Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з антиоксидантною та протизапальною дією

Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з антиоксидантною та 3 28141 відсутності побічних ефектів у засобів рослинного походження. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з антиоксидантною та протизапальною дією шляхом неодноразової екстракції рослинної сировини гарячою водою з подальшим упарюванням досуха одержаного сумарного екстракту, корисною моделлю передбачено, що в якості рослинної сировини використовують листя кук урудзи, краще природного ендоспермального мутанту цукрової кукурудзи з носієм гену Su-1, екстракцію здійснюють у два етапи при сумарному співвідношенні сировини до екстрагента 1:20, причому на першому етапі це співвідношення становить 1:12, а на другому -1:8. Заявлений спосіб передбачає використання в якості рослинної сировини листя кукурудзи. В народній та офіціальній медицині відомі дані про використання стовпчиків з приймочками кукурудзи в якості сечогінного, жовчогінного та гемостатичного засобу. Жовчогінну дію проявляє також кукурудзяна олія. [Современная фитотерапия. Под ред. В. Петкова. София, 1988, «Медицина и физкультура» С. 278-280.] Використання листків кукурудзи як лікарської сировини для одержання лікувальних засобів, зокрема, з антиоксидантною та протизапальною дією є невідомим з джерел інформації та неочевидним. У ході експериментів були досліджені комплекси біологічно активних речовин, одержаних за заявленим способом, з листя кукурудзи різних сортів. За рівнем антиоксидантної та протизапальної активності одержаного продукту кращим виявився природний ендоспермальний мутант цукрової кукурудзи з носієм гену Su-1. Цей сорт пристосований для вирощування в Україні і є достатнім джерелом сировини для здійснення заявленого способу. Заявлений спосіб передбачає використання листя кукурудзи у період молочно-воскової та воскової стиглості зернівок, що дозволяє одержувати дешеву і доступну сировину під час збору врожаю. Експериментальним шляхом було визначено, що оптимальним екстрагентом для одержання комплексу біологічно активних сполук антиоксидантної та протизапальної дії з вибраної сировини є гаряча вода, краще при t=90°C. Цей екстрагент також вигідний з боку технологічних вимог до здійснення способу, бо є доступним, дешевим та екологічно безпечним. Сумарне співвідношення сировини до екстрагента 1:20 знайдено експериментально і є оптимальним для вибраної сировини. На першому етапі екстракції це співвідношення становить 1:12 (враховується поглинання частини екстрагента сировиною), а на другому - 1:8. Менша кількість екстрагента на кожному з етапів не дозволяє ефективно провести екстракцію і створює труднощі те хнологічного характеру при обробці великої кількості сировини малим обсягом розчинника (закупорка зливної 4 горловини тощо). Більша кількість екстрагента є нераціональною, тому що необхідна екстракція досягається заявленою кількістю екстрагента. Збільшення останнього веде до зниження концентрації екстракту і, як наслідок, до збільшення енергетичних втрат і часу на упарювання та висушування екстракту. Використання сполучення нетрадиційного виду рослинної сировини і усіх параметрів заявленого способу дозволяє одержати цільовий продукт - комплекс біологічно активних сполук, який має антиоксидантну та протизапальну активність. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином. Зібране у період молочно-воскової та воскової стиглості зернівок висушене і подрібнене до часток розміром 3-5мм листя кукурудзи завантажують у реактор з мішалкою і паровою сорочкою, заливають гарячою водою 90°С у співвідношенні сировина : екстрагент 1:12. Екстракцію проводять на протязі 2 годин при перемішуванні і постійно витриманій температурі 90°С. Для найбільш повного вилучення комплексу біологічно активних сполук антиоксидантної та протизапальної дії одну й ту ж порцію сировини піддають екстракції двічі. При другій екстракції відношення сировини до екстрагента становить 1:8. Одержані зливи з'єднують і упарюють на вакуумно-випарювальному апараті до