Спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю

Корисна модель відноситься до фармації та медицини, а саме до способів одержання біологічно активних речовин з рослинної сировини. До серйозних життєво небезпечних хвороб сучасності можна віднести захворювання нирок та печінки, зокрема ниркову недостатність. За даними останнього дворічного періоду у світі на 1млн. населення припадає до 173 випадків гострої ниркової недостатності, яка становить від 7 до 23% від усіх випадків госпіталізації, і часто переходить у хронічну форму. Летальність при гострій нирковій недостатності складає 50%. В людей похилого віку ниркові хвороби знаходяться на четвертому місці серед головних причин смерті. При консервативному медикаментозному лікуванні захворювань нирок основні зусилля концентруються на зниженні утворення кінцевих продуктів білкового обміну та посиленні діуретичної функції нирок. Такі якості поєднані в гіпоазотемічних препаратах. Захворювання печінки займають значне місце (понад 40%) серед нозологічних форм, які відносяться до патології травної системи. Це пов'язано у першу чергу з загостренням екологічного стану, ураженнями печінки при гострих отруєннях та медикаментозному впливу тощо. Прогнозується збільшення зазначених захворювань на 30%. В зв'язку з цим постає необхідність створення гіпоазотемічних та гепатозахисних засобів, які б мали досить виражену лікувально-профілактичну дію і одночасно не справляли негативного впливу на функції життєво важливих органів і систем при тривалому їх вживанні. З цих позицій представляють інтерес комплексні сумарні фітопрепарати, які містять у концентрованому вигляді біологічно активні речовини, що забезпечують специфічну дію на нирки, печінку і організм у цілому. Відомий спосіб одержання засобів, які мають гіпоглікемічну активність [1]. Згідно з зазначеним способом подрібнену траву квасолі золотавої піддають екстракції 50% етанолом при співвідношенні сировина : екстрагент 1:8-1:10, одержаний екстракт упарюють до 1/18-1/20 попереднього об'єму, водний залишок очищують послідовно спиртом і хлористим метиленом. До недоліків відомого способу можна віднести моноспрямовану фармакологічну активність кінцевого продукту та значні витрати етанолу внаслідок введення додаткової операції очищення екстракту спиртом. За прототип вибраний спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин, що має гепатопротекторну дію [2]. Спосіб здійснюють шляхом екстрагування подрібненої сухої трави гороху посівного 10-кратною кількістю 49-51% етанолу протягом 11-12 годин. Одержаний екстракт упарюють до водного залишку, який очищують від речовин лшофільної природи хлористим метиленом при співвідношенні водний залишок : хлористий метилен 3:4 з подальшим сушінням до сухого залишку. Недоліком способу за прототипом можна вважати одержання кінцевого продукту з вузько спрямованою фармакологічною дією та надмірні витрати хлористого метилену. Завдання, що вирішується даним винаходом, полягає у створенні способу одержання комплексу біологічно активних речовин (БАР) з широким спектром фармакологічної активності, шляхом екстракції листя робінії псевдоакації етанолом при заявленій сукупності операцій і технологічних параметрів, що дозволяє одержати сухий екстракт з вираженою гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю, який може бути використаний при створенні нових засобів для лікування нирок та токсичних уражень печінки. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання комплексу біологічно активних речовин з гіпоазотемічною, гепатопротекторною, антиоксидантною та протизапальною активністю, шля хом екстракції подрібненої рослинної сировини етанолом, упарювання до водного залишку, очищення хлороформом з подальшим сушінням, згідно з винаходом передбачено, що в якості рослинної сировини використовують листя робінії псевдоакації, екстракцію здійснюють 12-кратною кількістю 29-31% етанолу протягом 13-15 годин, одержаний після упарювання водний залишок додатково відстоюють і фільтрують, а очищення хлороформом здійснюють при співвідношенні водного залишку до хлороформу як 2:1. Параметри заявленого способу визначені дослідним шляхом. Вибір етанолу в якості екстрагента обумовлений його здатністю вилучити з листя робінії псевдоакації комплексу БАР з заданим спектром фармакологічної активності. При здійсненні серії експериментів з визначення концентрації етанолу було