Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією шляхом трикратної екстракції подрібненої рослинної сировини водою при загальному співвідношенні сировини до екстрагенту 1:23 при постійно підтримуваній температурі 80 °С з подальшим об'єднанням відфільтрованих екстрактів, їх упарюванням, очищенням спиртом етиловим 96 % та сушінням, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують траву нуту звичайного (Cicer arietinum L.), першу екстракцію проводять при співвідношенні сировина:екстрагент 1:10 протягом 2,0 годин, другу та третю - при співвідношенні 1:8 та 1:5 відповідно по 0,5 години кожна.

Текст

Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією шляхом трикратної екстракції подрібненої рослинної сировини водою при загальному співвідношенні сировини до екстрагенту 1:23 при постійно підтримуваній температурі 80 °С з подальшим об'єднанням відфільтрованих екстрактів, їх упарюванням, очищенням спиртом етиловим 96 % та сушінням, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують траву нуту звичайного (Cicer arietinum L.), першу екстракцію проводять при співвідношенні сировина:екстрагент 1:10 протягом 2,0 годин, другу та третю - при співвідношенні 1:8 та 1:5 відповідно по 0,5 години кожна. UA (21) a201009806 (22) 06.08.2010 (24) 25.11.2011 (46) 25.11.2011, Бюл.№ 22, 2011 р. (72) ЧЕРКАШИНА АЛІНА ВІКТОРІВНА, КОВАЛЬОВ ВОЛОДИМИР МИКОЛАЙОВИЧ, КОВАЛЬОВ СЕРГІЙ ВОЛОДИМИРОВИЧ, ГРИЦИК АНДРІЙ РОМАНОВИЧ, КОНОНЕНКО НАДІЯ МИКОЛАЇВНА, ТЮПКА ТЕТЯНА ІВАНІВНА, ШЕВЦОВ ІГОР ІВАНОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ (56) UA 30879 A, 15.02.2003. UA 23647 U, 11.06.2007. UA 38150 U, 25.12.2008. UA 40243 A, 16.07.2001. UA 29304 U, 10.01.2008. RU 2158600 C1, 10.11.2000. C2 2 (19) 1 3 гом 11-12 годин з подальшим упарюванням екстракту до водного залишку з наступним очищенням від речовин ліпофільної природи хлористим метиленом при співвідношенні водного залишку до хлористого метилену 3:4 з подальшим сушінням до сухого залишку. Недоліком способу є одержання засобу з вузькоспрямованою фармакологічною дією та надмірні витрати хлористого метилену [1]. Найближчим до заявленого способу за сукупністю ознак є спосіб одержання комплексу полісахаридів гемостатичної та протизапальної дії [2], який передбачає принаймні двократну екстракцію листя акації білої водою при температурі 90°C при співвідношенні сировина:екстрагент 1:14-1:15 протягом 2-3 годин з подальшим об'єднанням одержаних зливів і упарюванням до 1/15 попереднього об'єму, осадженням трикратною кількістю спирту етилового та промиванням осаду спиртом етиловим, сушінням, подрібненням. Вихід комплексу полісахаридів становить 5,5-7,0 %. До недоліків відомого способу [2] можна віднести невеликий вихід готового продукту. Крім того, спосіб не дозволяє одержати засіб з комплексною гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією. Задача винаходу є створення нового способу одержання комплексу біологічно активних речовин (БАР) з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією, який завдяки використанню як сировини трави нуту звичайного і проведення процесу при заданих параметрах забезпечує одержання ефективного засобу у формі рослинного екстракту з вираженою фармакологічною активністю, обумовленою комплексом біологічно активних речовин, вилучених саме таким способом, а заявлений спосіб є простим і економічно доцільним при промисловому здійсненні. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією шляхом трикратної екстракції подрібненої рослинної сировини водою при температурі 80°C з подальшим об'єднанням відфільтрованих екстрактів, упарюванням, осадженням спиртом етиловим, відокремленням осаду та сушінням, згідно з винаходом, як рослинну сировину використовують траву нуту звичайного (Cicer arietinum L.), першу екстракцію здійснюють при співвідношенні сировина:екстрагент 1:10 протягом 2,0 годин, другу та третю - 1:8 та 1:5 відповідно протягом 0,5 години кожна, екстракт упарюють до водного залишку, який очищують від полісахаридів спиртом етиловим 96 % при співвідношенні водний залишок: спирт етиловий 1:3 з подальшим сушінням до сухого залишку. Пошук нових видів рослин з заданою біологічною активністю дозволяє одержувати з них засоби, які розширюють арсенал існуючих лікарських препаратів і сприяють здійсненню індивідуального підходу до лікування хворих. Як рослинна сировина для заявленого способу авторами було обрано траву нуту звичайного (Cicer arietinum L.). В народній медицині нут використовується як протидіабетичний та в'яжучий засіб. Відваром з нуту поз 96689 4 бавляються від каменів у нирках та сечовому міхурі, компреси з молодих