повного висушування. Сухий екстракт подрібнюють. Готовий продукт являє собою брунатний або темно-брунатний гігроскопічний порошок без запаху, гіркуватого смаку, який містить комплекс біологічно активних сполук і має антиоксидантну та протизапальну активність. Вихід готового продукту становить 28,5-30,5% від повітряно сухої сировини. Заявлений спосіб ілюструється наступними прикладами. Приклад 1 2,0кг подрібненого повітряно-сухого листя кукурудзи з носієм гену Su-1 завантажують у реактор з мішалкою і паровою сорочкою, заливають 24л гарячої води 90°С. Екстракцію повторюють, додаючи 18л гарячої води. Одержані екстракти, 21, 5л і 22,0л відповідно, об'єднують і упарюють на вакуум-випарювальному апараті до повного висушування. Сухий екстракт подрібнюють. Вихід цільового продукту 608,0г, тобто 30,4% від початкової кількості повітряносухої сировини (2,0кг). Приклад 2 Вивчення антиоксидантних властивостей комплексу біологічно активних речовин (БАР), одержаних за заявленим способом, проводили на білих щурах масою 200-220г в умовах гострого тетрахлорметанового гепатиту, провідною патогенетичною ланкою якого є інтенсифікація процесів перекисного окислення ліпідів (ПОЛ). Дослідження проведене у порівнянні з антиоксидантом вітаміном Е у дозі 50мг/кг і гепатопротектором силібором у дозі 50мг/кг. Дослідні тварини одержували перорально водний розчин комплексу БАР у дозах 20мг/кг та 30мг/кг і 5 28141 референс-препарати, а тварини інтактного контролю - еквівалентну кількість води. Через 1 годину тваринам дослідних груп і групи контрольної патології вводили внутрішньошлунково 50% олійний розчин тетрахлорметану з розрахунку 0,4мл на 100г маси. На третій день тварин наркотизували і виводили з експерименту. Потім виділяли у ни х печінку і зважували її для розрахунку показника гемодинаміки органу - масового коефіцієнту печінки (МКП). Інтенсифікацію вільнорадикальних процесів у печінці оцінювали за вмістом у гомогенаті органу продуктів ПОЛ: дієнових кон'югантів (ДК) та ТБК-реактантів. Ступінь антиоксидантного захисту вивчали за рівнем відновленого глутатіону (GSH). Результати дослідження антиоксидантної дії досліджуваного комплексу БАР представлені в табл.1. 6 Досліди проводили в умовах in vivo на безпородних щурах 180-200г та нелінійних мишах масою 18-22г. Набряк викликали субплантарним введенням 2% суспензії зимозану в кількості 0,1мл через 1 годину після перорального введення досліджуваного комплексу БАР та препаратів порівняння вольтарену та альтану. Про розвиток набряку судили за збільшенням об'єму лапи дослідних тварин, який вимірювали у динаміці до та через 0,5; 1; 2 і 3 години після введення флогогену за допомогою механічного онкометру. Активність досліджуваних речовин визначали за здатністю зменшувати набряки у піддослідних тварин у порівнянні з контрольними. Дані дослідів наведені у таблиці 2. Вивчення протизапальної активності комплексу Б способом на моделі зимозанового набряку у щурів у порівнян Таблиця 1 Години роз Умови досліду Вивчення антиоксидантної дії БАР, одержаного за 0,5год 1год заявленим способом, у порівнянні Контрольна та вітаміном Е з силібором 18,60±0,76 21,80±0,96 D V, ум. од. патологія Доза Умови досліду n МКП GSH, ум. од. Комплекс БАР, D V, ум. од. ДК, мкмоль/г ТБК, мкмоль/г 15,60+1,53 17,20±0,96* мг/кг 20мг/кг Активність, % 16,13 21,10 Інтактний 6 3,55±0,09 22,16±4,41 32,27±5,24 87,61±34,95 Комплекс БАР, D V, ум. од. 15,20±2,11 15,40±1,92* контроль 30мг/кг Активність, % 18,28 29,36 Контрольна 6 4,22±0,16 65,46±13,94 33,37±1,80 161,11±11,17 Вольтарен, 16,00±0,38 18,80±0,9* патологія D AV, ум. од. 8мг/кг Вітамін Е 50 6 4,07±0,12* 55,25±11,29* 31,44±2,13 % 58,55±9,72* Активність, 13,98 13,76 Силібор 50 6 4,16±0,11* 42,49±12,23* мг/кг 29,58±2,05од. 72,22±10,96* Альтан, 1 15,2±1,15* 17,4±0,76* D V, ум. Комплекс 20 6 3,98±0,13* 46,86*±10,94 36,67±6,49 % 82,90±5,99* Активність, 18,28 20,18 БАР 30 6 4,48±0,11* 39,20±9,35* 28,60±1,76* 47,86±13,03* Примітки: Примітка: D V - відносне збільшення величини набряку * - відхилення показника достовірно стосовно групи контрольної патології (Р