Нова комбінація глюкокортикоїду та pde-інгібітору для лікування респіраторних захворювань, алергічних захворювань, астми та хронічних обструктивних легеневих захворювань

1. Композиція для пригнічення активності запальних симптомів при лікуванні респіраторних захворювань, алергічних захворювань, астми та/або хронічних обструктивних легеневих захворювань, яка відрізняється тим, що вона містить N-(3,5-дихлоропіридин-4-іл)-2-[1-(4фторобензил)-5-гідроксііндол-3-іл]-2-оксоацета-мід (DFHO) та етабонат лотепреднолу. 2. Лікарський засіб для лікування респіраторних захворювань, алергічних захворювань, астми та/або хронічних обструктивних легеневих захворювань, який відрізняється тим, що містить як активний інгредієнт N-(3,5-дихлоропіридин-4-іл)2-[1-(4-фторобензил)-5-гідроксііндол-3-іл]-2оксоацетамід (DFHO) і етабонат лотепреднолу та, за необхідності, придатні наповнювачі або носії. 2 (19) 1 3 Даний винахід стосується нової комбінації глюкокортикоїду, зокрема, loteprednol, та принаймні одного інгібітора фосфодіестерази-4 (PDE-4 інгібітор), зокрема, похідної гідроксііндолу N-(3,5-дихлоропіридин-4-іл)-2-[1-(4-фторобензил)5-гідроксііндол-3-іл]-2-оксоацетаміду, для одночасного, послідовного або окремого введення при лікуванні респіраторних захворювань, алергічних захворювань, астми та хронічних обструктивних легеневих захворювань (COPD). В основі алергічних захворювань та хронічних обструктивних легеневих захворювань лежать запальні процеси, які характеризуються збільшеною кількістю запальних клітин та збільшенням вивільнення або секреції посередників запалення. Дослідження, які здійснювалися в останні 20 років, виявили, що запалення дихальних шляхів відіграють ключову роль у дихальній дисфункції при астмі та хронічних обструктивних легеневих захворюваннях. Подібні зміни спостерігалися при алергічних запаленнях носа та очей. Зазвичай слизова оболонка пропускає крізь себе велику кількість клітин, включаючи мастоцити, еозинофіли та лімфоцити. Ці клітини вивільнюють велику кількість посередників, включаючи, зокрема, інтерлейкін-4 (IL-4), GM-CSF (стимулюючий фактор колонії гранулоцитів/макрофагів) та фактор некрозу пухлин a (TNF-a), які зрештою викликають запалення та симптоми алергічних захворювань У даний час хронічних протизапальний та подібний обструктивних терапевтичний підхід застосовують при всіх легеневих захворювань. алергічних захворюваннях. Патологія цих захворювань виявляє, що запальний процес у слизовій оболонці пацієнтів насамперед визначає активність симптомів. Серед протизапальних сполук, які в даний час є доступними для лікування астми, риніту або кон'юнктивіту, найбільш ефективними є глюкокортикоїди. В оптимальному варіанті застосовують активні інгредієнти, які можуть бути введені локально шляхом інгаляційного, інтраназального або внутрішньоочного введення. На основі успішного застосування придатних для інгаляції глюкокортикоїдів для лікування та профілактики респіраторних запалень та постійного пошкодження легенів у пацієнтів з астмою цей терапевтичний підхід також було застосовано до пацієнтів з хронічними обструктивними легеневими захворюваннями, хоча немає даних, які можуть однозначно підтвердити довготривалу ефективність цих активних інгредієнтів для пацієнтів з хронічними обструктивними легеневими захворюваннями [Whittaker AJ, Spiro Одна з найбільш важливих протизапальних властивостей SG; Curr Opin Pulm Med 2000; 6:104-9].