Спосіб одержання антименінгококової плазми

Реферат: Спосіб одержання антименінгококової плазми шляхом забору крові у донорів, виділення плазми, аналізу на гемотрансмісивні агенти, тестування специфічним еритроцитарним діагностикумом та отримання цільового продукту. Скринування плазми донороспроможного населення усіх груп крові за системою АВ0 проводять реакцією непрямої пасивної гемаглютинації (РНПГА) з еритроцитарним менінгококовим діагностикумом і відбирають плазму з вмістом специфічних антитіл в титрах від 1:80 до 1:1280. UA 90115 U (12) UA 90115 U UA 90115 U 5 10 15 20 25 30 Корисна модель належить до області медицини, призначається для одержання антименінгококової плазми, і може використовуватись в імунології та трансфузіології. Проблема одержання антименінгококової плазми із крові імунізованих донорів з одного боку залишається актуальною, а з другого боку - не вирішеною. Враховуючи значний ріст захворюваності на менінгококову інфекцію як дитячого так і дорослого населення та полірезистентність етіологічного фактора до фармацевтичних препаратів, можливість одержання плазми антименінгококової спрямованості для пасивної імунізації тяжко хворих з менінгококовою інфекцією є актуальною. Відомі класичні способи одержання алогенної імунної плазми спрямованої дії (антистафілококової, антисиньогнійної, антипротейної та ін.) шляхом попередньої активної імунізації донорів-волонтерів відповідними антигенними препаратами з наступним взяттям крові [1, 2, 3]. Ці способи мають ряд недоліків, а саме: - обов'язкова наявність антигенного препарату для імунізації; - активне антигенне подразнення імунокомпетентної системи донора, яке може негативно вплинути на імунний статус його організму; - висока вартість та тривалий процес одержання плазми крові спрямованої дії; - поступове зменшення контингенту донорів для імунізації. Найближчим аналогом заявленого способу є одержання імунної плазми проти грамнегативних бактерій родів Proteus, Pseudomonas, Salmonella, Escherichia з вмістом антитіл проти цих збудників в титрах 1:240-1:960, що включає забір донорської крові, виділення плазми [4]. Цей спосіб не забезпечує одержання алогенної плазми з високим вмістом антитіл проти менінгокока. Задачею корисної моделі, що заявляється, є одержання алогенної антименінгококової плазми з високим вмістом специфічних антитіл. Поставлена задача вирішується шляхом скринінгу плазми крові навмисне неімунізованого донороспроможного населення всіх груп крові за системою АВ0 на гемотрансмісивні агенти, проведенням реакції непрямої пасивної гемаглютинації (РНПГА) з використанням еритроцитарного менінгококового діагностикуму та виявленням сироваткових антименінгококових антитіл в титрах від 1:80 до 1:1280. Такий рівень антитіл виявляється у (35,40±0,77) % донороздатного населення (таблиця 1). Таблиця 1 Частота виявлення анти менінгококових антитіл у титрах 1:80-1:1280 абс. число Відносне число, %, М±m 73 32,40±0,76 121 37,90±0,81 51 31,40±0,85 35 40,70±0,99 Група крові Кількість обстежених донорів за сироваток крові донорів системою АВ0 0(I) 225 А (II) 319 В (IIІ) 162 АВ (IV) 86 0 (І), А (II), В 792 (III), AB (IV) 35 40 45 280 35,40±0,77 Кожен донор, у якого брали кров для одержання антименінгококової плазми, проходив клініко-лабораторне обстеження для виявлення стану здоров'я та придатності його крові для виготовлення плазми. Кров не повинна мати антитіл до ВІЛ ½, гепатиту С, блідої спірохети та антигену гепатиту В. Біохімічні показники крові, при яких функція печінки вважається за нормальну, не повинні перевищувати верхній показник норми: рівень загального білірубіну 5,1-20,5 нмоль/л, прямого білірубіну не більше 5,0 нмоль/л, тимолової проби 0-4 од., рівень бета-ліпопротеїдів до 20 од., активність аланінамінотрансферази 0,1-0,7 нмоль/л, нормальні показники крові та сечі, рівень цукру в крові не більше 6,0 нмоль/л. Тільки при таких показниках кров донора може бути джерелом одержання антименінгококової плазми. Суть корисної моделі характеризується конкретними прикладами. Приклад 1. Донор P., 32 роки, група крові В(III), титр сироваткових антименінгококових антитіл у крові 1:640. Беруть 450 мл донорської крові шляхом ексфузії з ліктьової вени в полімерний індивідуальний гемоконтейнер з гемоконсервантом CPDA-1. В результаті центрифугування отримують 250 мл плазми з титром специфічних антитіл 1:640. 