індексом респіраторного запалення ( I r i ) як пропорційного добутку вказаних показників за допомогою формули: Iri  mc , 6 де m - кількість альвеолярних макрофагів у бронхоальвеолярному змиві, ×10 /мл; c - концентрація фактора некрозу пухлин альфа у бронхоальвеолярному змиві, пг/мл. 2 UA 81836 U Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3