Імунобіологічний препарат для попередження та лікування кандидозної інфекції

Реферат: Імунобіологічний препарат для попередження та лікування кандидозної інфекції на основі С. albicans та С. tropicalis, який відрізняється тим, що містить одержані за допомогою ультразвукової дезінтеграції антигени грибів С albicans з концентрацією білку 1-10 мг/мл та С tropicalis з концентрацією білку 1-10 мг/мл у співвідношенні 1:1, консервант фенол у концентрації 0,25 % та розчинник фосфатний буфер з рН 7,2±0,2. UA 94139 U (54) ІМУНОБІОЛОГІЧНИЙ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ПОПЕРЕДЖЕННЯ ТА ЛІКУВАННЯ КАНДИДОЗНОЇ ІНФЕКЦІЇ UA 94139 U UA 94139 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до фармації, медицини та ветеринарії, а саме імунобіологічних препаратів для попередження та лікування кандидозної інфекції. За останні роки різко зросла кількість хворих на кандидоз серед людей та тварин, який викликається дріжджоподібними грибами роду Candida. Зростання захворюваності на кандидоз пов'язане з нераціональним використанням антибіотиків, гормонів, стероїдних препаратів, імунодепресантів та інших препаратів, а також посиленням патогенності самих дріжджоподібних грибів роду Candida. Кандидоз проявляється у різних формах, з яких найбільшу небезпеку представляють системний та вісцеральний кандидоз. Вони характеризуються тривалим протіканням хвороби, мають різноманітні клінічні прояви та часті рецидиви. Такі форми кандидозу важко піддаються лікуванню сучасними медикаментозними засобами, у тому числі і протигрибковими антибіотиками. У зв'язку з цим, для терапії кандидозних захворювань рекомендується використання специфічної стимуляції захисних механізмів. Для цього використовуються вакцини на основі грибів роду Candida. Відома вакцина проти кандидозу сільськогосподарських тварин, яка отримується наступним шляхом: культивується штам гриба С. albicans № 253 у матрацах протягом 10 діб з подальшим виділенням за допомогою ультразвуку розчинного антигену зі штаму гриба С. albicans № 253 з 8 8 3 активністю спор 4,510 - 5,510 в 1 см та індексом агломерації 6-10 %, котрий уявляє собою цитоплазматичну фракцію гриба та ад'ювант [1]. Недоліком наведеного препарату є довготривале культивування штаму грибів, що призводить до старіння культури та втрати активності, а також відсутність методів очищення та стандартизації препарату. Відома вакцина проти кандидозу людини, яка отримується наступним шляхом: культивується штам гриба С. albicans № 253 протягом 28-36 годин з подальшим виділенням за допомогою ультразвуку розчинного антигену зі штаму гриба С. albicans № 253 з концентрацією 8 8 3 клітин грибів 1,8510 - 2,510 в 1 см дистильованої води, індексом імуногенності 6-9 % та вмістом ліпідів - до 0,2 %, полісахаридів - 50-76 %, пептидів з м.м. менше 10 Кд - 80-87 %, засіб містить як інактиватор - формалін, а як розчинник дистильовану воду [2]. Недоліком наведеного препарату є нераціональне використання ресурсів тому, що одержана вакцина має недостатньо високу активність, забезпечує формування імунітету тільки проти гриба С. albicans і не може бути використана для лікування, а використовується тільки для попередження кандидозів. Відома вакцина проти вісцеральних мікозів кроликів, яка отримується наступним шляхом: культивується штам гриба Mucor racemosus 195 та С. albicans № 253 з подальшим виділенням складових антигенів за допомогою ультразвуку зі штаму гриба Mucor racemosus 195 та штаму гриба С. albicans № 253, які культивували зі швидкістю культивування 28-36 годин та 8 8 3 3 концентрацією клітин гриба 1,8510 - 2,510 в 1 см в 1 см дистильованої води [3]. Недоліком наведеного препарату є нераціональне використання ресурсів тому, що одержана вакцина має недостатньо високу активність та забезпечує формування імунітету тільки проти гриба С. albicans і не може бути використана для лікування кандидозів. За прототип вибрано відому асоційовану вакцину проти кандидозу тварин, яка як антигени містить інактивовані бластоспори штамів С. albicans № 95 і С. tropicalis № 87, взяті