полягає глюкокортикоїдів в інгібуванні вивільнення цитокіну. Відомо, що кілька цитокінів, наприклад, IL-4, IL-5, GM-CSF та TNF-a, беруть участь у респіраторному запаленні. Ефективність глюкокортикоїдів частково може пояснюватися інгібіторним впливом на синтез цитокінів та вивільнення цитокінів [Marx et al.; Pulm Pharmacol Ther 2002; 15:7-15]. Один з недоліків глюкокортикоїдів полягає в їх можливих системних побічних ефектах, таких як, наприклад, гальмування росту або остеопороз. 82323 4 Доцільними заходами зі зниження ризику побічних ефектів при локальному введенні глюкокортикоїдів є застосування мінімальної ефективної дози або зменшення системної доступності активного інгредієнта. Новий шлях відкривається через застосування так званих м'яких стероїдів. На відміну від інших глюкокортикоїдів, більшість яких зазнає розпаду на фармакодинамiчно неактивні метаболіти лише у печінці, м'які стероїди зазнають часткової метаболічної інактивації навіть у місці їх введення (інтраназального, очного або внутрішньолегеневого). Після цього часткового місцевого метаболізму лише дуже невелика частина фармакодинамiчно активної речовини досягає системи кровообігу або взагалі не досягає, і, таким чином, стероїд-специфічних побічних ефектів на практиці не очікують. Найбільш яскравим прикладом із цього нового класу активних інгредієнтів є loteprednol, який уже є ухваленим для терапевтичного лікування алергічного кон'юнктивіту та увеїту. Інший клас потенційних терапевтичних засобів для алергічних захворювань та хронічних обструктивних легеневих захворювань включає інгібітори фосфодіестерази-4. Ферменти фосфодіестерази відповідають за інактивацію циклічного аденозин монофосфату (сАМР) та циклічного гуанозин монофосфату (cGMP). Інгібування фосфодіестерази-4 веде до збільшення сАМР у клітинах, що, у свою чергу, веде до знижувальної регуляції функції практично всіх прозапальних клітин або імунних клітин. Цікаво, що запальні клітини, які беруть участь у патогенезі захворювань, наприклад, астми, кон'юнктивіту, риніту або хронічних обструктивних легеневих захворювань, вибірково експресують ферменти фосфодіестерази-4. В останні роки спостерігається прогрес у розробці інгібіторів фосфодіестерази-4, які можуть бути застосовані для терапії алергічних захворювань, астми або хронічних обструктивних легеневих захворювань. Існує можливість, яка дозволяє продемонструвати інгібіторну активність in vitro щодо вивільнення цитокінів та терапевтичну ефективність у моделях астми, наприклад, для таких активних інгредієнтів, як рофлуміласт, циломіласт або пікламіласт [Torphy et al.; Pulm Pharmacol Ther 1999; 12:131-5; Poppe et al.; Allergy 2000; 55(Suppl 63):270; Giembycz MA; Expert Opin Investig Drugs 2001; 10:1361-79; Ezeamuzie CI; Eur J Pharmacol 2001; 417:11-8]. Існує особлива зацікавленість у новому класі заміщених гідроксііндолів, які описано у [DE 19818964, DE 19917504 та US 6,251,923], а також нових 7-азаіндолів, які описано у [DE 10053275 та РСТ/ЕР 01/12376]. було виявлено, що нова Несподівано комбінація глюкокортикоїду з принаймні одним інгібітором фосфодіестерази-4 має переваги при лікуванні респіраторних захворювань, алергічних захворювань, астми та/або хронічних обструктивних легеневих захворювань. Терапія з додаванням інгібітора фосфодіестерази-4, зокрема, похідної гідроксііндолу N-(3,5дихлоропіридин-4-іл)-2-[1-(4-фторобензил)-5гідроксііндол-3-іл]-2-оксоацетаміду, який може бути введений перорально, інтраназально або 5 82323 6 (циклопентилокси)-4-метоксифеніл]-2шляхом інгаляції, та локальних глюкокортикоїдів, піролідинон), рофлуміласт (Byk-Gulden), зокрема, loteprednol, визначається поліпшеною пікламіласт (Rhone-Poulenc Rorer), циломіласт терапевтичною ефективністю, а також меншою (GlaxoSmithKline) та похідна гідроксііндолу N-(3,5кількістю побічних ефектів. дихлоропіридин-4-іл)-2-[1-(4-фторобензил)-5Винахід