рослин виліковують запалення, покращують колір шкіри, попереджують шкіряні захворювання і знищують бородавки [3]. Авторами вперше було виявлено гепатопротекторну, регенеруючу та гемостатичну дію трави нуту звичайного, не відому з джерел інформації. Всі параметри заявленого способу визначено експериментальним шляхом з урахуванням біологічної активності одержаних комплексів, ефективності, доступності та нешкідливості реактивів, практичного відтворення способу у промислових умовах. Дослідним шляхом було визначено, що оптимальним екстрагентом для трави нуту звичайного є вода. Саме такий екстрагент у сукупності з рештою параметрів заявленого способу, а саме трикратною екстракцією сировини при загальному співвідношенні сировини до екстрагента 1:23 і тривалості першої екстракції - 2 години, кожної наступної - по 0,5 години при постійно підтримуваній температурі 80°C забезпечує інтенсифікування процесу екстрагування, що дозволяє максимально вилучати з сировини БАР, який має гепатопротекторну, регенеруючу та гемостатичну дією. Крім того, такий екстрагент вигідний з боку технологічних вимог до здійснення способу, бо є доступним, дешевим та екологічно безпечним. Сумарне співвідношення сировини до екстрагента 1:23 визначено експериментально та є оптимальним для вибраної сировини. Перший етап екстракції здійснюють при співвідношенні сировина:екстрагент 1:10 (з урахування коефіцієнту водопоглинання сировини, К=0,19), другий та третій при співвідношенні 1:8 та 1:5 відповідно. Менша кількість екстрагента на кожному етапі не дозволяє ефективно провести екстракцію, а більша кількість є нераціональною, тому що повна екстракція досягається заявленою кількістю екстрагента. Загальна тривалість усіх етапів екстракції складає 3 години і є достатньою для вичерпного вилучення з сировини комплексу біологічно активних сполук з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією. В результаті здійснення заявленого способу одержують комплекс БАР - порошок світлокоричневого кольору зі специфічним запахом, гіркуватий на смак, добре розчинний у воді, спиртоводних розчинах, практично не розчинний в ефірі та хлороформі. Заявлений спосіб здійснюється наступним чином. Подрібнену повітряно-суху траву нуту звичайного піддають трикратній екстракції гарячою водою при загальному співвідношенні сировина:екстрагент 1:23 та загальній тривалості екстракції - 3 години при температурі 80°C. Першу екстракцію здійснюють при співвідношенні сировина:екстрагент 1:10 протягом 2,0 годин, другу та третю - 1:8 та 1:5 відповідно протягом 0,5 години кожна. Одержані водні екстракти об'єднують, відфільтровують та упарюють до водного залишку, який очищують спиртом етиловим 96 % при співвідношенні водний залишок: cпирт етиловий 1:3 з подальшим сушінням до сухого залишку. Сухий екстракт подрібнюють. Вихід готового про 5 96689 дукту становить 20,0-21,0 % від повітряно-сухої сировини. Винахід ілюструється прикладами. Приклад 1. 1,0 кг подрібненої повітряно-сухої трави нуту звичайного залили 11,9 л гарячої води і екстрагували при перемішуванні та постійно підтримуваній температурі 80°C протягом 2,0 годин. Екстракт злили у приймальник. Процес повторили ще двічі порціями 8,0 л та 5,0 л екстрагенту по 0,5 години після кожного додавання екстрагенту. Одержані екстракти 9,9 л, 7,8 л, 4,9 л відповідно, об'єднали, упарили до 0,8 л. Водний залишок осаджували 2,4 л спиртом етиловим 96 %, осад відфільтровували та упарювали до повного висушування. Сухий екстракт подрібнювали. Вихід сухого екстракту склав 206,0 г, тобто 20,6 %. Приклад 2. Вивчення гепатопротекторної дії комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом, проводили на білих щурах масою 0,21-0,24 кг, на моделі гострого токсичного ураження печінки тетрахлорметаном за методикою B.C. Позднякова, Н.Г. Іванова [4]. Гостре токсичне ураження печінки відтворювали шляхом дворазового підшкірного введення 50 % олійного розчину 6 тетрахлорметану у дозі 0,8 мл на 0,1 кг маси тіла через кожні 24 години (протягом 2-х діб з проміжком у 24 год.) [5]. Досліджуваний екстракт та препарат порівняння силібор вводили тваринам за 1 годину до і через 2 години після введення тетрахлорметану. Тварини були розділені на 4 дослідних груп по 6 тварин в кожній: перша група - контрольна патологія; тваринам другої групи на тлі тетрахлорметанового ураження печінки вводили комплекс БАР трави нуту в дозі 25 мг/кг маси тіла тварини; тварини третьої групи поряд з тетрахлорметаном отримували в якості референспрепарату силібор у терапевтичній дозі 25мг/кг; четверта група - група інтактного контролю. Щурів декапітували на 3 добу з моменту першого введення