встановлено, що вичерпна екстракція необхідного комплексу БАР забезпечується 2931% етанолом. При концентрації етанолу, нижчим за 29%, зменшується вихід екстрактивних речовин з сировини. Збільшення концентрації етанолу понад 31% недоцільне внаслідок забезпечення вичерпного екстрагування комплексу БАР з заданими властивостями етанолом у заявленому інтервалі концентрацій. Оптимальним екстрагентом є 30% етанол. Визначені експериментальним шляхом такі ознаки, як кількісне співвідношення сировини до екстрагенту 1:12 (12-кратна кількість екстрагенту) та тривалість екстракції протягом 13-15 годин, є необхідними і достатніми для ефективного здійснення заявленого способу і одержання кінцевого продукту з очікуваними видами активності. Очищення одержаного після упарювання екстракту у вигляді водного залишку здійснюється його послідовним відстоюванням, що призводить до осадження нерозчинної фракції, відокремлення осаду шляхом фільтрування та очищення хлороформом у співвідношенні водний залишок : хлороформ як 2:1. Експерименти показали, що саме така сукупність зазначених показників забезпечує достатній рівень чистоти кінцевого продукту. Виявлений спосіб дозволяє за допомогою відомих операцій, але здійснених у заданій послідовності при заданих параметрах, одержати з листя робінії псевдоакації комплекс біологічно активних речовин, який має гіпоазотемічну, гепатопротекторну, антиоксидантну та протизапальну активність. Спосіб здійснюється таким чином. Подрібнену до розміру часток 2,0-3,0мм сухе листя робінії псевдоакації екстрагують методом перколяції 12-кратною кількістю 29-31% етанолу протягом 13-15 годин. Одержаний екстракт упарюють під вакуумом при температурі 60-70ºС до водного залишку, який охолоджують при кімнатній температурі та відстоюють в холодильнику на протязі 12 годин. Осад відфільтровують, а водний залишок очищують від речовин ліпофільної природи хлороформом у співвідношенні водний залишок - хлороформ 2:1 з подальшим сушінням до сухого залишку. Одержують сухий екстракт листя робінії псевдоакації (акації білої) - гігроскопічний порошок від світлокоричневого до коричневого кольору. Вихід готового продукту 7-9%. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 5кг подрібненого до 2,0-3,0мм сухого листя робінії псевдоакації екстрагують 60л 30% етанолу у перколяторі протягом 14 годин зі швидкістю збору екстракту 4л/год. Одержаний екстракт упарюють при температурі 65ºС під вакуумом у вакуум-циркуляційному апараті при розрідженні 550мм рт. ст. до обсягу водного залишку 3,0л. Водний залишок після охолодження до кімнатної температури поміщують у холодильник на 12 годин, після чого осад відокремлюють. Обробку очищеного водного залишку хлороформом проводять в реакторі з мішалкою в 4 етапи, додаючи послідовно по 1,5л хлороформу на кожному етапі з подальшим перемішуванням протягом 10 хвилин і відстоюванням протягом 2 години на кожному етапі. Одержаний водний концентрат сушать у вакуум-сушильній шафі до отримання сухого екстракту. Приклад 2. Гіпоазотемічну активність комплексу БАР з листя робінії псевдоакації, одержаного за заявленим способом, вивчали на моделі гострої ниркової недостатності, викликаної хроматом калію. Дослід проводили на 24 білих безпородних щурах масою тіла 180-210г. Гостру ниркову недостатність відтворювали шляхом підшкірного введення 2,5% розчину хромату калію у кількості 0,7мл/кг. Як препарат порівняння використовували препарат рослинного походження леспефлан. Тваринам після введення хромату калію протягом тижня внутрішньошлунково вводили досліджувані препарати: комплекс БАР з листя робінії псевдоакації у дозі 0,005мл/кг, леспефлан - 2мл/кг. Щурам групи контрольної патології вводили відповідну кількість води. За контроль взято 6 здорових щурів. На 8 день експерименту в сироватці крові дослідних тварин визначали концентрацію креатиніну та сечовини. Результати експерименту наведені у таблиці 1. Таблиця 1 Гіпоазотемічна активність комплексу БАР з листя робінії псевдоакації, одержаного за заявленим способом, на моделі гострої ниркової недостатності у щурів (n=6) Показники Інтактний контроль Контрольна патологія Креатинін мкмоль/л Сечовина ммоль/л 63,80±3,53 4,13±0,12 185,23±26,56* 23,72±2,48* Комплекс БАР робінії псевдоакації, Леспефлан, 2мл/кг 0,005мл/кг 102,68±7,50** 120,97±21,06** 10,92±1,67** 14,38±3,51** Примітки: * - відхилення показника достовірне щодо інтактного контролю, р