призначено для поліпшення гідроксііндол-3-іл]-2-оксоацетамід. Особливу терапевтичного лікування респіраторних перевагу віддають заміщеній похідній захворювань, алергічних захворювань, астми та гідроксііндолу N-(3,5-дихлоропіридин-4-іл)-2-[1-(4хронічних обструктивних легеневих захворювань, фторо-бензил)-5-гідроксііндол-3-іл]-2а також їх профілактики. Інгібітор оксоацетамідові (далі - "DFHO"), який описано, фосфодіестерази-4, присутній у комбінації, та наприклад, у [DE 19818964]. Інгібітори глюкокортикоїд дає можливість успішно фосфодіестерази-4 також можуть бути застосовані контролювати запалення, які лежать в основі як фармацевтично прийнятні солі, про що відомо патологічних станів. Крім того, терапія з спеціалістам у даній галузі. додаванням інгібітора фосфодіестерази-4 Комбінацію глюкокортикоїду, зокрема, м'якого потребує меншого застосування глюкокортикоїдів, стероїду згідно з винаходом, з принаймні одним таким чином, знижуючи ризик побічних ефектів. Таким чином, даний винахід стосується інгібітором фосфодіестерази-4 вводять як композиції, яка включає глюкокортикоїд та профілактично, так і після виникнення симптомів. принаймні один інгібітор фосфодіестерази-4 у Їх також застосовують для уповільнення або постійній або довільній комбінації, та її запобігання прогресуванню захворювань. застосування для виробництва медикаменту. В оптимальному варіанті втілення Винахід також стосується медикаменту для застосовують комбінацію активних інгредієнтів лікування респіраторних захворювань, алергічних loteprednol етабонату та N-(3,5-дихлоропіридин-4захворювань, астми та/або хронічних іл)-2-[1-(4-фторобензил)-5-гідрокси-індол-3-іл]-2обструктивних легеневих захворювань, який оксоацетаміду (DFHO). включає як активний інгредієнт глюкокортикоїд та Представлений нижче опис експериментів принаймні один інгібітор фосфодіестерази-4 у служить для детального пояснення вказівок постійній або довільній комбінації, та способу його авторів винаходу без його обмеження. одержання. можливість Існує застосування всіх Інгібування вивільнення GM-CSF із LPSглюкокортикоїдів для цілей даного винаходу. В стимульованих моноцитів оптимальному варіанті застосовують так звані EDTA-ізовану людську кров змішували з м'які стероїди. Прикладами глюкокортикоїдів, які буфером Хенкса у співвідношенні 1:1. Розчин можуть бути застосовані згідно з винаходом, є Histopaque 1077 (15мл) обережно вкривали беклометазон (9-хлоро-11b,17,21-тригідрокси-16bвоском. 40мл крові: суміші Хенкса центрифугували метил-1,4-прегнадієн-3,20-діон), зокрема, (2000об./хв) при кімнатній температурі протягом беклометазон дипропіонат, будезонід (16a,1730хв. Смугу, збагачену лейкоцитами, видаляли бутилідендіокси-11b,21-дигідрокси-1,4-прегнадієншляхом аспірації, двічі промивали буфером 3,20-діон), циклезонід [див., наприклад, WO Хенкса і переносили у середовище RPMI 1640 з 98/52542 та наведену авторами літературу], Glutamax I (Gibco BRL, Eggenstein). Моноцити флутиказон (3-(фторометил) 6a,9-дифторо-11bвидаляли через їх прилипання до пляшки з карботіоат), зокрема, флутиказон пропіонат, культурою клітин протягом двогодинного періоду. мометазон (9,21-дихлоро-11b,17-дигідрокси-16aКлітини ретельно промивали середовищем з метил-1,4-прегнадієн-3,20-діон), зокрема, метою видалення неприлипаючих клітин. мометазон фуроат, та loteprednol, зокрема, Одержані в результаті моноцити культивували у loteprednol етабонат (хлорометил 17aсередовищі RPMI1640 з 10% інактивованою [(етоксикарбоніл)окси]-11b-гідрокси-3шляхом нагрівання ембріональною телячою В оптимальному варіанті втілення оксоандроста-1,4-дієн-17b-карбоксилат). винаходу