тетрахлорметану. Вивчення біохімічних та функціональних показників стану печінки проводили через 24 год. після останнього введення тетрахлорметану. Активність аспартатамінотрансферази (АсАТ) і аланінамінотрансферази (АлАТ) визначали уніфікованим динітрофенілгідразиновим методом за допомогою стандартного набору реактивів. Рівень гемоглобіну, число еритроцитів і лейкоцитів визначали за загальноприйнятими методиками [6]. Результати біохімічних показників крові наведені у табл. 1. Таблиця 1 Вивчення гепатопротекторної дії одержаного за заявленим способом комплексу біологічно активних речовин трави нуту звичайного (n=6) Об'єкт дослідження Контрольна патологія Комплекс БАР трави нуту звичайного Силібор Інтактні тварини 111±4,5 АсАТ, мкмоль/год.мл 0,96±0,03 АлАТ, мкмоль/год.мл 1,14±0,02 13,4±0,10 129±3,0 0,48±0,02 0,60±0,03 12,21±0,10 12,98±0,06 130±3,0 135±4,0 0,48±0,03 0,40±0,02 0,59±0,02 0,56±0,03 Еритроцити, 12 х10 /л Лейкоцити, 9 х10 /л Гемоглобін, г/л 6,04±0,3 17,97±0,10 6,70±0,3 7,24±0,21 7,44±0,25 Аналіз даних табл. 1 свідчить, що комплекс БАР трави нуту звичайного, одержаний за заявленим способом, проявляє виражену гепатопротекторну дію, дещо поступаючись препарату порівняння силібор. У тварин другої групи спостерігається чітко виражена спрямованість до нормалізації активності вивчених ферментів (активність АлАТ в сироватці крові знизилась в 1,9 разу; АсАТ - в 2,0 рази), зростання числа еритроцитів і рівня гемоглобіну у порівнянні до тварин контрольної групи. Приклад 3. Вивчення регенеруючої дії комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом, проводили на білих щурах масою 0,180,22 кг, поділених на три групи на моделі гострого панкреатиту за методикою Герелюка І.П. та співавторів [7]. Гострий панкреатит відтворювали шляхом перорального введення тваринного жиру у дозі 10,0 г/кг та алкоголю у дозі 1,6 г/кг після 12годинного голодування з наступним піддаванням тварин імобілізаційно-холодовому стресу протягом 3 годин [7]. Тваринам першої групи, протягом 14 діб після відтворення гострого панкреатиту, вводили внутрішньочеревно розчин екстракту з трави нуту, одержаного за заявленим способом, у дозі 50 мг/кг маси тварини. Тварин другої групи після відтворення гострого панкреатиту не лікували. Третя група - інтактні тварини. Тварин декапітували через 14 діб з моменту першого введення тваринного жиру та алкоголю. Вивчення біохімічних показників крові визначали за допомогою аналізатора глюкози АГКМ-01, активність α-амілази - автоматичного аналізатора ACCENT-200 з використанням реактивів фірми PZ CORMAY S.A. (Польща). Результати біохімічних показників крові дослідних тварин наведені у табл. 2. 7 96689 8 Таблиця 2 Вивчення регенеруючої дії одержаного за заявленим способом комплексу біологічно активних речовин трави нуту звичайного (n=6) Група тваОб'єкт дослідження рин 1 Комплекс БАР трави нуту 2 Контроль 3 Інтактні тварини Аналіз даних табл. 2 свідчить, що комплекс БАР трави нуту звичайного, одержаний за заявленим способом, у 1,26 разу знижує вміст глюкози в крові і у 1,53 разу знижує активність амілази, а отже проявляє виражену регенеруючу дію на підшлункову залозу. Фармакологічну активність дії комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом, підтверджували шляхом проведення морфолого-анатомічного дослідження внутрішніх органів щурів. Мікроскопічне дослідження проводили на шматочках підшлункової залози, яку фіксували в формаліні з наступним виготовленням парафінових зрізів. Гістологічні препарати фарбували гематоксиліном-еозином. Наявність або відсутність патологічних змін в органах досліджуваних тварин визначали за допомогою мікроскопа МБР-1 при 200-, 400-, 800-разовому збільшенні [5, 6, 8]. У інтактних тварин (третя група) гістологічна будова підшлункової залози відповідає нормі: тканина підшлункової залози часточкової будови, ацинарна та острівкова, частини диференціюються чітко, помірне повнокров'я. У тварин другої групи морфологічно підтверджено гострий геморагічно-гнійний панкреатит з явищами панкреонекрозу: некроз паренхіми, декомплексація ацинарної частини, порушення часточкової будови, виражений набряк, інфільтрація тканини поліморфноядерними запальними клітинами. При вивченні гістологічних препаратів тварин першої групи спостерігався набряк стоми, з частковим здавленням панкреатичних острівців Лангерганса та розширенням міжчасточкових вивідних протоків, що свідчить про наявність запального процесу у тканинах підшлункової залози. На відміну від тварин другої групи, у тварин першої групи не спостерігалися масивні просякання еритроцитами, виражені некрози паренхіми та жирові некрози