у рівних 3 співвідношеннях по 10-40 млн. бластоспор в 1 см 0,8-1 % розчину сірчанокислого натрію [4]. Недоліком наведеного препарату є нераціональне використання ресурсів тому, що одержана вакцина має недостатньо високу активність. Задачею корисної моделі є розробка ефективного імунобіологічного препарату для попередження та лікування кандидозної інфекції, який має протективні властивості та діє одночасно у відношенні кандидозних захворюваннях, викликаних різними видами грибів роду Candida. Поставлена задача вирішується таким чином, що імунобіологічний препарат для попередження та лікування кандидозної інфекції на основі С. albicans та С. tropicalis, згідно з корисною моделлю, містить одержані за допомогою ультразвукової дезінтеграції антигени грибів С. albicans з концентрацією білку 1-10 мг/мл та С. tropicalis з концентрацією білку 1-10 мг/мл у співвідношенні 1:1, консервант фенол у концентрації 0,25 % та розчинник фосфатний буфер з рН 7,2±0,2. Заявлений препарат отримується наступним чином. Культури дріжджоподібного гриба роду С. albicans та С. tropicalis окремо висівають у пробірки з агаром Сабуро та культивують у термостаті протягом 2-х діб. Одержані культури окремо висівають у матраси з агаром Сабуро. Далі проводять культивування у термостаті протягом 4-12 діб. Клітини грибів С. albicans та С. tropicalis окремо руйнують ультразвуковою дезінтеграцією з подальшим розділенням рідкої та твердої фаз центрифугуванням, далі проводять попередню, стерилізуючу фільтрацію та 1 UA 94139 U 5 10 15 20 25 30 35 ультрафільтрацією, змішування одержаних антигенів грибів С. albicans та С. tropicalis у розчині фосфатного буферу з рН 7,2±0,2 з додаванням консерванту фенолу. Запропонований імунобіологічний препарат для попередження та лікування кандидозної інфекції, містить суміш білків та полісахаридів. Полісахариди представлені моносахаридними елементами: манозою, у меншій кількості глюкозою. Новий імунобіологічний препарат для попередження та лікування кандидозної інфекції може бути використаний безпосередньо або у ліофілізованій формі. Усі компоненти заявленого препарату визначені експериментальним шляхом, препарат може бути одержаний за допомогою стандартного обладнання. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1 Визначення протективної дії заявленого препарату проводили на білих мишах. Для оцінки здатності заявленого імунобіологічного препарату викликати протективні реакції проводили дослідження на здорових білих мишах двохмісячного віку масою 18-22 г по 6 тварин у контрольних та дослідних групах, які утримувалися в однакових умовах на стандартному раціоні. Перед дослідженнями тварини проходили акліматизацію в умовах експериментальної кімнати. Мишам внутрішньом'язово у верхню частину задньої правої лапи вводили одержаний імунобіологічний препарат у об'ємі по 0,2 мл. Через 14 днів, повторно, в верхню частину задньої лівої лапи вводили одержаний імунобіологічний препарат у об'ємі по 0,2 мл. Тваринам у контрольній групі вводили стерильний ізотонічний розчин 0,9 % натрію хлориду. Через 1 місяць після імунізації проводили внутрішньочеревне зараженням дослідних тварин. Для цього використовували суспензію грибів С. albicans штам ССМ 335-867 у кількості 20 млн. клітин та С. tropicalis штам АТТС20336 у кількості 60 млн. клітин в об'ємі 1 мл. Результати проб ураховували за кількістю різних проявів хвороби та оцінювали за наступною системою: (-) - відсутність проявів захворювання; слабка форма захворювання (+) неохайний вигляд, відмова від їжі, падіння ваги тіла, порушення функції вивідних органів; середня форма захворювання (+ +) - адинамія, неохайний вигляд, відмова від їжі, падіння ваги тіла, контрактури шийних м'язів, бокове розташування тіла, порушення функції вивідних органів, під час розтину при дослідженні слизових оболонок природних отворів були виявлені ознаки патологічних процесів, висівання грибів з фекалій тварин; розвинута форма захворювання (+ + +)- адинамія, неохайний вигляд, відмова від їжі, падіння ваги тіла, контрактури шийних м'язів, параліч