сироваткою (FCS) і 100U/мл пеніциліну та loteprednol та його фармацевтично прийнятні 100мкг/мл стрептоміцину в інкубаторі з СО2 (5% естери, зокрема, loteprednol етабонат, СO2, відносна вологість 96%, 37°С). застосовують як м'який стероїд. Одержання Первинні моноцити висівали у 24-лункові loteprednol та loteprednol етабонату описано, планшети у кількості 5´105клітин/лунку. Клітини наприклад у [німецькому патенті DE 3126732, попередньо інкубували з певними випробуваними відповідному патенті США 4,996,335 та речовинами протягом 30 хвилин. Після цього відповідному японському патенті JP-89011037]. додавали LPS і інкубацію продовжували протягом Інші м'які стероїди, придатні згідно з періоду 24год. Супернатанти видаляли шляхом винаходом, описано, наприклад, у [німецькому аспірації й досліджували шляхом аналізу ELISA. патенті DE 3786174, відповідному патенті ЕР Кількість секретованих людських GM-CSF у 0334853 та відповідному патенті США 4,710,495]. супернатантах культури клітин визначали, Існує можливість застосування для цілей застосовуючи аналіз ELISA людських GM-CSF даного винаходу всіх інгібіторів фосфодіестеразиOptEIAÔ (Pharmingen, San Diego). Його 4. До них, крім інших, належить клас заміщених здійснювали у мікротитрувальних планшетах. похідних гідроксііндолу, які описано у [DE Моноклональні антитіла проти людини з'єднували 19818964, DE 19917504 та US 6,251,923], а також як антитіла з планшетом при 4°С до наступного нові похідні 7-азаіндолу, які описано у [DE дня. Після цього вкривання та трьох промивань 10053275 та РСТ/ЕР 01/12376]. Прикладами здійснювали насичення неспецифічних зв'язувань інгібіторів фосфодіестерази-4, які застосовують за допомогою розчину аналітичного згідно з винаходом, є роліпрам ((R)-4-[3 7 82323 8 DFHO, на інгібування вивільнення TNF та GMрозріджувачаÔ (PBS з 10% FCS, рН 7,0) CSF. (Pharmingen, San Diego) при кімнатній температурі Нижчезазначені дозовані форми є особливо протягом 1год. Після цього здійснювали інкубацію придатними для введення комбінації активних зі зразками та стандартом (рекомбінантні людські інгредієнтів згідно з винаходом. GM-CSF) при 4°С до наступного дня. Зразки Таким чином, активні інгредієнти, присутні в приготовляли нерозведеними або розведеними у комбінації, можуть бути введені, наприклад, співвідношенні 1:50 як стандартні розведення окремо як дві композиції для перорального згідно з протоколом, починаючи з вихідного введення, або один активний інгредієнт може бути розчину 500пг/мл людських GM-CSF. Зв'язані у формі композиції для перорального введення, а людські GM-CSF виявляли за допомогою інший може мати форму для локального біотинілованих моноклональних антитіл проти застосування (інтраназального, інгаляційного). людських GM-CSF та кон'югату авідину з В одному варіанті втілення винаходу інгібітор пероксидазою хрону при кімнатній температурі фосфодіестерази-4 може бути введений протягом 1год. Після всіх етапів здійснювали перорально. У цьому разі застосовують традиційні промивання 5 або 7 разів, застосовуючи фармацевтичні композиції, наприклад, таблетки, PBS/0,05% Tween 20. Ферментну активність сиропи, капсули, композиції уповільненого визначали, застосовуючи субстратний розчинÔ вивільнення (композиції тривалого вивільнення), (тетраметилбензидин (ТМВ) та перекис водню, пастилки або шипучі гранули. Pharmingen, San Diego) як субстрат при кімнатній Тверді фармацевтичні форми, наприклад, температурі протягом 30хв. Ферментно-субстратну таблетки, можуть включати інертні інгредієнти та реакцію зупиняли 1М фосфорної кислоти і носії, такі як, наприклад, карбонат кальцію, вимірювали гасіння при 450нм. фосфат