з формуванням абсцедуючих порожнин та секвестрів. Слід відмітити, що кровоносні судини повнокровні, при цьому збережена часточкова будова Глюкоза, ммоль/л Амілаза, од/л 8,18±0,09 10,28±0,18 5,08±0,09 215,25±11,11 328,70±10,12 78,01±3,10 ацинарної частини та острівкового апарату залози (як і у інтактних тварин), що свідчить про регенеруючу дію комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом. Приклад 4. Гемостатичну дію комплексу БАР трави нуту звичайного, одержаного за заявленим способом, вивчали на білих нелінійних щурах-самцях масою 190-200 г на моделі кровотеч із кінчика хвоста щура [5]. Водний розчин екстракту комплексу БАР трави нуту вводили внутрішньочеревно через зонд у дозах 80 мг/кг, 150 мг/кг, 200 мг/кг, 250 мг/кг та 300 мг/кг. Препарат порівняння, рідкий екстракт деревію вводили внутрішньочеревно через зонд у кількості 300 мг/кг маси щура, що відповідає кількості сухої речовини 150 мг/кг. Інтактним тваринам вводили дистильовану воду у кількості 1,5 мл на одного щура. Через 1 годину після введення комплексу БАР трави нуту звичайного тварин поміщали у прилад для фіксації дрібних лабораторних тварин і зрізали кінчик хвоста. Отриману краплю крові наносили на попередньо знежирене 96 % спиртом етиловим предметне скло. При ясному освітленні через краплю з інтервалом 2 секунди проводили вістрям голки до появи першої нитки фібрину. Час від появи краплі крові до появи першої нитки фібрину фіксували у секундах за допомогою секундоміру. Дію досліджуваного комплексу БАР на згортання крові оцінювали у порівнянні з даними інтактних тварин. Гемостатичну активність розраховували за формулою: t t A  інт експ  100  100 % , t інт де: tінт - середній час до появи нитки фібрину в інтактній групі; tексп - середній час до появи нитки фібрину в групах, що отримували досліджувану субстанцію; А - гемостатична активність, у %. Результати дослідження наведені у таблиці 3. 9 96689 10 Таблиця 3 Вивчення гемостатичої дії одержаного за заявленим способом комплексу біологічно активних речовин трави нуту звичайного (n=6) Об'єкт дослідження Доза, мг/кг Комплекс БАР трави нуту Комплекс БАР трави нуту Комплекс БАР трави нуту Комплекс БАР трави нуту Рідкий екстракт деревію Інтактні тварини Аналіз даних табл. 3 свідчить, що комплекс БАР трави нуту звичайного, одержаний за заявленим способом, проявляє виражену гемостатичну активність і перевищує дію референс-препарату на 23 % у найбільш терапевтично ефективній дозі - 80 мг/кг. Таким чином, заявлено новий спосіб одержання комплекс БАР трави нуту звичайного з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією. Засіб, одержаний за заявленим способом, є нетоксичним, без побічних дій, придатним до тривалого застосування, а отже є перспективним для використання в якості лікарської субстанції при створенні лікарських препаратів з вищезазначеним спектром фармакологічної активності. Заявлений спосіб може бути здійснений в умовах стандартного фармацевтичного підприємства, з використанням стандартного обладнання та екологічно безпечних реактивів. Спосіб передбачає використання доступної вітчизняної рослинної сировини. Заявлений спосіб дає змогу раціонально використовувати вітчизняні сировинні ресурси, є економічним, безпечним та легко відтворюваним на фармацевтичних підприємствах України. Комп’ютерна верстка Г. Паяльніков 80 150 200 300 300 Гемостатична активність, % 163,1 138,3 149,2 150,8 140,1 100,0 Джерела інформації: 1. Патент на винахід № 30879, Україна, МПК 7 А61К 9/20, А61Р 1/16, з. № 98063104, заявл. 16.06.1998, опубл. 16.06.2003, Бюл. № 6. 2. Патент на корисну модель № 23647, Україна, МПК (2006) А61К 36/00, заявл. 19.10.2006, опубл. 11.06.2007, Бюл. № 8. 3. Кьосев П.А. Полный справочник лекарственных растений. - М.: ЭКСМО-Пресс, 2001. - С. 236-237. 4. Поздняков B.C., Иванов Н.Г. Изменение функционального состояния у крыс при воздействии четыреххлористого углерода //Токсикология новых промышленных хим. веществ. - М.: Медицина, 1979. - Вып. 15. - С. 87-90. 5. Доклінічні дослідження лікарських засобів /За ред. член. - кор. АМН України О.В. Стефанова. - К., 2001.-528 с. 6. Лабораторные методы исследования в клинике /Под ред. В.В. Меньшикова. - М.: Медицина, 1987. - С. 189-190. 7. Патент на изобретение № 01497634, RU. Способ моделирования острого панкреатита / Герелюк И.П., Збирак Н.П., Горбачевский Б.П., Збирак И.Н. Опубл. 30.07.1989. 8. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. - М., 1982. – 304 с. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for the preparation of a complex of bioactive substances with hepatoprotective, revivifying and hemostatic action