1 UA 90115 U 5 10 15 20 25 30 35 Для визначення титру специфічних антитіл відбирають в пробірку 5 мл крові донора. Після утворення згустку одержану сироватку відбирають стерильною піпеткою у стерильні пробірки. Для визначення антименінгококових антитіл у сироватці крові використовують мікрометод реакції непрямої пасивної гемаглютинації (РНПГА) із використанням багатоканальних дозаторів, планшета круглодонного для імунологічних реакцій та еритроцитарного менінгококового діагностикуму. Облік результатів реакції проводять через 2 год. після інкубації у термостаті. Постановка здійснюється згідно інструкції до застосування діагностикуму. Титром досліджуваного зразка вважається його найбільше розведення, де має місце чітко виражена реакція аглютинації. Визначення антименінгококових антитіл: досліджувані зразки сироваток інактивують за температури 56 °C 30 хв. Проінактивовані зразки розводять 1:10 забуференим фізіологічним розчином (ЗФР) хлориду натрію (pH 7,2-7,4). У лунки планшета вносять по 0,05 мл фізіологічного розчину NaCI. В перші дві лунки вносять по 0,05 мл досліджуваної сироватки у розведених 1:10 і розтитровують, починаючи з другої лунки (1:20) до титру 1: 1280. У кожну лунку вносять по 0,025 мл менінгококового діагностикуму. Планшет легенько струшують, перемішуючи реагенти. Контроль: до 0,05 мл фізіологічного розчину хлориду натрію додають 0,025 мл діагностикуму (негативний результат). Зразки сироваток із титром антитіл 1:80 слід вважати високо специфічними. Приклад 2. Донор Ф., 26 років, група крові 0(1), титр сироваткових антименінгококових антитіл 1:320. Беруть 450 мл крові. При центрифугуванні отримують 240 мл плазми з титром специфічних антитіл 1:320, (Визначення антименінгококових антитіл проводять аналогічно прикладу І). Приклад 3. Донор С., 42 роки, група крові А(П), титр сироваткових антименінгококових антитіл 1:160. Беруть 450 мл крові. При центрифугуванні отримують 245 мл плазми з титром специфічних антитіл 1:160. (Визначення антименінгококових антитіл проводять аналогічно прикладу І). Приклад 4. Донор К., 37 років, група крові AB(IV), титр сироваткових антименінгококових антитіл 1:80. Беруть 450 мл крові. При центрифугуванні отримують 250 мл плазми з титром специфічних антитіл 1:80. (Визначення антименінгококових антитіл проводять аналогічно прикладу І). Плазма крові з титрами антименінгококових антитіл нижче, ніж 1:40 неімунна. Плазма крові з титрами антименінгококових антитіл вище, ніж 1:1280 виявляється рідко, тому її скрикування є нереальним. Запропонований спосіб дозволив вперше одержати алогенну антименінгококову плазму, що характеризується рівнем титрів специфічних антитіл від 1:80 до 1:1280. Специфічна активність плазми зберігається на протязі 24 годин за температури (18±2)°С, 72 години - за температури (4±2)°С та 6 місяців за температури не вище - 30 °C (табл. 2). Таблиця 2 Зразки Вихідні дані 1 2 3 4 5 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 Титр антименінгококових антитіл Термін зберігання, 6 місяців при t не вище - 30 °C 2 3 4 5 1:80 1:80 1:80 1:80 1:160 1:160 1:160 1:160 1:320 1:320 1:320 1:320 1:640 1:640 1:640 1:640 1:1280 1:1280 1:1280 1:1280 6 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 40 45 Антименінгококова плазма може бути використана в комплексному лікуванні тяжко хворих на менінгококову інфекцію. Джерела інформації: 1. Патент на винахід Україна (UA) № 46201 "Спосіб одержання антистафілококової плазми", 2004. Федоровська О.О., Назарчук Л.В., Скачкова Н.К. Немировська Л.М. 2. Патент на изобретение Евразийское патентное ведомство Молдова, № 016268 "Способ получения антистафилококковой плазмы крови", 2012. Потапнев М.П., Пешняк Ж.В., Мальцева Л.М. (BY), Смирнов М.Н. (RU). 2 UA 90115 U 5 3. Авторское свидетельство СССР, № 548275 "Способ получения гипериммунной антисинегнойной антитоксической человеческой плазмы", 1977. Скуркович СВ., Крохина М.А., Даватдарова Г.М., Черкас Г.П., Подгорная Л.Г., Шинкаренко А.А. 4. Патент на винахід Україна (UA) № 45823 "Спосіб одержання імунної плазми проти грам негативних бактерій", 2006. Пархоменко Л.В., Мороз Є.Д., Сопіль Г.В., Тимохіна Л.В. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 Спосіб одержання антименінгококової плазми шляхом забору крові у донорів, виділення плазми, аналізу на гемотрансмісивні агенти, тестування специфічним еритроцитарним діагностикумом та отримання цільового продукту, який відрізняється тим, що скринування плазми донороспроможного населення усіх груп крові за системою АВ0 проводять реакцією непрямої пасивної гемаглютинації (РНПГА) з еритроцитарним менінгококовим діагностикумом і відбирають плазму з вмістом специфічних антитіл в титрах від 1:80 до 1:1280. 15 Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3