кальцію, фосфат натрію, лактоза, Результати крохмаль, маніт, альгінати, желатин, гуарова Спочатку будували графіки залежності смола, стеарат магнію або стеарат алюмінію, активності від дози окремо для N-(3,5метилцелюлоза, тальк, колоїдні кремнеземи, дихлоропіридин-4-іл)-2-[1-(4-фторобензил)-5силіконова олія, жирні кислоти високої гідроксііндол-3-іл]-2-оксоацетаміду (DFHO) та молекулярної маси (наприклад, стеаринова loteprednol. На їх основі розраховували ІС 50 для кислота), агар-агар або рослинні чи тваринні жири вивільнення GM-CSF з людських моноцитів, та олії, тверді полімери високої молекулярної маси відповідно, 3,2мкМ для DFHO і 53,7нМ для (наприклад, поліетиленгліколь); композиції, loteprednol. У подальших експериментах придатні для перорального введення, у визначали значення ІС50 для DFHO та loteprednol у відповідних випадках можуть включати додаткові присутності недостатніх для ІС 50 концентрацій ароматизатори або підсолоджувачі. Композиції у відповідної іншої речовини. У цих випадках формі капсул виготовляють, застосовуючи додавання 5нМ DFHO знижувало ІС50 для загальноприйняті процеси, наприклад, із loteprednol з 53,7нМ до 13,4нМ. І навпаки, застосуванням вищезгаданих носіїв в оболонці додавання 10нМ loteprednol знижувало ІС 50 для твердої желатинової капсули. Для композицій у DFHO з 3,2мкМ до ,0,06мкМ. для loteprednol для Значення ІС50 виявлені формі м'яких желатинових капсул існує можливість вивільнення TNF та GM-CSF із LPSзастосування фармацевтичних носіїв, які зазвичай стимульованих моноцитів, відповідає значенням використовують для виробництва дисперсій або ІС50, вказаним у літературі для інших клітинних суспензій, таких як, наприклад, водні смоли, систем. Це означає, що застосована клітинна целюлози, силікати або олії, які є включеними в система є повноцінною і придатною, і оболонку м'якої желатинової капсули. Композиції дослідження, які є необхідними для проекту з цією сиропів зазвичай складаються з суспензії або системою, дозволяють дійти надійного висновку. розчину сполуки або її солі в рідкому носії, такому Значення ІС50 Для DFHO відповідають значенням, як, наприклад, етанол, арахісова олія, оливкова вказаним у патентній літературі. олія, гліцерин або вода, причому можуть бути При застосуванні 5нМ DFHO зниження ІС50 присутні ароматизатори та барвники. Існує можливість досягнення шляхом для loteprednol для вивільнення TNF становило локального введення комбінації активних 65%, а для вивільнення GM-CSF становило 75%. інгредієнтів згідно з винаходом терапевтично Концентрація 5нМ DFHO є значно нижчою за ІС50 ефективних концентрацій навіть при нижчих дозах. для цієї речовини, що дорівнює, відповідно 5,7мкМ З цієї причини композиціям для локального та 3,2мкМ, і тому ніякого ефекту не спостерігають застосування, до яких належать, зокрема, при застосуванні лише 5нМ DFHO. композиції для інтраназального введення та І навпаки, зниження ІС50 Для DFHO для інгаляцій, віддають перевагу з точки зору даного вивільнення TNF становило 99%, і для винаходу. Інтраназальні композиції вводять як водні або вивільнення GM-CSF становило 98%, коли олійні розчини, суспензії або емульсії. Для одночасно застосовували 10нМ loteprednol. введення активного інгредієнта шляхом інгаляції Концентрація 10нМ loteprednol була значно він може бути введений у формі суспензії, розчину нижчою за ІС50 цієї речовини, що становить або емульсії, які існують у вигляді сухого порошку 85,5нМ та 53,7нМ, відповідно, і тому ніякого або у вигляді аерозолю, причому можливим є ефекту не спостерігають при застосуванні лише застосування всіх традиційних газів-витискувачів. 