Автори англійською

Chaerkashyna Alina Viktorivna, Kovaliov Volodymyr Mykolaiovych, Kovaliov Serhii Volodymyrovych, Hrytsyk Andrii Romanovych, Kononenko Nadia Mykolaivna, Tiupka Tetiana Ivanivna, Shevtsov Ihor Ivanovych

Назва патенту російською

Способ получения комплекса биологически активных веществ с гепатопротекторным, регенерирующим и гемостатическим действием

Автори російською

Черкашина Алина Викторовна, Ковалёв Владимир Николаевич, Ковалев Сергей Владимирович, Грицик Андрей Романович, Кононенко Надежда Николаевна, Тюпка Татьяна Ивановна, Шевцов Игорь Иванович

МПК / Мітки

МПК: A61P 1/00, A61P 7/00, A61K 36/48, A61K 31/00

Мітки: дією, регенеруючою, спосіб, активних, гепатопротекторною, комплексу, одержання, речовин, гемостатичною, біологічно

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/5-96689-sposib-oderzhannya-kompleksu-biologichno-aktivnikh-rechovin-z-gepatoprotektornoyu-regeneruyuchoyu-ta-gemostatichnoyu-diehyu.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гепатопротекторною, регенеруючою та гемостатичною дією</a>

Подібні патенти