кінцівок, судоми, бокове розташування тіла, порушення функції вивідних органів, при дослідженні слизових оболонок природних отворів, внутрішніх органів тварин були виявлені ознаки патологічних процесів: мікроабсцеси у корковому шарі нирок, у легенях, селезінці, печені та інших, виділення ретрокультур грибів з органів тварин (табл. 1). Таблиця 1 Протективна дія імунобіологічного препарату Препарати Імунобіологічний препарат Фізіологічний розчин Результати через 3 місяці Імунобіологічний препарат Фізіологічний розчин 40 45 ++ Дослідні тварини 4 5 Результати через 1 місяць +++ ++ +++ ++ +++ ++ +++ +++ 1 2 +++ +++ ++ 6 В результаті проведених досліджень встановлено, що одержаний імунобіологічний препарат забезпечує у 100 % тварин протективні властивості протягом 3 місяців. Приклад 2 Визначення терапевтичної проективної дії заявленого препарату проводили на білих мишах. Для оцінки здатності заявленого імунобіологічного препарату викликати терапевтичний проективний ефект проводили дослідження на здорових білих мишах двохмісячного віку масою 18-22 г по 6 тварин у контрольних та дослідних групах, які утримувалися в однакових умовах на стандартному раціоні. Перед дослідженнями тварини проходили акліматизацію в умовах експериментальної кімнати. Тварин заражали внутрішньочеревно суспензію грибів С. albicans штам ССМ 335-867 у кількості 20 млн. клітин та С. tropicalis штам АТТС 20336 у кількості 60 млн. клітин в об'ємі 1 мл. Через 5 діб мишам внутрішньом'язово у верхню частину задньої правої 2 UA 94139 U 5 лапи вводили розроблений імунобіологічний препарат по 0,2 мл. Через 14 діб, повторно, в верхню частину задньої лівої лапи вводили розроблений імунобіологічний препарат по 0,2 мл. Тваринам у контрольній групі вводили стерильний ізотонічний розчин 0,9 % натрію хлориду. Після чого через 14 діб проводили огляд тварин та визначали результати за описаною вище схемою. Таблиця 2 Терапевтична дія імунобіологічного препарату 1 Тварини 1 2 3 4 5 6 10 15 20 25 після зараження ++ + ++ + ++ ++ Контроль Результат після другої ін'єкції після зараження після другої ін'єкції + ++ ++ +++ + ++ ++ +++ + +++ ++ +++ В результаті проведених досліджень встановлено, що одержаний імунобіологічний препарат забезпечує у 100 % тварин терапевтичну протективну дію. Таким чином, одержаний препарат може використовуватися для попередження та лікування різних форм кандидозу, у тому числі вісцеральної форми, яка важко піддається діагностиці та лікуванню. Джерела інформації: 7 1. Пат. 2217163 Российская Федерация, МПК А61K 39/00, C12 N1/14. Вакцина против кандидоза сельскохозяйственных животных /Агольцов В.А., Ласкавый В.Н. (РФ). 2002104050/13; заяв. 19.02.2002; опубл. 27.11.2003. 7 2. Пат. 2281110 Российская Федерация, МПК А61K 36/06. Лекарственное средство против кандидоза человека для инъекций /Ласкавый В.Н., Шуманов В.М. (РФ). 2005103460/15; заяв. 10.02.2005; опубл. 10.08.2006. 7 3. Пат. 2352355 Российская Федерация, МПК А61K 39/00, А 61 Р 31/00. Ассоциированная вакцина против висцеральных микозов кроликов /Ласкавый В.Н., Панфёров В.И., Малахова Е.А. (РФ).-2007139596/13; заяв. 25.10.2007; опубл. 25.10.2007. 7 4. Пат. 2445109 Российская Федерация, МПК А61K 36/062, А61K 47/02, С12N 1/14. Ассоциированная вакцина против кожного кандидоза плотоядных, способ изготовления ассоциированной вакцины против кожного кандидоза плотоядных, способ профилактики и терапии кожного кандидоза плотоядных /Литвинов А.М., Апанасенко Н.А. (РФ).-2010127796/10; заяв. 07.07.2010; опубл. 07.07.2010. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Імунобіологічний препарат для попередження та лікування кандидозної інфекції на основі С. albicans та С. tropicalis, який відрізняється тим, що містить одержані за допомогою ультразвукової дезінтеграції антигени грибів С. albicans з концентрацією білку 1-10 мг/мл та С. tropicalis з концентрацією білку 1-10 мг/мл у співвідношенні 1:1, консервант фенол у концентрації 0,25 % та розчинник фосфатний буфер з рН 7,2±0,2. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3