10нМ loteprednol. спостереження, яке не могло Несподіване В оптимальному варіанті втілення винаходу бути передбачене спеціалістами в даній галузі, композиція інгібітора фосфодіестерази-4 полягає в існуванні додаткового впливу, передбачається у формі аерозолю для введення у викликаного одночасним введенням loteprednol та 9 82323 10 ніс або дозованого аерозолю або дозованого на високій швидкості. Потім разом розчиняють сухого порошку для інгаляції. Глюкокортикоїдна речовини полісорбат 80, розчин сорбіту, едетат композиція в оптимальному варіанті так само є натрію та хлорид бензалконію при перемішуванні. композицією для локального застосування, а для Після цього гомогенізують активний інгредієнт м'якого стероїду loteprednol перевагу також loteprednol етабонат на високій швидкості до віддають композиції у формі аерозолю для утворення рівномірної суспензії. Потім доводять введення у ніс, дозованого аерозолю або до остаточного об'єму за допомогою очищеної дозованого сухого порошку для інгаляції. води й гомогенізують далі. Після цього видаляють М'який стероїд loteprednol етабонат, який суспензію з метою видалення утворених застосовують згідно з винаходом, в оптимальному бульбашок повітря. Одержану в результаті варіанті рецептують у формі суспензії у воді з суспензію після цього розливають по пляшках, які іншими інгредієнтами, такими як консерванти, потім оснащують аерозольними насосами для стабілізатори, тонізуючі агенти, загусники, введення у ніс. В оптимальному варіанті втілення активні стабілізатори суспензії, наповнювачі для компоненти цієї комбінації передбачено у формі регулювання рівня рН, буферні системи та постійної комбінації, що, таким чином, спрощує зволожуючі засоби. Більш детально прийнятні користування для пацієнта. Введення активних наповнювачі описано, наприклад, у [DE 19947234]. інгредієнтів у цьому разі може відбуватись Фармацевтичні композиції згідно з винаходом, одночасно, послідовно або окремо у вільній або крім глюкокортикоїду та принаймні одного постійній комбінації. Вони можуть вводитись і у інгібуючого фосфодіестеразу-4 активного формі одиничної дози, і як дві окремі композиції, інгредієнта, можуть містити інші інгредієнти, які можуть бути ідентичними або різними. наприклад, традиційні консерванти, стабілізатори, Доставлення може відбуватися, одночасно або в загусники, ароматизатори і т. ін. різні часи, причому як з короткими, так і з довгими Приклад варіанта втілення інтервалами, наприклад, з введенням loteprednol Суспензія аерозолю для введення у ніс з увечері і введення інгібітора фосфодіестерази-4 loteprednol етабонатом (1%) вранці, або навпаки. Активні інгредієнти можуть вводитися від одного до шести разів на день. Активні інгредієнти Loteprednol етабонат 1,000г в оптимальному варіанті вводять від одного до AvicelRC591 1,100г двох разів на день, у ще кращому варіанті - двічі Полісорбат 80 0,100г на день. Доза одного або кількох інгібіторів 70% розчин сорбіту 6,000г фосфодіестерази-4 становить приблизно від 0,1 Едетат натрію 0,050г до 20мг на день для дорослого пацієнта, в Хлорид бензалконію 0,020г оптимальному варіанті - від 0,2 до 5мг. Доза Очищена вода до 100мл глюкокортикоїду може бути в межах допустимого дозування, тобто в межах від 0,1 до 1,6мг на день, Виробництво в оптимальному варіанті - від 0,2 до 0,8мг на день. Заливають 45кг очищеної води у відповідний Конкретна доза залежить від загального стану резервуар для перемішування з гомогенізуючим пацієнтів (віку, маси і т. ін.) та тяжкості пристроєм і гомогенізують у ньому Avicel RC 591 захворювання. Комп’ютерна верстка О. Гапоненко Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601